饥饿和重摄食对鲤鱼脂蛋白脂肪酶活性的影响

采用对硝基苯酚法测定正常摄食、饥饿(14 d)和重摄食(3 d)状态下鲤鱼不同组织和器官中脂肪酶及脂蛋白脂肪酶(lipoproteinlipase,LPL)的活性。结果显示:与正常摄食相比,饥饿鲤鱼肌肉、脂肪和心脏中脂肪酶比活力显著下降(P0.05),但脂肪和心脏中LPL比活力显著升高(P0.05);除脂肪中LPL外,重摄食3d的鲤鱼各组织和器官中脂肪酶和LPL比活力比正常摄食和饥饿鲤鱼均显著升高(P0.05),有明显的补偿作用。     

一株产脂肪酶芽胞杆菌菌株SJXYZ的鉴定

[目的]对分离自市售高温灭菌牛奶的产脂肪酶菌株SJXYZ进行鉴定。[方法]通过16S rRNA基因序列及系统发育树分析、形态观察和生理生化特性分析,对菌株SJXYZ生物学特性进行初步鉴定。[结果]16S rRNA基因序列分析显示该菌株属于芽胞杆菌属(Bacillus),与B.altitudinis 41KF2b~T(高地芽胞杆菌)、B.xiamenensis HYC-10~T(厦门芽胞杆菌)、B.safensis FO-36b~T(沙福芽胞杆菌)、B.zhangzhouensis DW5-4~T(漳州芽胞杆菌)、B.australimaris NH7I_1~T(南海芽胞杆菌)和B.pumilus A~TCC 7061~T(短小芽胞杆菌)相似度皆为97%以上。系统发育分析显示,该菌株与B.altitudinis 41KF2b~T亲缘关系最近,但形成独立的进化分支,无法归入已知物种。菌株SJXYZ为革兰氏阳性,直杆状,运动性,最适温度为30~35℃,适宜p H为5~9,适宜盐度(Na Cl)为0%~5%;产脂肪酶,不产纤维素酶、淀粉酶、蛋白酶;对氨苄西林(10μg)、庆大霉素(10μg)、氟哌酸(10μg)、头孢唑啉(30μg)、四环素(30μg)、头孢噻吩(30μg)、链霉素(10μg)敏感。所测特性与B.altitudinis 41KF2b~T有较大的差异。[结论]菌株SJXYZ可能为新的物种,暂命名为Bacillus sp.SJXYZ。     

混菌发酵绿茶产脂肪酶及其对酯型儿茶素的水解作用分析

微生物的发酵作用导致黑茶加工过程中儿茶素的生物转化和总茶多酚含量的下降,这一转化过程的代谢途径和调控机制尚不清楚。通过添加冠突曲霉（Aspergillus cristatum）菌株PE-1和黑曲霉（A. niger）菌株PE-4混合发酵绿茶,采用鉴别培养基平板检测、酶活性测定和酶蛋白分离纯化,研究脂肪酶活性及其对酯型儿茶素的水解作用。两个菌株单菌发酵和混合菌种发酵绿茶条件下均可以检测到脂肪酶活性,混菌发酵酶活力高于两个菌株单菌发酵的酶活力。混菌发酵条件下获得一个分子量约为37βkDa的脂肪酶,对EGCG和ECG有不同的生物转化作用。UPLC检测结果表明,该脂肪酶对EGCG有较好的底物选择性,EGCG的水解率为94.46%,EGC的产率为63.33%;ECG的水解率为15.45%,EC的产率为4.15%。脂肪酶对EGCG和ECG的生物转化将为儿茶素代谢途径的研究和单体儿茶素的生产起到促进作用。     

单环刺螠(Urechis unicinctus)幼体肠道消化酶活性的测定方法

探究了单环刺螠(Urechis unicinctus)幼体(平均体重(1.468±0.222)g)肠道蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶的测定方法、操作步骤、注意事项。蛋白酶测定采用Folin-酚法,其中建立的酪氨酸回归方程为y=15.487x-0.092 3(决定系数R~2=0.999 2);淀粉酶测定采用淀粉-碘比色法,以0.08%的淀粉溶液为底物。脂肪酶测定采用聚乙烯醇橄榄油乳化液水解法(NaOH滴定法)。结果表明,单环刺螠幼体肠道蛋白酶活力、淀粉酶、脂肪酶活力分别为29.350±2.592、10.600±0.844、(5.266±0.224)U/mg prot。     

