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1.
华南番木瓜病毒病及环斑病毒株系的调查鉴定   总被引:15,自引:0,他引:15  
根据田间调查、病毒粒子和内含体形态、血清反应、寄主范围和症状、昆虫介体、物理性质、潜育期等试验结果、认为华南4省区的番木瓜病毒病只有PRV一种。根据在西葫芦上的症状特点,将PRV初步区分为4个株系,即Ys、Vb、Sm和Lc。在313份标样中,它们单独所占比例分别为40.57%,10.22%,0.64%,4.47%,Ys+Vb(复合侵染)占44.08%,这表明Ys为优势株系,Vb次之,Lc和Sm发生少分布不广。研究结果还表明,以前有人报道的PMaLV实则是本研究的Vb,而不是一个新病毒。  相似文献
2.
番木瓜环斑病毒融合基因植物表达载体的构建   总被引:11,自引:2,他引:9  
利用PCR重叠延伸技术(gene splicing by overlap extension,SOE)将番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)Vb株系的外壳蛋白(coat protein,CP)基因和Ys株系的复制酶(replicase protein,RP)基因构建成融合基因VY。同时对常规的SOE法进行了改进,并对改进的SOE的反应体系进行了优化,其中以Pyrobest DNA聚合酶和60℃的退火温度为最佳。将融合基因n’构建在植物表达载体pCAMBIA2300上,测序结果表明,该融合基因的序列与设计相符。融合基因VY植物表达载体的构建,可为进一步获得对PRSV广谱抗性的转基因番木瓜奠定基础。  相似文献
3.
番木瓜环斑病毒株系的生物学和血清学研究   总被引:8,自引:0,他引:8  
本文对华南地区番木瓜环斑病毒的Ys,Vb和Sm3个株系和夏威夷HA5-1弱株系的生物学和血清学等进行了进一步的研究。确证了PRV在华南地区至少有3个株系。在株系间亲缘关系方面,华财3个株系间的关系较密切,而与HA5-1株系的较疏远。在西葫芦植株体内增殖和运转,Sm株系病毒增殖和运转最快,在体内的浓度最高;Vb次之;Ys再次之;而HA5-1则更次之。  相似文献
4.
SYBR-Green实时荧光PCR检测转基因番木瓜   总被引:4,自引:0,他引:4  
分别以RBCL基因和PRsV-cP基因、PRSV-RP基因为内源基因和目标基因,设计了3对特异性引物,对转基因番木瓜进行了SYBRGreen实时荧光PCR检测.结果表明,RBCL基因引物对所有供试样品成功扩增,0值为15~16,PRSV-CP引物对转PRSV-CP基因番木瓜样品成功扩增,Ct值为20~25,PRSV-RP引物对转PRSV-RP基因番木瓜样品成功扩增,Ct值为21~22.运用熔解曲线进行产物分析,验证了试验结果的特异性和准确性.  相似文献
5.
转基因番木瓜抗病性测定和纯合系的获得   总被引:3,自引:0,他引:3  
分别对转番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)复制酶基因(Trp)的T3、T4代番木瓜(Carica papaya L.)品系在苗期进行攻毒试验和PCR分子生物学分析.结果表明,在苗期T3、T4代分子检测阳性株均高抗PRSV的Ys株系,证实Trp基因能够在后代中稳定遗传.除品系Trp-6-2外,其它所有T3、T4代自交植株仍有基因分离.Trp-6-2的自交株和其T4杂交后代,苗期攻毒试验均表现抗病,PCR检测复制酶基因均为阳性,所转基因没有发生分离,可以初步推定Trp-6-2为转基因的纯合系.大田病情调查结果表明,T3代在定植田间的前5个月内,转基因植株均高抗PRSV.但在定植5个月后发现一个转基因品系38株中有3株表现发病.  相似文献
6.
华南地区番木瓜斑斑病毒和畸形花叶病毒调查鉴定研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
调查鉴定了广州,南宁,厦门和福州市番木瓜病毒病病原种类,发现都是由番木瓜环斑病毒引起的,未发现番木瓜畸形花叶病毒。  相似文献
7.
番木瓜环斑病毒的提纯研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
详细报道了影响番木瓜环斑病毒(PRV)粗提纯效果的几个主要因素(繁殖寄主种类,有机澄清剂,分散剂,病毒浓缩前的去渣离心力,浓缩病毒的超离心力等)的最佳选择,繁殖寄主以角葫瓜最好。该研究综合上述最佳选择而拟定的一次差速离心和一次30%蔗糖硫酸连续密度梯度离心3h的简单程序较好地提供了PRV提纯的病毒有典型核蛋白紫外吸收曲线,A260/A280=1.68,提纯产量为2.56mg/100g西葫芦病叶,所  相似文献
8.
番木瓜环斑病毒海南分离物全基因组结构分析   总被引:2,自引:0,他引:2  
从感病的海南番木瓜叶片中提取总RNA,经RT-PCR和RACE方法分段扩增番木瓜环斑病毒(PRSV)全基因组序列.序列拼接结果显示,PRSV中国海南分离株(HaiNan-P)基因组除3'-末端polyA尾巴外,由10323个核苷酸组成,编码3343个氨基酸.同源性分析表明,HaiNan-P编码的氨基酸序列与GenBank中公布的11株PRSV同源性为89.8%~93.2%,略高于全长核苷酸的82.3%~89.1%.P1蛋白编码区同源性较低,仅为65.4%~80.1%,而HC-Pro、CI及CP同源性相对较高.运用MEGA 3.1软件、NJ法绘制系统进化树,分析结果显示,PRSV分离株类群分化与地理分布有一定的相关性.  相似文献
9.
华南地区番木瓜环斑病毒和畸型花叶病毒调查鉴定研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
调查鉴定了广州、南宁、厦门和福州市番木瓜病毒病病原种类,发现都是由番木瓜环斑病毒引起的,未发现番木瓜畸型花叶病毒。  相似文献
10.
转PRSV复制酶基因番木瓜食品安全性的初步评价   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
应用生物信息学的方法对转基因番木瓜进行实质等同性分析.将复制酶基因与多个数据库中的花生、大豆、坚果、牛奶、鸡蛋、鱼类、贝类和小麦等8类过敏源序列进行比对分析,结果未发现连续8个相同的氨基酸, 据此可初步认为转入的复制酶蛋白不是已知的致敏源.将复制酶基因进行原核表达,并纯化复性表达蛋白,再通过模拟胃肠液消化试验,结果发现纯化的变性蛋白与复性蛋白均能在15 s内降解,表明复制酶蛋白能在人的消化系统内降解,使人体发生过敏的可能性不大.通过液相萃取法,提取转基因与非转基因番木瓜中的一种内源毒物苄基异硫氰酯(benzyl isothiocyanate,BITC),将浓缩后的样品进行气相色谱分析,结果表明BITC的含量在转基因与非转基因番木瓜中差异不显著.  相似文献
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