转基因饲料对雄性小鼠生殖系统影响的研究

目的:研究转基因饲料对雄性小鼠睾丸组织学结构的影响。方法:健康状况良好的昆明小鼠喂养30 d后将生殖器官成熟的雄性小鼠分为5组,分别为对照组两组(下面简称普I(30 d)、普Ⅱ(60 d)),实验组为转基因I、转基因Ⅱ、转基因Ⅲ(下面简称为转I(30 d)、转Ⅱ(30 d)、转Ⅲ(60 d))三组。对照组喂食非转基因饲料,实验组喂食转基因饲料。超薄切片透射电镜观察对照组和实验组内各小鼠的睾丸超微结构。结果:实验结果表明对照组超微结构基本正常,而实验组睾丸组织结构有一定程度的受损,电镜切片显示生殖细胞内的高尔基体、线粒体、内质网均呈现不同程度的损伤。     

鸡传染性支气管炎病毒的研究进展

鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis,IB)是鸡的一种急性、高度接触性传染病,它主要侵害呼吸系统、泌尿生殖系统和消化系统。本病呈世界性分布     

前沿动态

细胞壁合成底物运送分子机理研究重要进展细胞壁是由纤维素、半纤维素和果胶构成的复杂多糖网络结构,也是植物膨压驱动细胞生长的物质基础。除纤维素在质膜上合成外,其他多糖主要在高尔基体内合成。     

大豆根瘤侵染细胞发育中高尔基体的变化

为了探讨高尔基体与细菌增殖和周膜扩展的关系,用电子显微镜研究了大豆根瘤侵染细胞发育中高尔基体的变化.结果表明:幼龄侵染细胞中有高尔基体,但在成熟和衰老的侵染细胞中却几乎没有这种结构.高尔基体随幼龄侵染细胞中细菌的增多而增多,它们主要位于细菌附近.这些高尔基体的生理活性较高,不断向周围的细胞质分泌含有纤维状物质的小泡,有的小泡还在向细菌运动.一些小泡位于细菌的周膜上,其附近细菌的周膜常向外形成隆起,并有纤维状物质出现在其中.由此说明,大豆根瘤侵染细胞中的高尔基体参与了细菌的增殖和周膜的扩展.     

小鼠RSP3基因序列分析及其亚细胞定位

衣藻RSP3是一个鞭毛结构蛋白,目前有关RSP3相关研究主要集中在衣藻上,而对其在哺乳动物中的同源基因的蛋白定位及功能研究甚少。本研究对各个物种的RSP3氨基酸序列进行比对分析,在用SMART软件预测小鼠RSP3结构域的基础上构建了小鼠RSP3真核表达载体,并在CHO细胞中成功表达,应用荧光共定位技术研究小鼠RSP3与微管、内质网及高尔基体的关系。结果表明,小鼠RSP3比衣藻RSP3在N端多出127个氨基酸,两者都含有一个RSP3结构域,RSP3结构域是一个微管结合结构域,而且在进化中高度保守。在CHO细胞中表达的小鼠RSP3并不直接与微管结合,也不定位在内质网或高尔基体,进一步研究发现其聚集分布于细胞质基质中,而且主要分布在细胞核的周围。说明RSP3在进化中较为保守,但在哺乳动物中的分布和功能可能与在衣藻中有所不同。     

狂犬病病毒M蛋白胞内合成和分布初步研究

【目的】狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)是一种主要由核蛋白(N)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、糖蛋白(G)、依赖RNA的RNA聚合酶蛋白(L)5种结构蛋白组成的高度嗜神经性病毒。RABV基因组RNA与N蛋白、P蛋白和L蛋白组成核糖核蛋白复合体(RNP),M蛋白在调控RABV病毒结构蛋白的合成和装配过程中起重要作用。但RABV不同毒株M蛋白胞内合成、分布场所及其是否存在差异尚不清楚。研究不同RABV毒株M蛋白与内质网、高尔基体以及M蛋白与G蛋白、M蛋白与RNP在N_2A和BHK细胞内的共定位,以期确定RABV M蛋白的胞内合成途径和分布场所。【方法】测定RABV不同毒株(CVS-11、SRV-9、PB4)在N_2A或BHK细胞的TCID_(50),以相同的MOI接毒,通过免疫荧光研究M蛋白与内质网、高尔基体的共定位,以及M蛋白与G蛋白、M蛋白与RNP(为N蛋白代表)的共定位。【结果】RABV不同毒株效价存在一定差异。在N_2A和BHK细胞中,不同RABV毒株的M蛋白与内质网、高尔基体均存在共定位;M蛋白与G蛋白、M蛋白与N蛋白也存在共定位,但M蛋白与G蛋白主要共定位于内质网、高尔基体上,而M蛋白与N蛋白主要共定位在胞浆中。【结论】RABV M蛋白在胞内主要通过内质网-高尔基体途径合成加工。研究结果明确了RABV M蛋白胞内合成分布部位,为进一步研究RABV病毒粒子的装配和出芽过程丰富了数据。     

