一株高雄山虫草的分子鉴定

[目的]利用生物信息学方法初步探讨虫草属日本拟青霉的分类地位。[方法]提取日本拟青霉的基因组,并利用通用引物ITSL和ITS4采用PCR技术扩增rDNA18S-28S ITS序列。采用Clustalx1.83和MEGA5软件构建系统发育树,生物信息学比较分析确定其分类地位。[结果]PCR扩增产物为603 bp。将日本拟青霉重新命名为雪花高雄山虫草(Cordyceps takaomontana strain JLsnow)。将虫草重新分类,并对该类群及其特征进行了描述。[结论]从分子水平上说明日本拟青霉与其他虫草之间的差异,该研究为虫草属真菌的分类提供新思路。     

冬虫夏草对免疫抑制模型小鼠免疫功能调节作用的研究

目的 研究冬虫夏草对免疫抑制模型小鼠的免疫功能调节作用。方法 通过腹腔注射环磷酰胺建立小鼠免疫抑制模型，观察小鼠日常状态、体质量、胸腺指数和脾脏指数变化，全自动血液流变测试仪检测血液免疫细胞改变，ELISA法检测脾脏中IL-2、IL-6、TNF-α及INF-γ细胞因子含量变化。结果 冬虫夏草可改善免疫抑制小鼠日常状态，提升体质量、饮食饮水量、胸腺指数和脾脏指数，增多白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、红细胞、血红蛋白、血小板的数量，提高IL-2、IL-6、TNF-α及IFN-γ含量，以上指标与模型组比较，差异均具统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论 冬虫夏草对免疫抑制模型小鼠的免疫功能有促进作用。     

一种蛹虫草固体饮料对小鼠肠道菌群的影响

[目的]研究蛹虫草速溶粉(佑元茶)对小鼠肠道菌群的影响。[方法]利用抗生素(青霉素钠)构建肠道菌群失调小鼠模型,以正常小鼠为对照,采用菌落计数法考察一种蛹虫草固体饮料对肠道菌群失调小鼠的肠道修复作用。[结果]蛹虫草固体饮料的高、中剂量组小鼠的体重显著高于其他组(P0.05)。高、中、低3个剂量组小鼠肠道中的益生菌乳酸杆菌和双歧杆菌数量均显著高于模型组,且条件致病菌肠球菌数量均显著少于模型组(P0.05);3个剂量组中,中、高剂量组与低剂量组间亦存在显著性差异(P0.05),但中高剂量组间差异不明显。[结论]蛹虫草固体饮料对于抗生素干扰引起的肠道菌群失调具有较好的修复作用,可调节并保持肠道微生态菌群的平衡。     

GC法同时测定蝉花中三种脂肪酸含量

分析江苏茅山地区蝉花(Isaria cicadae Miquel)中脂肪酸的组成,建立了同时测定蝉花中十六酸甲酯、油酸甲酯和亚油酸甲酯3种脂肪酸含量的方法。采用气相色谱-质谱联用法分析蝉花中脂肪酸的组成,并用气相色谱法对其主要脂肪酸进行定量分析。结果表明,蝉花中主要有8种脂肪酸,十六酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸甲酯分别在50~500μg/m L(r=0.999 9)、100~1 000μg/m L(r=0.999 5)、20~200μg/m L(r=0.999 3)线性关系良好,平均回收率分别为97.66%、98.13%、97.33%,RSD分别为1.02%、0.73%、1.03%(n=9)。     

蛹虫草与其他天然抗氧化剂协同抗氧化作用研究

[目的]研究在蛹虫草提取液中分别按不同比例添加灵芝、香菇、猴头、紫苏和银杏提取液后组成的复合液抗氧化活性的情况变化。[方法]用微波法制备提取液,将灵芝、香菇、猴头、紫苏以及银杏提取液中的1种、2种或3种按不同的体积比与蛹虫草提取液组合,测定复合液总还原能力和清除羟自由基能力,并与单一提取液的测定结果相比较。[结果]蛹虫草提取液A与紫苏提取液E、银杏提取液F组合而成的复合液抗氧化性较好,其余组合抗氧化活性相对于单一提取液均有不同程度提高。[结论]食药用菌提取液与药用植物提取液组合而成的复合液具有较高的抗氧化活性,且大多数复合液的抗氧化活性好于单一提取液。     

