基于MeDIP-seq研究蛋氨酸对巨噬细胞炎症中甲基化水平的影响

本课题组前期已研究表明蛋氨酸(Met)能缓解脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞的炎症反应,但其调控的分子机制尚不明确。本研究旨在从甲基化角度初步探讨DNA甲基化与Met抑制LPS诱导巨噬细胞炎症中分子机制的相关性。应用全基因组甲基化测序技术(MeDIP-seq)检测空白组、LPS组和LPS+Met组细胞的全基因DNA,每组3个重复。结果表明:LPS组甲基化峰(peak)的数量、总长度和覆盖率均高于空白组和LPS+Met组;与空白组相比,LPS组的高甲基化基因数在不同基因功能元件上均多于低甲基化基因数;与LPS组相比,Met+LPS组的低甲基化基因数在不同基因功能元件上均多于高甲基化基因数。运用GO富集和KEGG分析发现,LPS组与LPS+Met组差异甲基化基因主要富集在单一生物过程(Single-Organism Process)和细胞过程(CellularProcess),信号通路主要富集在Hippo信号通路。本研究为Met调控机体免疫和炎症反应提供一定的科学依据。     

全混合颗粒料中添加不同类型蛋氨酸对湖羊生长性能及血清生化指标的影响

本试验旨在研究在湖羊全混合颗粒料中添加不同类型蛋氨酸(蛋氨酸钙盐与蛋氨酸羟基类似物异丙酯)对湖羊生长性能及血清生化指标、抗氧化指标和激素含量的影响。选取体重为(19.99±2.04) kg的健康湖羊72只,随机分为3组:对照组、试验Ⅰ组(在基础饲粮中添加1.5 kg/t蛋氨酸钙盐)和试验Ⅱ组(在基础饲粮中添加1.5 kg/t蛋氨酸羟基类似物异丙酯),每组6个重复,每个重复4只(公母各占1/2)。预试期7 d,正试期80 d。结果表明:1)与对照组相比,试验Ⅰ组、试验Ⅱ组总增重、平均日增重均有上升的趋势,其中试验Ⅰ组总增重提高了12.8%(P>0.05),试验Ⅱ组总增重提高了3.1%(P>0.05);料重比方面,试验Ⅰ组、试验Ⅱ组均有下降的趋势,其中试验Ⅰ组下降了12.2%(P>0.05),试验Ⅱ组下降了3.6%(P>0.05)。2)试验Ⅱ组血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCH)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总蛋白(TP)含量显著高于对照组和试验Ⅰ组(P <0.05)。3)血清抗氧化指标及激素含量各组之间无显著差异(P>0.05)。综上所述,全混合颗粒料中添加蛋氨酸羟基类似物异丙酯及蛋氨酸钙盐具有提高肉羊生长速度、降低料重比的趋势,同时影响部分血清生化指标,但对血清抗氧化指标及激素含量无显著影响。     

饲粮精料水平和蛋氨酸铬添加剂量对舍饲滩羊生长性能、屠宰性能、肉品质和脂肪沉积的影响

本试验旨在探究饲粮精料水平和蛋氨酸铬(Cr-Met)添加剂量对舍饲滩羊生长性能、屠宰性能、肉品质和脂肪沉积的影响。采用2×3双因素试验设计,2个因素分别为饲粮精料水平和Cr-Met添加剂量,其中饲粮精料水平分别设为35%(低精料饲粮,饲粮精粗比为35∶65)和55%(高精料饲粮,饲粮精粗比为55∶45),Cr-Met添加剂量分别设为0、0.75和1.50 g/(d·只)。将60只雄性滩羊羔羊[平均体重为(21±1)kg]随机分配到6个试验组,每组10只。试验期为80 d,其中预试期15 d,正试期65 d。结果显示:1)与低精料饲粮组相比,高精料饲粮组滩羊的平均日增重、屠宰率、背膘厚度、肌内脂肪含量和后腿肉比重显著增加(P<0.05),但料重比与肌肉蒸煮损失、剪切力、pH、亮度(L*)值、红度(a*)值和黄度(b*)值则显著降低(P<0.05)。2)低精料饲粮组滩羊背膘厚度、皮下脂肪厚度、肌内脂肪含量和后腿肉比重随Cr-Met添加剂量的增加而线性降低(P<0.05),但肌肉pH则线性升高(P<0.05)。3)高精料饲粮组滩羊肋肉比重、腰肉比重以及肌肉剪切力和pH随Cr-Met添加剂量的增加而线性升高(P<0.05),而肌内脂肪含量和肌肉a*值则线性降低(P<0.05)。综合本试验测定指标,建议在滩羊养殖中选择精粗比为55∶45的高精料饲粮,Cr-Met的适宜添加剂量为1.50 g/(d·只),且不建议在精粗比为35∶65的低精料饲粮中添加Cr-Met。     