伪狂犬病病毒UL56蛋白与宿主蛋白Nedd4相互作用的研究

伪狂犬病病毒(PRV)UL56蛋白(pUL56)属于Ⅱ型膜蛋白。近期研究结果表明PRVpUL56与PRV对啮齿动物的致病性相关。为揭示PRVpUL56与宿主相互作用的分子基础,本研究通过免疫共沉淀(Co-IP)试验确定了pUL56与神经前体细胞表达的发育下调蛋白4(Nedd4)存在相互作用。进一步,利用激光共聚焦试验确定过表达pUL56与Nedd4在转染HEK293T细胞的高尔基体存在共定位。通过互作,pUL56可以将细胞质分布的Nedd4重新定位于高尔基体。前期研究表明,含有WW结构域的宿主蛋白可以与含有PPxY(PY)基序的病毒蛋白互作。因此,本研究构建了pUL56PY基序丙氨酸突变体(PPxY/AAxY),利用Co-IP试验对pUL56突变体和Nedd4相互作用进行验证,结果表明随着pUL56PY基序突变的增加,蛋白互作能力逐渐减弱。此外,pUL56通过其PY基序显著下调Nedd4的表达。这些结果证实了PRVpUL56与Nedd4主要通过WW结构域/PY基序模式发挥相互作用,并下调Nedd4的表达。因此,本研究为阐明PRVpUL56与宿主相互作用的分子机制提供了参考依据。     

体外培养牛腔前卵泡卵母细胞的超微结构

直径约100μm牛腔前卵泡在无血清下体外培养15d。超微结构研究显示，培养前腔前卵泡卵母细胞微绒毛短小，分布均匀。胞质内细胞器致密而均匀，线粒体多为长或圆形，嵴较少，高尔基体、脂滴稀少，未见有皮质颗粒出现。培养6d时，微绒毛略变粗长，但数量减少。胞质内细胞器，由近核分布向胞质中央区转移，线粒体形态丰富，基质电子密度极高。培养15d腔前卵泡卵母细胞微绒毛增多，变长，斜向或垂直插入已经形成的透明带中。线粒体增多，大小不等，形态各异，胞质中区有溶酶体样物质及零星的皮质颗粒出现。电镜研究表明，体外培养与体内正常发育腔前卵泡卵母细胞超微结构变化规律基本相似。     

猪雌性生殖道黏膜显微和超微结构观察

应用组织学方法和电镜技术研究了雌性成年猪生殖道黏膜显微和超微结构的特征。试验选用成年长白×大约克夏二元杂交母猪20头,通过光镜和透射电镜分别观察了母猪的输卵管、子宫和阴道的黏膜结构特征。结果显示成年母猪的生殖道黏膜由上皮、固有膜和黏膜肌层等构成,输卵管、子宫角、子宫体和子宫颈黏膜的上皮为单层柱状上皮,上皮的游离面含有纤毛和微绒毛,固有膜和上皮间含有丰富的淋巴细胞。淋巴细胞在上皮内移行过程中由胞质伸出许多伪足,淋巴细胞的胞质中主要含有线粒体和高尔基体。母猪生殖道黏膜内的淋巴细胞在某些部位聚集形成淋巴细胞群,特别是子宫角和子宫颈黏膜中较多,淋巴细胞向子宫腔内移行呈现“腔排”现象。结果显示猪雌性生殖道黏膜中含有较多的淋巴细胞,生殖道黏膜可能是黏膜免疫的诱导位点。     

shRNA抑制p115表达对胃癌体外血管形成的影响

目的 初步探讨胃癌BGC-823细胞高尔基体囊泡转运蛋白(golgi- vesicular transport protein,p115)对胃癌血管形成的影响及其可能机制.方法 采用脂质体介导法将p115 shRNA-1318转染入胃癌BGC-823细胞株,经G418筛选出稳定转染的细胞株.利用Western blot、RT-PCR和细胞免疫荧光方法 检测转染后的p115抑制效应及其对MIF、p-Akt、VEGF-A的调控情况；采用细胞活性检测实验、Transwell体外侵袭实验和血管形成实验方法 分别检测转染p115 shRNA的胃癌BGC-823细胞对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖,迁移和血管形成的影响.结果 p115 shRNA-1318转染后胃癌BGC-823细胞p115、MIF、p-Akt和VEGF-A的蛋白及mRNA表达明显抑制(P＜0.01)；细胞免疫荧光:与对照组相比,p115 shRNA组p115、MIF及VEGF-A的色泽暗红且抑制率分别为63%、65%、68%；细胞活性检测:与对照组相比,p115 shRNA组HUVECs增殖能力明显降低(P＜0.05)；Transwell侵袭实验:p115 shRNA组HUVECs较空白对照组,阴性对照组(shNC)细胞侵袭能力明显降低,24h穿过Transwell的细胞数分别为:(39±5)、(174±4)、(179±4),与对照组相比差别具有统计学意义(P＜0.05)；血管形成实验:p115 shRNA组HUVECs不能在Matrigel 胶上形成网状结构,空白对照组、shNC组成管指数分别为:(1 289±37)、(1 329 ±33),p115 shRNA组成管指数为:(422±41),与对照组相比差别具有统计学意义(P＜0.05).结论 p115基因沉默下调胃癌的VEGF-A表达及抑制血管生成；其分子机制可能与MIF通过PI3K/Akt信号通路途径调节胃癌血管形成有关.