高效液相色谱法测定饲料添加剂吡咯喹啉醌二钠含量

建立了饲料添加剂吡咯喹啉醌二钠的高效液相色谱测定方法。试样采用稀释液进行超声辅助萃取,XB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱上分离,用乙腈/盐溶液作为流动相进行等度洗脱,光电二极管阵列检测器进行检测。结果表明,吡咯喹啉醌二钠在13.0 mg/L~520 mg/L范围内具有良好的线性关系,线性相关系数为0.9997。日内和日间稳定性的精密度范围分别为0.1%~0.9%和0.1%~1.3%。方法的加标回收率为101.7%~102.2%,相对标准偏差(RSDs)为0.7%~3.6%(n=3)。该方法简单快速,重现性好,适用于饲料添加剂吡咯喹啉醌二钠的定量检测。     

30％腈吡螨酯悬浮剂防治草莓二斑叶螨田间药效试验

目的:研究30％腈吡螨酯悬浮剂在不同剂量下对草莓二斑叶螨的防治效果并明确其最适用量,为其田间应用提供科学依据.方法:分别于2019—2020年在河北省保定市满城区邵家庄村使用喷雾器将不同剂量的30％腈吡螨酯悬浮剂均匀喷洒于草莓植株各部位.结果:对草莓喷药1次,14d后30％腈吡螨酯悬浮剂有效成分含量75、100、150mg/kg对草莓上的二斑叶螨防效均达到93％以上.结论:30％腈吡螨酯悬浮剂有效成分含量75～150mg/kg对草莓二斑叶螨的防效显著,可作为高效低毒的药剂进行推广.     

HPLC同步检测肥猪散中儿茶素、间苯三酚、二苯乙烯苷三种活性成分的研究

本文建立了HPLC同步测定肥猪散中2，3，5，4-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、（+）-儿茶素、间苯三酚的方法，肥猪散经50%乙醇提取，以甲醇-0.1%磷酸水为流动相进行梯度洗脱，C18色谱柱分离，254 nm波长检测。结果显示：2，3，5，4-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷在0.5 ～ 2.5 mg/L呈良好的线性关系，（+）-儿茶素、间苯三酚在0.25 ~ 2.0 mg/L呈良好的线性关系，加样回收率分别为（98.84±1.92）%、（99.60±1.13）%、（97.40±1.59）%|重复性良好，相对标准偏差＜5%。可见本方法适用于同步检测肥猪散中上述三种成分的含量。 [关键词] 高效液相色谱|肥猪散|间苯三酚|儿茶素|二苯乙烯苷     

不同花期不同部位安梨花序香气成分分析

安梨花序具有特殊香气,试验通过建立顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用(HS-SPME-GC-MS)的方法定性定量分析安梨花序的香气成分,对不同时期不同部位的安梨花序香气成分含量做了分析比较.在不同花期的比较中,对苯醌在三个时期含量都很高,花苞期最高;在不同部位的比较中,2-甲基-1-硝基萘在花托中含量最高,正十四烷在花药中含量最高;在边缘花和中心花的比较中,正十四烷在边缘花中含量较高,对苯醌在中心花中含量较高。     

二甲戊乐灵、异丙隆、乙氧氟草醚土壤处理对美国红枫杂草防效及安全性研究

为了明确33%二甲戊乐灵、24%乙氧氟草醚、50%异丙隆土壤处理剂在美国红枫‘秋火焰’扦插田杂草防除效果及安全性,于2018年5月在盛世绿源科技有限公司大连研发基地进行除草试验。结果表明:供试药剂33%二甲戊乐灵1728g/hm~2、2160g/hm~2与24%乙氧氟草醚180g/hm~2、216g/hm~2施药剂量对美国红枫‘秋火焰’扦插苗的生长几乎无影响,对美国红枫‘秋火焰’较安全,并且株防效均在80%以上,对独行菜、稗草、野燕麦、马唐、酸模叶蓼等防效均较好,但对野茼蒿、播娘蒿防除效果一般。以24%乙氧氟草醚180g/hm~2对杂草的防除效果最好。异丙隆1500g/hm~2株防效仅达70%,防除效果不理想,2250g/hm~2虽然有较高防效,但对美国红枫‘秋火焰’不安全,故异丙隆不宜在美国红枫‘秋火焰’扦插田应用。     

