酵母单杂交文库构建及巨峰葡萄VvFT基因启动子上游调控因子筛选

[目的]利用酵母单杂交文库筛选巨峰葡萄VvFT基因启动子上游调控因子,挖掘参与调控葡萄开花时间的因子,为揭示花期转变代谢通路和定向改良葡萄品种提供理论参考.[方法]利用PlantCARE分析预测VvFT基因启动子顺式作用元件,并以VvFT基因启动子为诱饵,利用酵母单杂交文库筛选技术,筛选作用在VvFT基因启动子上游的调控因子.[结果]葡萄VvFT基因启动子区域存在13种启动子顺式作用元件,包括A-box、CAAT-box和TATA-box组成型调控元件;光响应调控元件ATC-motif、Box 4、G-Box和GT1-motif;茉莉酸甲酯(MeJA)响应调控元件CGTCA-motif和TGACG-motif;干旱诱导的MYB结合位点元件MBS;玉米蛋白代谢必需的调控元件O2-site;参与生物钟控制的调控元件circadian;厌氧诱导必需调控元件ARE.以VvFT基因启动子为诱饵,筛选获得34条表达序列标签(EST),其中有21条为未知功能,有13条在植物生长、抗逆防御、信号转导、转录调控、蛋白酶等方面均有已知或预测的功能,包括转录抑制因子ft41、GRF1互作因子ft44、NAP1相关蛋白ft64及ft70分子伴侣DnaJ10.酵母单杂交点对点验证结果表明VvDnaJ10和VvFT基因启动子之间有相互作用.[结论]通过酵母单杂交文库筛选获取13条候选EST,虽然大部分EST功能预测分析结果与VvFT调控开花时间无明显的直接关系,但研究结果为进一步探索VvFT转录或表达水平控制葡萄开花时间的分子机制提供侯选基因.     

饲用酵母甘露聚糖检测方法研究进展

酵母细胞中的甘露聚糖是一种非淀粉多糖,存在于酵母细胞壁的外层中。酵母甘露聚糖通常与蛋白质以共价键的形式相连,被称为甘露糖蛋白。酵母甘露聚糖在动物营养中具有重要的生物学功能,是酵母源生物产品中的关键功能性成分之一。甘露聚糖含量是评价酵母提取物、酵母水解物、酵母培养物等产品品质的重要指标。本文就饲用酵母甘露聚糖的检测方法研究进展做一综述。     

富锗酵母培养物对下笼蛋鸡肉品质、肠道菌群及结构的影响

本试验旨在研究富锗酵母培养物对下笼蛋鸡肉品质及肠道的影响。选取505日龄健康的海兰褐壳蛋鸡480只,随机分为4组,每组5个重复,每个重复24只鸡。对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别添加12、16、20 mg/kg的富锗酵母菌培养物。预试期7 d,正试期为42 d。结果表明:与对照组相比,12、16、20 mg/kg组腿肉的蒸煮损失分别降低45.2%、33.6%、39.7%(P<0.01),pH均高于对照组(P<0.01);16mg/kg组腿肌的亮度(L~*)低于对照组(P<0.05);12、16、20 mg/kg组腿肌的剪切力分别比对照组低44.13%、56.07%、50.60%(P<0.01);各试验组胸肌pH均高于对照组(P<0.01),16mg/kg组的pH高于12、20mg/kg组(P<0.05);与对照组相比,16mg/kg组乳酸菌数量升高(P<0.05);空肠中,各试验组的绒毛长度高于对照组(P<0.01);16、20 mg/kg组绒毛长度/隐窝深度高于对照组(P<0.01)。结果显示,日粮中添加富锗酵母培养物可以改善下笼蛋鸡小肠的形态结构和肠道菌群平衡,提高鸡肉品质,建议添加量为16 mg/kg。     

天然酵母种的制作及其在面包生产中的应用

[目的]探索天然酵母的制作方法及其在面包工业生产中的应用。[方法]以苹果为培养基,并对天然酵母的培养条件及其在面包生产中的应用进行了研究。[结果]工业化面包生产中天然酵母的最优培养比例为原种∶面粉∶水=1∶1∶1,在28～30℃发酵条件下发酵4 h,储存在4℃环境下保质期达到72 h,能够较好地满足工业化生产需求。在工业化生产面包中添加20%的天然酵母可以获得较好的面包品质。[结论]工业化培养的天然酵母种可以明显改善工业化面包的风味,提升面包产品的竞争力。     