文冠果叶总皂苷的提取工艺优化及减肥降脂功效

【目的】优化文冠果叶总皂苷的提取工艺，并对其减肥降脂功效进行分析。【方法】采用单因素试验并结合Box-Behnken响应面法，对文冠果叶总皂苷的提取温度、液(mL)料(g)比、乙醇体积分数进行优化。采用高脂饲料喂养小鼠建立高血脂症模型，建模4周后，以奥利司他为阳性对照，分别采用高（200 mg/kg）、中（100 mg/kg）、低（50 mg/kg）剂量组文冠果叶总皂苷连续灌胃4周，检测小鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）和高密度脂蛋白（HDL-C）的浓度，分析不同剂量文冠果叶总皂苷对小鼠体内胰脂肪酶的抑制作用。【结果】文冠果叶总皂苷的最佳提取工艺条件为：提取温度60 ℃，乙醇体积分数70%，液(mL)料(g)比30∶1，此时文冠果叶总皂苷得率为4.952%。对小鼠的减肥降脂试验表明，文冠果叶总皂苷对胰脂肪酶的抑制活力最高可达68.29%，且在高血脂模型中，高、中、低剂量文冠果叶总皂苷均可显著或极显著降低血清中的TC、TG、LDL-C浓度，提高HDL-C浓度，其中高剂量组的降脂作用与阳性对照药物奥利司他效果相当。【结论】文冠果叶总皂苷减肥降脂功效显著，能够有效抑制胰脂肪酶活力，降低胆固醇和甘油三酯含量，进而促进脂肪代谢。     

棕榈油体外酶解的研究

利用脂肪酶催化油脂水解成脂肪酸和甘油,从而得到脂肪酸产品是一种温和的油脂水解方法。为了提高脂肪酶酶解效率,研究了棕榈油酶解时反应温度、p H值、水和棕榈油摩尔比及脂肪酶用量对水解效果的影响。试验结果表明,当缓冲液/棕榈油摩尔比为40︰1,加入4%的脂肪酶,在40℃下水解7h,水解率可达98.29%,水解较彻底。     

联合使用脂肪酶和乳酸菌对三黄鸡“过料”现象的现场评价

本研究通过在饲料中添加脂肪酶、在饮水中定期添加包被复合乳酸菌，评价其对黄羽肉鸡“过料”现象的效果。结果表明，定期添加脂肪酶和包被型复合乳酸菌，有利于恢复和维持肠道菌群平衡，改善“过料”现象，可有效提高鸡只平均活重，降低死淘率，提高饲料转化率，减少肠道内容物和粪便中大肠杆菌数量，增加乳酸菌数量，从而增加经济效益。     

季也蒙毕赤酵母ypy17产脂肪酶条件的优化

从海南洋浦近海岸分离到1株产脂肪酶的酵母菌株,经鉴定为季也蒙毕赤酵母(Pichia guillier-mondii),利用Plackett-Burman设计对发酵条件进行了筛选。结果表明,橄榄油、初始pH值和K2HPO4浓度对脂肪酶生产具有显著的影响;利用响应面法对3个因子进行了优化,获得了最佳发酵条件为橄榄油31.57 g/L,硫酸铵10.00 g/L,NaCl 30.00 g/L,K2HPO4 1.16 g/L,初始pH值7.30,28℃培养72 h,脂肪酶活力达到18.20 U/mL。     

白假丝酵母脂肪酶CaLIP5在毕赤酵母X33中的优化重组表达

[目的]研究新的脂肪酶及优化脂肪酶发酵培养条件。[方法]在毕赤酵母X33系统中重组表达白假丝酵母脂肪酶CaLIP5。利用响应面分析法，构建了CaLIP5的酶活回归方程。[结果]由响应面分析可知，在温度25．71oC，pH8．33，酵母提取物浓度1．28％和葡萄糖浓度4．06％时，预测最大酶活为8．33U／ml。试验验证酶活为9．24U／ml。实际试验值与模型预测值基本一致。优化后的酶活提高了22．22％。[结论]在优化的培养条件下，可以获得毕赤酵母X33重组表达CaLIP5的最大酶活。     

产脂肪酶菌株的筛选、鉴定以及酶学性质的研究

【目的】筛选高产脂肪酶菌株并鉴定其种属,研究脂肪酶的酶学性质.【方法】以橄榄油为唯一碳源对富含油污土壤中产脂肪酶微生物进行富集培养,用中性红平板进行初筛,结合改进铜皂分光光度计法测定酶活力;对筛选的高产脂肪酶菌株进行形态学观察和相关生理生化实验,再结合16S rDNA序列分析确定其种属;确定该菌株所产脂肪酶的最适作用温度和pH值,并研究金属离子、有机溶剂以及表面活性剂对酶活的影响.【结果】筛选得到一株高产脂肪酶菌株LZ-5,其所产脂肪酶的酶活力为4.78 U/mL;菌种鉴定为表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis).该酶最适作用温度为40℃,最适pH值为9.0;Ca~(2+)、Mg~(2+)对酶活力有促进作用,Fe~(2+)、Zn~(2+)、EDTA、SDS、甲醇和乙醇对酶活力有抑制作用,对Na~+、K~+、丙三醇的耐受力较高.【结论】成功分离一株表皮葡萄球菌高产脂肪酶菌株.