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1.
含组氨酸标签的枯草杆菌5-氨基酮戊酸脱水酶的高效表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
以枯草杆菌基因组为模板,通过PCR扩增枯草杆菌编码5-氨基酮戊酸脱水酶基因hemB.将NdeⅠ和EcoRⅠ双酶切的纯化产物插入同样处理的pET-28a中构建成表达载体.表达蛋白的N端含有6个组氨酸标签.构建的表达载体转入大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下,重组蛋白获得高效表达.SDS-PAGE检测到41 kD的特异带,表达菌株的上清检测到ALAD的比活为337 mU·mg-1,表明组氨酸标签不显著影响酶活.  相似文献
2.
以牛乳素为目的基因,构建舍有组氨酸标签、人生长激素信号肽的真核表达栽体,为利用牛乳素在活体动物及培养细胞中的表达提供基因材料.用人工合成hGH-Lacf B的序列与T栽体连接,用Xho Ⅰ和BamH Ⅰ酶切后与相应酶切处理的pVAX1连接,取阳性克隆质粒,用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ酶切回收舍hGH的pVAX1载体,再与经过PCR扩增的his-Lacf B连接,酶切鉴定及测序.DNA序列分析表明,携带hGH、6xhis和目的基因Lacf B已成功连接到真核表达栽体pVAX1中.  相似文献
3.
将orf216基因克隆到含有组氨酸标签的原核表达载体pET-30a(+)中,得到重组质粒pET-30a(+)-orf216,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)plys菌株感受态细胞,经IPTG诱导后,SDS-PAGE和Western Blot检测分析表达产物。通过Ni-NTA亲和层析系统纯化获得高纯度目的蛋白。研究结果表明,成功构建了pET-30a(+)-orf216原核表达载体并转化大肠杆菌。SDS-PAGE和Western Blot结果显示30 ku处有单一条带,确定其能高效表达并且诱导表达产物为ORF216蛋白。同时对利用Ni-NTA层析系统纯化高纯度高含量ORF216融合蛋白的条件进行了优化。  相似文献
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