商品肉鸡免疫程序的制定

鸡新城疫、禽流感、传染性支气管炎、法氏囊是危害肉鸡生产的主要传染病,预防好这些传染病必须制定合理的免疫程序,采用正确的免疫方法.制定合理的免疫程序必须遵循母源抗体的衰退规律、传染病的流行特点、疫苗之间的相互关系、正确的免疫方法等原则,有条件的还必须进行抗体水平的监测,进一步检验免疫程序和免疫方法是否科学合理,笔者从五个方面阐述如何制定商品肉鸡免疫程序,供大家参考.     

3株鸽源新城疫病毒的分子特征及对鸽的致病性

2011―2013年在新城疫流行病学调查中分离到3株鸽源新城疫病毒(SDS,SD01和SD02),为了进一步了解其生物学特性和遗传进化规律,对3株病毒进行了测序和生物活性分析,并对分离株SDS对鸽的致病性进行了评价。结果表明,毒株SDS基因组全长为15192 bp,基因排列方式为3′-NP-P-M-F-HN-L-5′,3个分离株F蛋白裂解位点氨基酸序列均为¹¹²RRQKRF¹¹⁷,具有典型的新城疫强毒的分子特征。系统进化分析表明这3个毒株与基因Ⅵ型NDV毒株聚于一簇,属于ClassⅡ系Ⅵb基因型。3个分离株F蛋白的融合肽和七肽重复区,HN蛋白的抗原中和表位存在多处突变,与单克隆抗体1E5、2F10的反应性也发生改变,表明3个分离株与疫苗株LaSota有明显的抗原差异。SDS攻毒试验结果显示,试验鸽自攻毒后5 d出现明显的临床症状,滴鼻组和肌肉注射组的死亡率分别为60%和70%;病死鸽剖检可见脑膜充血出血,腺胃乳头、腺胃肌胃交界及肠道出血,肝脏肿大,脾有淤血斑。滴鼻组在攻毒后5~14 d于喉头和泄殖腔检出排毒,而肌肉注射组在攻毒后3~14 d于喉头和泄殖腔有排毒。     

2018〜2019年我国部分地区新城疫病毒的F基因序列分析

本研究自2018-2019年从疑似感染新城疫的家禽病料分离鉴定出13株新城疫病毒(Newcastle disease viruses,NDV),采用RT-PCR方法对这13株NDV分离株的F基因进行扩增,产物经TA克隆并测序后与GenBank数据库中的参考毒株进行遗传进化分析。结果显示,其中的7株属于基因Ⅱ型,5株属于基因VI型,1株属于ClassⅠ亚型。F基因相似性分析结果显示,7株基因Ⅱ型毒株与疫苗株La Sota.Bl sClone 30的核昔酸相似性在9&1%-100%之间,氨基酸的相似性在97.6%~100%之间。5株基因VI型分离株与Ⅱ、Ⅶ型疫苗株及VIb亚型代表株之间的核昔酸相似性在79.7%-98.4%之间,氨基酸的相似性在76.6%-97.6%之间。1株基因Ⅰ型的分离株与Ⅱ,Ⅶ型疫苗株及Class Ⅰ代表毒株的核昔酸相似性在52.1%-97.3%之间,氨基酸的相似性在68.5%-96.8%之间,表明当前部分地区的NDV分离株与传统疫苗株之间存在较明显的遗传特征差异。     

鸡新城疫诊断与防制措施

鸡新城疫是由鸡新城疫病毒引起的一种急性、烈性、高度接触性传染病,该病传播速度快,病死率高,严重威胁着家禽养殖业的健康发展。文章从新城疫的病原学特点、流行病学、临床症状、病理剖检、实验室诊断及综合防制措施进行了分析探讨,为鸡新城疫的诊断与综合防制提供理论依据。     