牛源性蛋氨酸生产菌的分离筛选及发酵条件优化

为了从奶牛瘤胃中筛选出高产蛋氨酸微生物,无菌采集10份成年奶牛瘤胃内容物样本,经分离筛选得到18株菌株,将这些菌株进行分离纯化培养,并利用HPLC法检测各菌株发酵液中蛋氨酸的含量,最终筛选出1株蛋氨酸含量较高的菌株。经过形态观察和16S rDNA序列分析,该菌株与甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)之间的同源性为100%。利用单因素试验确定了摇瓶发酵的最优条件:葡萄糖15%,硫酸铵3.5%,玉米浆2.5%,磷酸氢二钾1.5%,发酵时间为72 h,装液量为50 mL/500 mL。在最优条件下进行发酵试验,蛋氨酸产量提高到平均2.40 g/L,较发酵优化前产量提高了175.86%。     

日粮添加过瘤胃蛋氨酸对奶牛生产性能的影响

根据胎次、产奶量、泌乳时间相近的原则选择泌乳奶牛200头,随机分为对照组和试验组,每组100头,对照组饲喂常规日粮,试验组饲喂常规日粮+40 g/d过瘤胃蛋氨酸(RPM,有效成分:HMBi,2-羟基-4-甲硫基丁酸异丙酯)。探讨日粮添加过瘤胃蛋氨酸对奶牛生产性能的影响。结果:添加过瘤胃蛋氨酸的试验组产奶量较对照组提高了1.3 kg/d(P>0.05);试验组的乳蛋白、乳脂率和体细胞数较对照组均有所提高(P>0.05);经济效益方面,试验组每头牛每天比对照组多盈利2.49元。试验表明:日粮中添加过瘤胃蛋氨酸有助于提高奶牛生产性能和经济效益。     

低鱼粉饲料中补充蛋氨酸、胆汁酸、牛磺酸对中华绒螯蟹幼蟹生长、饲料利用及抗氧化能力的影响

在低鱼粉(15%鱼粉,LFM)饲料中,分别添加0.5%蛋氨酸、0.5%或1.0%胆汁酸盐、0.5%或1.0%牛磺酸(记为0.5%Met、0.5%Bile、1.0%Bile、0.5%Tau、1.0%Tau)配制5种等氮等能的饲料为5个实验处理组,以全鱼粉组(64.4%鱼粉,FM)和低鱼粉组(15%鱼粉,LFM)为对照,投喂中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)幼蟹[(0.26±0.02)g]8周。结果表明:1)与LFM相比,0.5%Met组增重率和特定生长率显著提高,且各处理组的饲料系数显著降低;FM组蛋白质效率最高,与0.5%Met组、1.0%Bile组、0.5%Tau组、1.0%Tau组均无显著性差异。各组的全蟹体组成差异不明显,仅0.5%Met组的脂肪含量显著高于1.0%Bile和1.0%Tau组。2)LFM组肝胰腺和肠道中的淀粉酶活性最高,FM组最低;肝胰腺总蛋白酶的活性FM组最高,其次是0.5%Met组,两者均显著高于其它各组;FM组和0.5%Met组的肠总蛋白酶活性最高,0.5%Bile组次之;0.5%Met组的肝胰腺和肠道脂肪酶活性最高,1.0%Tau组的肝胰腺、LFM组的肠道脂肪酶活性最低。3)LFM组丙二醛(MDA)含量显著高于FM组和各处理组;FM组的超氧化物歧化酶(SOD)活性和过氧化氢(CAT)酶活性均显著高于其它组,其中LFM组活性最低。结果显示,补充0.5%Met促进了幼蟹的肝胰腺和肠道总蛋白酶和脂肪酶的分泌,显著提高幼蟹的生长和抗氧化性能;添加0.5%、1.0%Bile可有效提高幼蟹肝胰腺、肠道的总蛋白酶和脂肪酶活力,降低饲料系数;而补充0.5%、1.0%Tau均能显著提高幼蟹肝胰腺和肠道消化酶活力和抗氧化能力。补充胆汁酸和牛磺酸未能有效促进生长可能与饲料中的限制性氨基酸不足有关。     

应用TLC-CMS-IR技术检测北芪菇中的L-硒代蛋氨酸

采用薄层层析结合酶解法,从北芪菇中提取、制备硒代蛋氨酸,并对其进行表征分析。结果表明,经酶解展开(正丁醇∶乙酸∶水(7∶1∶2,V/V))和显色后,北芪菇浸提液出现紫色斑点数为4个,其中有1个与硒代蛋氨酸标准品斑点位置一致,其Rf值为0.368;质谱检测显示,北芪菇样液和硒代蛋氨酸标准品基峰质荷比(m/z)均为196 m/z;红外光谱分析显示,北芪菇样液和硒代蛋氨酸标准品均含有N-H,O-H,C-O,C-N,C-Se等功能团;北芪菇中硒代蛋氨酸含量为0.24%。     

