E.tenella河北株重组IL-2-EtMIC-2 DNA疫苗的构建及保护力分析

为了构建E.tenella河北株重组IL-2-EtMIC-2DNA疫苗,并确定其抗球虫效力。采用RT-PCR方法分别克隆出鸡IL-2和E.tenella河北株EtMIC-2基因,并连接到pMD18-T载体上进行测序;将目的基因克隆到pcDNA3.0载体,构建重组质粒pcDNA3.0-IL-2-EtMIC-2,并转染293T细胞,用Western blot方法验证表达。将构建的重组IL-2-EtMIC-2DNA疫苗以50,100,150μg/只的剂量分别在14,21日龄胸肌注射免疫试验鸡,除阴性对照组外,28日龄时经口灌服孢子化E.tenella卵囊4×10~4个,研究其对E.tenella感染后的免疫保护效果。结果表明:成功构建了重组质粒pcDNA3.0-IL-2-EtMIC-2,且能在293T细胞中表达出融合蛋白;3个免疫组的ACI比阳性对照组分别提高了97.63%,127.02%和129.81%,其中免疫剂量为100,150μg时,ACI均达160以上,具有良好的免疫保护效果。     

京海黄鸡杂交配套系亲本对柔嫩艾美耳球虫的敏感性

为了有效评价京海黄鸡杂交配套系亲本BB、FF、WW对柔嫩艾美耳球虫的敏感性,本试验采用存活率、体增重、卵囊脱落数、盲肠记分、抗球虫指数(ACI)及一氧化氮(NO)、过氧化氢酶(CAT)、γ干扰素(IFN-γ)等10项血浆指标对其进行综合评价。结果显示,WW感染组ACI值最高为143.1,BB感染组ACI值为142.6,两者均为抗球虫低效,FF感染组ACI值最低为119.3,为抗球虫无效。ACI值与CAT、超氧化物歧化酶(SOD)、白介素17(IL-17)、IFN-γ4个免疫指标相关显著(P0.05)。在BB、FF、WW 3个感染组中,BB感染组NO、白介素12(IL-2)、IL-17、SOD含量显著高于FF感染组(P0.05),BB、WW感染组差异不显著。结果表明,京海黄鸡杂交配套亲本BB鸡对柔嫩艾美耳球虫抗性显著高于FF鸡,略高于WW鸡。     

安徽3株柔嫩艾美耳球虫对5种抗球虫药的耐药性检测

采用鸡体试验法,以抗球虫指数、最适抗球虫活性百分率、病变记分减少率和相对卵囊产量4项指标综合判定,安徽庐江县、青阳县和肥西县3个地区鸡柔嫩艾美耳球虫对磺胺氯吡嗪钠、马杜拉霉素、氨丙啉、妥曲珠利、地克珠利的耐药性。结果显示,庐江株对氨丙啉和妥曲珠利敏感,对磺胺氯吡嗪钠和地克珠利完全耐药,对马杜拉霉素中度耐药;青阳株对地克珠利和妥曲珠利敏感,对磺胺氯吡嗪钠和马杜拉霉素完全耐药,对氨丙啉中度耐药;肥西株对磺胺氯吡嗪钠敏感,对妥曲珠利中度耐药,对地克珠利、马杜拉霉素和氨丙啉完全耐药。     

一例柴鸡球虫病的治疗体会

<正>2014年9月28日,一养殖户携带几只病死鸡来本站就诊。该养殖户养殖3000只30日龄柴鸡,地面散养。该鸡群中出现鸡冠和可视黏膜发白鸡只,稀便带血,翅膀下垂,两腿痉挛性收缩,个别食欲废绝。已出现死鸡2d,剖检可见病鸡胸肌颜色发白,肠道变粗,浆膜层可见针尖状出血点,盲肠高度肿大,有出血。初步诊断为球虫病。又经实验室检验,可见卵圆的卵囊,进一步确诊为巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美尔球虫的混合感染。现将诊     

妥曲珠利对人工感染鸡柔嫩艾美尔球虫病的临床治疗试验

为比较、测定国内厂家生产的妥曲珠利可溶性对鸡球虫病的治疗效果,试验设计三个剂量组,并以德国拜耳公司生产的百球清作为药物对照,进行饮水治疗人工感染艾美尔球虫病,一日2次,连用3 d。结果表明,受试药物的高(0.75 g/L)、中(0.5 g/L)剂量组,能显著降低球虫病感染引起的死亡率、血便、盲肠病变,并提高相对增重率(P0.05)。推荐国内厂家生产的妥曲珠利可溶性粉最佳临床治疗用法为:剂量0.5 g/L,连续饮水给药3 d。     