鸽新城疫的流行与防控

鸽新城疫是由新城疫病毒感染鸽群引起的传染病, 在世界各国鸽场均有流行。介绍了鸽新城疫流行情况及特点, 流行毒株的基因型、病毒的毒力、病毒的抗原特性, 提出在做好鸽场内生物安全控制和精细化管理基础上, 使用市售新城疫疫苗进行合理免疫是鸽新城疫防控的关键。     

表达H9亚型禽流感病毒HA蛋白的重组耐热新城疫病毒株的鸡胚传代研究

新城疫和禽流感严重危害世界养禽业,对其防控在我国主要依赖疫苗接种。课题组前期获得了一株可表达H9亚型禽流感病毒HA蛋白的重组耐热新城疫病毒rTS-HA株。进一步对其鸡胚传代特性进行研究,旨在分析重组新城疫病毒在传代过程中的热稳定性和外源基因表达稳定性。将其在SPF鸡胚传至18代,每隔4代耐热选育1次,取中间代次毒株,测定其增殖效价、鸡胚最小致死剂量的平均死亡时间(mean death time,MDT),同时设置未耐热选育的对照。结果表明,通过耐热选育将rTS-HA株传至第18代后,其增殖滴度未发现显著变化,MDT均大于120 h,表明毒力无返强现象,但其耐热性有显著提升,而未进行耐热选育的鸡胚传代株的耐热特性显著下降。动物试验结果表明,耐热选育后毒株的免疫效果较初代毒株也有明显的提升。以上结果表明重组新城疫病毒rTS-HA株需要进行耐热选育传代,才能保持其耐热特性,同时其免疫原性也有一定的提升,可作为新城疫和禽流感二联耐热基因工程活疫苗的候选毒株。     

某肉鸡场新城疫、H9亚型禽流感、传染性支气管炎感染状况调查

为了解肉鸡新城疫、H9亚型禽流感、鸡传染性支气管炎的感染状况,从山东省某肉鸡场采集组织样品120份,采用鸡胚尿囊腔传代接种法分离病毒,并利用血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HI)和RT-PCR试验对分离毒株进行鉴定。结果表明:各周龄ND的检出率:2号舍均为41.67%,4号舍分别为33.33%、25%、33.33%、41.67%和33.33%;各周龄H9的检出率:2号舍分别为41.67%、50%、33.33%、58.33%和41.67%,4号舍分别为50%、25%、50%、58.33%和50%;各周龄IB的检出率:2号舍均未检出,4号舍19日龄IB的检出率为8.33%。该结果为规模化肉鸡场有效预防和控制这3种主要疫病提供了科学依据。     

内含NDV核酸的耐核糖核酸酶病毒样颗粒作为荧光定量RT-PCR内标的制备与鉴定

为制备检测新城疫病毒的实时荧光RT-PCR病毒样颗粒内标,扩增MS2噬菌体的成熟酶蛋白和衣壳蛋白序列,将其定向插入pET32a载体的相应位置,双酶切和PCR鉴定,构建pET32a-MS2重组质粒;根据新城疫病毒实时荧光RT-PCR检测的目标片段,采用化学合成和klenow酶连接技术制备内标片段,将内标片段插入pET32a-MS2重组质粒,构建pET32a-MS2-IC重组质粒,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,经RNase和DNase消化后,采用荧光RT-PCR检测耐核糖核酸酶病毒样颗粒内标的含量。结果表明,制备了高表达量耐核糖核酸酶病毒样颗粒内标,可用于新城疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立。     

新城疫病毒免疫小鼠的免疫效价检测

本试验主要采用鸡胚尿囊腔繁殖病毒的方法繁殖新城疫病毒(NDV),差速离心法对NDV进行纯化,用纯化的NDV作为抗原,与弗氏佐剂充分乳化后,免疫8周龄的Balb/C小鼠。首免弗氏完全佐剂,二免、三免、四次加免用弗氏不完全佐剂。四免后第14天取免疫小鼠血清,用血凝抑制试验HI和间接ELISA测定抗体效价,分别为1:128和1:6.4×104,获得抗体与NDV具有良好的特异性反应,与鸡传染性法氏囊病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡流感病毒均无交叉反应性。