应用枇杷二代测序数据进行染色体步移研究

【目的】枇杷基因组数据尚未公布,限制了枇杷分子生物学的研究。当前很多研究集中在上游转录因子和下游基因启动子之间的调控关系上,所以获得目的基因的启动子显得尤为重要。传统方法使用PCR方式进行染色体步移来获得启动子区域,耗时且难出结果。【方法】对‘火炬’枇杷进行二代测序,二代测序为双端测序,片段含盖200到500bp的序列。根据下游基因序列通过测序片段来实现染色体步移。使用现有程序Magicblast和新开发的Promoter_Scan脚本程序来快速获取目的基因启动子区域。Promoter_Scan对每对Reads构建10 bp的索引序列,先使用索引匹配目的基因,匹配后使用目的基因前30 bp序列再次匹配目标Reads,最后完成拼接。【结果】通过二代测序共获得61.77 GB的‘火炬’枇杷基因组数据,测序深度约为85倍。使用Magicblast检索匹配Reads耗时长,难以二次开发,需要手动拼接延伸,每个基因启动子挖掘需要9.5 h。新开发Promoter_Scan脚本程序通过两次匹配,能够更快更准确地找到启动子序列。对枇杷中8个基因进行启动子查找,向上延长2 000 bp序列平均需要拼接11.7次,耗时21.3 min。根据步移后的序列设计引物进行验证,结果显示:Sanger测序结果和预测的序列高度一致。【结论】使用Magicblast检索方式能够达到实验要求,不需要编程技能,但是耗时长。Promoter_Scan能够实现自动延伸,显著缩短启动子挖掘时间。本研究中的两种方法不仅可以用于枇杷分子生物学的研究,对其他未公布基因组数据的物种同样适用。     

寄主植物中抑制十字花科黑腐病菌Ⅲ型分泌系统小分子化合物的鉴定

 寻找抑制植物病原菌III型分泌系统的植物源活性小分子化合物,是研发生物安全农药的重要途径之一。本研究采用水煮提取法从十字花科黑腐病菌寄主植物满身红萝卜中提取分离活性小分子化合物,利用高效液相-质谱联用解析出活性物质的单体结构。然后用荧光素酶基因luxAB构建融合报告系统以及定量PCR检测活性物质对十字花科黑腐病菌III型分泌系统的抑制效果,最后采用剪叶接种和压渗接种的方法研究活性小分子物质对十字花科黑腐病菌的生防作用。研究表明,植物鞘氨醇和二氢鞘氨醇对十字花科黑腐病菌III型分泌系统基因的转录表达有一定程度的抑制作用,但是对I、II、IV型分泌系统基因的表达没有明显的抑制作用。植物鞘氨醇在XCM1上影响菌的生长,而二氢鞘氨醇不影响菌的生长。同时,还发现这两种物质能显著降低Xcc在寄主植株满身红萝卜上的病害症状以及能够使Xcc在非寄主植物辣椒上引起过敏反应的能力丧失。该研究结果为深入研究小分子化合物对十字花科黑腐病菌III型分泌系统的作用机制及后续开发植物源抑制剂提供了一定的理论依据。     

牦牛瘤胃微生物抗生素抗性基因对3种外源性刺激因子的响应

通过给牦牛投喂硫酸头孢喹肟(CEF)、盐酸二氟沙星(DIF)和黄曲霉毒素B1(AFB1),并进行瘤胃微生物宏基因组测序,旨在揭示这3种外源性刺激因子对抗生素抗性基因(ARGs)种类、抗性类型、抗性机制等的影响,对于深入研究微生物抗性组特征和抗性机制具有重要价值。选取15头牦牛,随机分5组。Cef组和Dif组分别根据说明书推荐剂量按体重计算、灌服CEF 1 mg·kg^-1和DIF 1 mL·kg^-1;E1组和E2组分别按采食量投喂AFB120、60μg·kg^-1;C组为对照组。处理7 d后,采集瘤胃液,提取DNA,Illumina HiSeq测序,对reads counts进行标准化得到TPM值,并进行方差分析。结果显示,对照组共获得132种ARGs,分属30种抗性类型,其中,四环素类tetQ和tetW基因丰度较高;Cef组tetW基因丰度增加(P<0.05),Dif组tetQ丰度增加(P<0.05);Cef组四环素类和头孢菌素类抗性基因丰度增加(P<0.05),Dif组四环素类和氨基香豆素类抗性基因丰度增加(P<0.05),E1组氨基香豆素和青霉烯类抗性基因丰度增加(P<0.05),E2组青霉烯类、头孢菌素类等9类抗性基因丰度均增多(P<0.05);Dif组Erm基因23S核糖体RNA甲基转移酶丰度增加(P<0.05),E2组中ATP结合盒超家族等3种抗性机制相关基因的丰度增加(P<0.05);3种因子均显著增加四环素类ARGs宿主的种类。结论:瘤胃是蕴含丰富ARGs的储藏库,其中,四环素类抗生素抗性基因tetQ和tetW是主要的ARGs。不仅CEF和DIF使部分ARGs的种类、抗性类型以及耐药机制相关酶等的丰度升高,增加瘤胃微生物的耐药性,而且AFB1也具有类似作用,且高剂量AFB1对抗性类型的影响范围较抗生素大。这3种因子还导致携带四环素类ARGs宿主微生物的种类数量增加,从而强化横向转移机制,加快ARGs传播,增强微生物对四环素类的耐药性。