蚕蛹虫草人工培养的关键技术

为蚕蛹虫草的规模化生产提供技术支撑,以野生北冬虫夏草菌种为接种材料,以家养的活体桑蚕蛹为寄主,研究了蚕蛹虫草菌种制备、接种、发菌至出草的人工培养条件。结果表明:接种前削去蚕茧后放置2d,可有效去除病蛹及生命体征弱的蚕蛹,能在源头上控制污染;接种的蚕蛹虫草液体菌丝的活度越高,接种后的蚕蛹僵化越快;接种部位选择蚕蛹翼翅正后方与第3环节交叉点,易操作且蚕蛹体液和菌液不易溢出;菌丝完成营养生长后,给予300lx光照和10℃温差刺激(300lx光照22℃培养14h,黑暗13℃培养10h为周期)培养7~10d能有效促进蚕蛹虫草菌丝转色和子座的形成,在此条件下出草率达98.5%,虫草平均鲜重达1.25g。     

基于反向分子对接的虫草素和三磷酸虫草素的生物活性

分别采用idTarget、Pharm Mapper在线反向分子对接软件预测虫草素和三磷酸虫草素的靶标蛋白(药效团匹配蛋白),用Ledock分子对接软件模拟虫草素、三磷酸虫草素与靶标蛋白的结合构象,用Lig Plus软件分析结合构象活性口袋内残基与配体的相互作用。反向分子对接结果表明:三磷酸虫草素与靶标蛋白的自由结合能比虫草素与靶标蛋白的自由结合能低。分子对接结果表明:与虫草素相比,三磷酸虫草素与靶标蛋白活性口袋内的氨基酸残基可形成更多的氢键,且三磷酸虫草素和靶标蛋白有较好的几何匹配,其自由结合能也较低,其结合构象更稳定。根据正向、反向分子对接结果,认为三磷酸虫草素是虫草素进入人体内发挥生物活性的主要物质。     

蛹虫草CmKexin基因克隆和菌丝体中表达检测

为了探讨蛹虫草类枯草杆菌蛋白酶(Subtilisin-like protease)的表达特性,以真菌蛹虫草菌丝体为研究对象,通过RT-PCR获得蛹虫草CmKexin基因的ORF序列,并进行序列分析。应用Northern杂交和Real-time PCR方法,检测蓝光照射后蛹虫草菌丝体中CmKexin基因的转录情况。结果获得蛹虫草CmKexin基因的ORF序列。对翻译蛋白质产物CmKexin进行生物信息学分析,表明该蛋白质含1个属蛋白转化酶的肽酶S8家族功能域(143~429)和1个前体蛋白转化酶P功能域(514~600),符合真菌类枯草杆菌蛋白酶的特征。蛹虫草菌丝体在黑暗预培养4 d后再蓝光照射,Northern Blotting和Real-time PCR检测均可得到相同的结果,即在持续的蓝光照射48~50 h时,出现CmKexin基因的瞬时大量转录。而其他时间内均未检测到该基因的大量转录。试验结果将为蛹虫草类枯草杆菌蛋白酶的利用提供理论依据。     

气相色谱法测定蝉花中角鲨烯的含量

[目的]建立毛细管气相色谱(GC)测定蝉花中角鲨烯含量的方法。[方法]采用气相色谱法测定蝉花中角鲨烯,并对不同部位天然蝉花的角鲨烯含量进行比较,确定蝉花中角鲨烯含量测定的最佳条件。[结果]1 g蝉花经超声波提取后,经1 m L 0.5 mol/L的氢氧化钠-甲醇溶液40℃皂化5 min,再经正已烷萃取净化,采用GC法测定角鲨烯含量。该方法在角鲨烯质量浓度为21.43~214.30μg/m L(r=0.999 2)范围内线性关系良好,方法精密度良好(RSD=3.71%),加标回收率为77.80%~97.32%,平均加标回收率(n=9)为88.10%。[结论]气相色谱法简单快速,污染小,检测灵敏度高,可用于蝉花中角鲨烯含量的测定。     

不同培养基培育蛹虫草中的虫草素和腺苷含量测定

虫草素和腺苷是蛹虫草的重要活性成分,通过高效液相色谱(HPLC)法测定不同培养基培育蛹虫草中的虫草素和腺苷含量,筛选能生产高品质蛹虫草的培养基。测定结果表明,用不同培养基培育的蛹虫草子实体中,其虫草素和腺苷含量存在显著差异,总体表现为粳米+家蚕蛹浸提液培养基>糯米+家蚕蛹浸提液培养基>粳米培养基>糯米培养基,其中用粳米+家蚕蛹浸提液培养基培育蛹虫草子实体中的虫草素和腺苷质量比分别高达15.37 mg/g和39.96 mg/g。此外,相同培养基培育的蛹虫草子实体、菌丝体和培养基质中的虫草素与腺苷含量存在极显著差异,总体表现为子实体>菌丝体>基质。试验结果表明,粳米培养基中添加家蚕蛹浸提液可显著提高蛹虫草中的虫草素和腺苷含量。