饲粮蛋氨酸水平对繁殖期蓝狐繁殖性能的影响

本试验旨在研究饲粮中蛋氨酸水平对繁殖期蓝狐繁殖性能的影响。选择健康雌性初产蓝狐150只,随机分为5组,每组30个重复,每个重复1只蓝狐,均为单笼饲养。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组分别饲喂在基础饲粮中添加0.20%、0.45%、0.70%、0.95%和1.20%蛋氨酸的试验饲粮。试验期为2014年2月10日至2014年5月31日。结果表明:Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组蓝狐最先开始发情,也最早结束,Ⅰ和Ⅴ组蓝狐发情时间稍晚。受配率、受胎率均以Ⅱ组最高,Ⅱ组受配率分别比Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组高出17%、3%、10%及14%。窝产仔数和初生个体重各组间差异不显著(P0.05);初生窝重随着饲粮蛋氨酸水平的升高呈现先升高后降低的趋势,并且Ⅰ和Ⅱ组显著高于Ⅴ组(P0.05);Ⅱ组初生成活率极显著高于Ⅴ组(P0.01)。由此得出,饲粮中添加0.45%蛋氨酸,即饲粮中蛋氨酸水平为0.98%时,可满足繁殖期蓝狐对蛋氨酸的需要。     

临武鸭产蛋高峰期蛋氨酸需要量的研究

本试验旨在研究饲粮蛋氨酸水平对30~38周龄临武鸭生产性能、蛋品质和血清生化指标的影响,以确定临武鸭产蛋高峰期蛋氨酸的需要量。选取体重相近、健康状况良好的临武鸭200羽,随机分为5组,每组5个重复,每个重复8只鸭。饲粮蛋氨酸水平分别为0.27%、0.32%、0.37%、0.42%、0.47%,试验全期63 d。结果显示:1)饲粮蛋氨酸水平对产蛋率和合格蛋率无显著影响(P0.05)。0.37%、0.42%、0.47%组的平均日采食量和料蛋比均显著低于0.27%组(P0.05),而0.37%组的平均蛋重和日产蛋量显著高于0.27%组(P0.05)。0.37%组获得了除合格蛋率外最佳的产蛋性能。2)饲粮蛋氨酸水平对蛋鸭蛋形指数、蛋壳厚度、蛋黄色泽、蛋黄比例、蛋壳比例、蛋白比例的影响均不显著(P0.05),但0.42%组蛋白高度和哈氏单位最大且显著高于0.27%和0.32%组(P0.05)。3)饲粮蛋氨酸水平对蛋鸭血清中总蛋白、白蛋白、尿素氮、尿酸和丙二醛含量均无显著影响(P0.05)。与0.27%组相比,其他4组的血清超氧化物歧化酶活性显著提高(P0.05),0.37%、0.42%、0.47%组血清谷胱甘肽(GSH)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性均显著高于0.27%组(P0.05)。4)以作为评价蛋氨酸需要量敏感指标的料蛋比和血清中GSH含量为依据,通过回归分析估测得到产蛋高峰期临武鸭获得最小料蛋比和最大GSH含量所对应的饲粮中蛋氨酸需要量分别为0.41%和0.43%。综上所述,在本试验条件下,当蛋氨酸水平为0.41%~0.43%时,产蛋高峰期临武鸭可获得最佳产蛋性能、蛋品质和血清生化指标。因此30~38周龄临武鸭蛋氨酸推荐量为0.41%~0.43%。     

UPLC-MS/MS法同时检测丁二磺酸腺苷蛋氨酸肠溶片中3种1,4-丁二磺酸酯类基因毒性杂质

建立丁二磺酸腺苷蛋氨酸肠溶片中3种1,4-丁二磺酸酯类基因毒性杂质（1,4-丁二磺酸二甲酯、1,4-丁二磺酸二乙酯和1,4-丁二磺酸二异丙酯）的超高效液相色谱-三重四级杆质谱（UPLC-MS/MS）检测方法。采用Agilent Poroshell 120 PFP色谱柱（3.0 mm×150.0 mm,2.7μm）,以0.01 mol/L甲酸铵（A）-甲醇（B）为流动相,流速为0.4 mL/min,进行梯度洗脱。采用质谱检测器,在电离模式ESI+、多反应监测（MRM）模式下采集数据。结果显示,1,4-丁二磺酸二甲酯、1,4-丁二磺酸二乙酯和1,4-丁二磺酸二异丙酯分别在0.999 6～19.992 0 ng/mL、0.997 2～19.944 0 ng/mL、0.996 8～19.936 0 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数r均为1.000 0,定量限浓度分别为0.999 6 ng/mL、0.997 2 ng/mL、0.996 8 ng/mL,检测限浓度分别为0.299 9 ng/mL、0.299 2 ng/mL、0.299 0 ng/mL,样品加标回收率均为80%～120%。该方...