酵母双杂交筛选与胞内劳森菌LI0902互作宿主蛋白

为了鉴定胞内劳森菌(Lawsonia intercellularis,LI)外膜蛋白LI0902在细菌感染中的作用,本试验以胞内劳森菌疫苗DNA为模板,设计特异性引物进行PCR扩增,并成功构建诱饵表达载体pGBKT7-LI0902。将通过菌落PCR和测序验证的质粒转化酵母菌株Y2H Gold后,发现LI0902能在酵母细胞中正确表达,对酵母细胞无毒性,且无自激活活性。将含有pGBKT7-LI0902的酵母菌株Y2H Gold与猪肠上皮细胞系IPEC-1 cDNA文库菌株Y187进行杂交,筛选、验证、测序后得到3个与LI0902相互作用的宿主蛋白。本试验研究了胞内劳森菌与猪肠上皮细胞相互作用,为揭示增生性肠炎的致病机理提供了线索。     

浅谈富硒酵母的功效

硒(Selenium,Se)是1817年由瑞典化学家Berzelius发现的.l971年Rotruck证实硒是谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)的组成物质以及维持酶活性的重要组成成分.1973年世界卫生组织确认,硒是人和动物活动必需的微量元素,并建议人体每天补充200μg的硒,可有效预防多种疾病的发生.硒在自然界的存在方式分为两种:无机硒和生物活性硒.无机硒一般指亚硒酸钠和硒酸钠,从金属矿藏的副产品中获得;后者是硒通过生物转化与氨基酸结合而成,一般以硒蛋氨酸的形式存在.     

霜霉菌侵染后葡萄叶片酵母双杂交cDNA文库构建

[目的]构建霜霉菌侵染后葡萄叶片的酵母双杂交cDNA文库,筛选致病因子在寄主葡萄体内的互作靶标,为葡萄霜霉病菌致病的分子机理研究提供材料基础.[方法]以一年生欧亚种葡萄西拉盆栽苗为试验材料,提取并等量混合霜霉菌侵染后0、12、18、24和36 h的葡萄叶片总RNA,利用基于Gateway技术的CloneMiner II cDNA文库构建试剂盒:首先将cDNA与pDONR222载体进行BP重组反应连接,连接产物转化大肠杆菌DH10B感受态细胞构建初级文库;然后初级文库质粒与pGADT7-DEST载体通过LR重组反应,重组反应产物转化大肠杆菌DH10B感受态细胞构建次级文库;再随机挑取次级文库转化Y187酵母菌株构建酵母双杂交cDNA文库;最后利用ImageJ软件和PCR反应分别统计库容量和鉴定重组率.[结果]构建的初级文库库容量为4.6×107 CFU,次级文库库容量为2.7×107 CFU,均达到构建cDNA文库的标准.酵母双杂交cDNA文库的插入片段主要集中在1000~2000 bp,且具有很好的多态性,文库质量较高.[结论]构建的霜霉菌诱导葡萄叶片酵母双杂交cDNA文库符合酵母双杂交筛选要求,可用于筛选霜霉菌致病效应蛋白在寄主体内的靶标及霜霉菌侵染寄主葡萄早期抑制寄主免疫过程中的致病机理研究.     

冬季恒温饮水和饲粮添加酵母水解物改善肉牛生长性能

试验研究了南方冬季安装恒温饮水系统和饲粮添加酵母水解物对拴系敞篷饲养肉牛生理和生产性能的影响。试验采用双因素设计,选取40头平均体重为177.8 kg的西杂肉牛,随机分成4个处理,处理1组肉牛饮23℃温水,并在饲粮中添加酵母水解物;处理2组肉牛饮23℃温水,饲粮中不添加酵母水解物;处理3组肉牛饮10℃冷水,饲粮中添加酵母水解物;对照组为肉牛饮10℃冷水,饲粮中不添加酵母水解物。酵母水解物的添加量为0.5%,进行为期30 d生长试验。分别测定了牛舍的环境指标、肉牛生理指标和肉牛日增重,并对经济效益进行了分析。结果如下:1冬季肉牛饮23℃温水和饲粮中添加酵母水解物对肉牛呼吸频率和直肠温度无影响;2处理1组、处理2组、处理3组比对照组肉牛平均日增重分别提高了0.25 kg(P<0.05)、0.14 kg(P<0.05)和0.15 kg(P<0.05)。处理1组比对照组增加毛利4.79元/(头·d)。3肉牛饮用23℃温水比饮用10℃冷水的日增重显著提高0.12 kg(P<0.05),增加毛利2元/(头·d)。饲粮添加酵母水解物显著提高日增重0.13 kg(P<0.05),增加毛利2.8元/(头·d)。表明南方冬季肉牛饮23℃温水和饲粮中添加0.5%酵母水解物均显著提高了肉牛生产性能和经济效益,二者结合使用效果较好。