鸡柔嫩艾美尔球虫病抗性主成分分析评估模型的建立

为建立鸡活体可测球虫病抗性综合评估模型,探索鸡球虫病抗性选育新方法,以京海黄鸡为试验材料,根据国内外文献选择15个球虫抗性评价指标,通过比较鸡柔嫩艾美尔球虫感染组和非感染组抗性指标的差异,进一步筛选活体可测指标,并进行主成分分析,通过各主成分和综合主成分与所有抗性指标的相关分析,筛选最优抗性综合评估模型,并进行模型有效性筛选。在所选的14个活体可测抗性指标中,有6个指标在感染和非感染组间存在显著或极显著的差异(P0.05或P0.01),他们分别是感染后第3—5天体增重、感染后第8天血浆中CAT、GSH-Px、MDA、SOD和IFN-γ的浓度;主成分分析建立了6个单主成分和累计贡献率大于80%的综合主成分的抗性评估模型,各抗性评估模型计算的综合选择指数与15个抗性指标相关分析的结果表明,第一主成分模型和7个抗性指标相关极显著(P0.01),2个相关显著(P0.05),特别是与盲肠病变记分相关极显著(P0.01),其余6个主成分评估模型只与15个抗性指标中的2~3个相关显著或极显著(P0.05或P0.01),且与盲肠病变记分相关均不显著(P0.05);经检验第一主成分模型选择指数值的分布为正偏态分布,排序后其大小与盲肠病变表现一致。因此,第一主成分模型fi1=-0.64Zxi1+0.31Zxi2+0.80Zxi3-0.05Zxi4-0.08Zxi5+0.59Zxi6可以作为鸡柔嫩艾美尔球虫抗性选择的最佳综合选择指数用于鸡的抗病育种。     

中草药抗球散超微粉对柔嫩艾美耳球虫感染鸡免疫机能的影响

为探讨中草药抗球散超微粉防治鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)的作用机制,将150只20日龄供试鸡随机均分为Ⅰ组(感染给中草药组)、Ⅱ组(感染不给药组)和Ⅲ组(不感染不给药组)。Ⅰ组、Ⅱ组人工感染柔嫩艾美耳球虫,Ⅰ组于感染前1 d在饲料中添加1%的中草药抗球散超微粉,分别测定供试鸡血清免疫球蛋白IgG、IgM、IgA含量和外周血T淋巴细胞百分率,试验结束时测定脾脏和法氏囊指数。结果显示:与Ⅱ组相比,Ⅰ组的IgG、IgM、IgA抗体水平整体上呈上升趋势,IgG抗体水平于感染后13、17、21 d分别显著提高10.06%、14.78%、10.63%,IgM抗体水平于感染后13 d显著提高18.18%,IgA抗体水平于感染后17 d显著提高17.95%;Ⅰ组的外周血T淋巴细胞百分率于感染后14、21 d分别显著提高7.20、6.20个百分点;试验结束时,Ⅰ组的脾脏指数和法氏囊指数分别极显著提高46.72%和43.82%。以上结果表明,中草药抗球散超微粉能够促进柔嫩艾美耳球虫感染鸡免疫器官发育、增强机体免疫功能。     

鸡球虫病的防治

鸡球虫病是由艾美尔属球虫寄生于鸡肠上皮细胞引起的疾病。该病以出血性肠炎、血痢、雏鸡高发病率和死亡率为特征。寄生于鸡的球虫很多，致病力最强的为柔嫩艾美尔球虫以及毒害艾美尔球虫，前者引起急性盲肠球虫病，多见于幼鸡；后者引起急性小肠球虫病，多见于成年鸡，两者均可造成鸡群大批发病死亡。     

柔嫩艾美耳球虫MIC4-N的真核表达

应用RT-PCR技术扩增柔嫩艾美耳球虫的MIC4-N端基因并去掉信号肽,为了表达检测和纯化的方便,设计引物时改变了3＇端的终止密码子,使MIC4-N的C末端带有c-myc和6His抗原标签。通过双酶切,使加工好的MIC4-N基因连接到毕赤酵母表达载体pPICZαA上,转化JM109感受态细胞。再经EcoRⅠ与NotⅠ双酶切、菌落PCR及测序鉴定,证明目的基因与真核表达载体pPICZαA构建成功,单酶切重组表达载体、电转转入GS115酵母感受态细胞中。用含高浓度Zeocin的YPD平板筛选酵母菌落,菌落PCR法鉴定转化成功的阳性菌,在BMMY培养基中摇瓶培养,并用甲醇诱导,经SDS-PAGE及Western Blot鉴定,蛋白分泌表达成功。     

绿孔雀球虫病的诊断与治疗措施

绿孔雀球虫病是由艾美尔球虫引起的肠道黏膜产生严重病变的寄生原虫病,主要侵害幼孔雀,但后备孔雀和种孔雀也可发病,地面平养较离地网养者多见。该病在各个动物园均存在,轻者可导致孔雀生长发育不良,并极易引发其他疾病,严重者可引起孔