参加行业会议对养猪场生物安全影响调查

通过使用GenoTube采样拭子管对2018年两次国内大型畜牧行业会议的现场及周边环境、车辆、参会人员及其携带物进行了持续3 d的样品采集,收集的样品经预处理和混样处理后,采用实时荧光定量PCR(qPCR)的方法对2种常见的猪病毒性疾病病原——猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)进行了实验检测、分析。通过对检测结果进行统计分析,发现在2次会议样品中均检测出了PEDV阳性或PRRSV阳性,其中,PEDV阳性混合样品和PRRSV阳性混合样品分别占总采样数量的27.6%,2.0%。另外,环境样品中检测出双阳性。结果表明,业内人员密集的大型行业会议环境消毒不彻底、参会人员及相关物品携带猪病毒性疾病病原,增加了病原交叉传播的风险,行业会议的生物安全管理工作亟待提高。综上,此调查旨在通过提高业内人士的生物安全意识,降低行业会议中猪病的病原传播与交叉污染的风险,调查结果为开展并加强畜牧行业大型会议的生物安全管理工作提供了案例参考和理论依据,从而减少会议中病原传播和交叉污染对畜牧生产的不利影响及其引起的企业与社会的经济损失。     

西番莲TeMV和CMV双重RT-PCR检测体系的建立及应用

【目的】建立西番莲夜来香花叶病毒(Telosma mosaic virus, TeMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的双重RT-PCR检测体系。【方法】根据TeMV和CMV的外壳蛋白(coat protein, CP)基因序列,分别设计两对特异性引物,并对引物组合浓度、退火温度和循环次数进行优化。【结果】优化结果显示:TeMV和CMV最佳引物组合浓度分别为2.0 mmol·L~(-1)和8.0 mmol·L~(-1);最佳退火温度为57℃;最佳循环次数为35次。【结论】灵敏度分析结果显示,在样品c DNA原液稀释到10-5时,仍能检测到两种病毒扩增出的目的条带。同时,以健康组培苗作为对照组,应用建立的双重RT-PCR检测技术对采集于福建省不同产地的36份西番莲样品进行了病毒检测,发现有8份样品同时感染两种病毒,8份样品仅感染TeMV,10份样品仅感染CMV。本研究可为西番莲TeMV和CMV的检测提供便利。     

山羊痘病毒检测方法分析

山羊痘病毒对于羊群生长有着严重的威胁。因此,开展山羊痘病毒检测研究工作很有必要。在此之上,本文简要分析了山羊痘病毒的特性,并分别从聚合酶检测法、反向间接血凝检测法、双重聚合酶检测法、DNA分子生物检测法等方面,论述了山羊痘病毒检测方法,以此为山羊痘治疗工作提供参考依据。     

建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒的检测技术及脱毒方法研究进展

为了弄清目前建兰花叶病毒(CymMV)和齿兰环斑病毒(ORSV)病毒检测和脱毒的研究概况,本研究详细阐述了2种病毒的检测方法、采用的脱毒技术和脱毒效率,分析比较了不同技术存在的弊端,指出现有的脱毒方法已不能满足兰科植物脱毒研究的需要。在此基础上,进一步提出应采用安全、可靠的新型脱毒技术来解决目前兰科植物产业瓶颈问题。超低温脱毒技术是近年来发展迅速的脱毒技术,具有独特优势,目前已在多种植物上成功应用,该方法的应用有望解决2种病毒脱毒方面存在的问题。     

甜瓜黄斑病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法

为建立检测甜瓜黄斑病毒(melon yellow spot virus, MYSV)的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR(qPCR)方法。基于MYSV核衣壳蛋白基因保守序列设计qPCR特异性引物对,针对引物退火温度、引物浓度、特异性和敏感性进行系列优化。结果显示,优化后的qPCR方法最适退火温度为61.3℃,最适引物浓度为0.65μmol·L^-1,特异性强,灵敏度高,比PCR高100倍。以携带目的基因片段的重组质粒为标准品,构建的qPCR标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数为0.999 7。实验样品验证表明建立的qPCR方法可用于MYSV的定量检测。     

马铃薯茎尖脱毒方法优化及病毒检测

为优化马铃薯茎尖脱毒方法,得到无毒壮苗,研究生长素及L-半胱胺酸盐酸盐、培养基和马铃薯芽灭菌时间对28个马铃薯品种(系)组培苗形成的影响,比较不同p H的MS培养基上苗的生长情况,并用RT-PCR方法进行病毒检测。结果表明,28个马铃薯品种(系)中,有的很快长出愈伤组织并形成幼苗,有的不能成苗。含有萘乙酸(NAA)的MS培养基愈伤组织出愈速度快且大、成苗慢、成苗率低,但是苗较壮。含有吲哚乙酸(IAA)的MS培养基多数不形成或形成很小的愈伤组织,成苗快、成苗率较高,但苗较弱。L-半胱胺酸盐酸盐能减轻愈伤组织褐变,提高成苗率。试管分装培养基115℃条件下最佳灭菌时间是20min。采用升汞对较小的马铃薯芽灭菌5~7min效果最好,对较大的芽灭菌9~10min效果最好。苗生长的MS培养基最佳p H为5.8。采用RT-PCR检测到试管苗马铃薯S病毒(PVS)、马铃薯Y病毒(PVY)和马铃薯卷叶病毒(PLRV)的带毒率分别为18%、12%和5%。     

脱毒种苗在农业上的应用

在种植业生产中,有些植物品种特别是以无性繁殖为主要方式的植物品种,因在自然环境中长期经受各种植物病毒病的重复传染而导致光合作用的明显降低,生产势变弱,品种变劣,种性退化,产量降低.为解决这一难题,科学工作者经过努力,研究出脱毒种苗,克服了病毒病的危害,恢复了植物固有的优良性状.     

狂犬病病毒检测方法的研究进展

狂犬病病毒(RV)属弹状病毒科、狂犬病病毒属,病毒呈杆状,一端扁平,另一端钝圆,长180～250 nm,宽75 nm,基因组为12 kb的单股负链RNA,从3′端至5′端依次为N、NS、M、G、L 五个结构基因,分别编码五种结构蛋白,即核蛋白(N)、磷酸化蛋白(NS)、基质蛋白(M)、糖蛋白(G) 和转录酶蛋白(L).     

玉林市猪伪狂犬病病毒野毒株感染情况调查

为评估近年来玉林市猪伪狂犬病流行情况,于2010年—2012年分别对不同来源于散养户、规模场、种畜场的1 441份血清样品进行gE-ELISA和PCR检测,对与本实验免疫效果相关的免疫次数、疫病净化、疫苗使用等因素进行调查分析。发现玉林市猪伪狂犬病病毒野毒株感染情况:免疫三次以上的猪群,免疫效果明显,注射猪伪狂犬TK/gE—双基因缺失疫苗的猪群阳性率比注射其它品种的疫苗要低。     

由海洋贝类传播的人肠道病毒检测方法评述

由海洋贝类传播的人肠道病毒会引起人类甲肝和胃肠炎疾病。海洋贝类传播的人肠道病毒主要有HAV,Norwalk Virus(NV)、Snow Mountain agent、SRAVs、Cockle agent、Parvovirus、Astrovims、和Calicivirus。除了HAV以外,上述其它病毒与胃肠炎的患病有关。从人类健康和水产品食用安全方面考虑,发展一种有效的病毒检测方法显得十分重要。本文对过去40年有关海洋贝类病毒检测方法,包括细胞学、免疫学和分子生物学方法做一比较和评述。