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1.
人工雄性不育基因和恢复基因的克隆及构建研究   总被引:19,自引:0,他引:19       下载免费PDF全文
 本文报道了用于获得人工雄性不育系的质粒pTABNBAR55和用于获得人工恢复系的质粒pTABSBAR23的构建。用PCR的方法从烟草(Nicotiana tabacum cv.Samsun)中扩增了花药绒毡层特异表达TA29基因上游-291~+12共303bp的片段,称作TA29启动子(简写作pTA29);从解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)中扩增了一种RNA酶及其特异抑制剂基因barnase和barstar。DNA序列分析表明,pTA29和barstar片段均与已发表的序列完全一致,barnase片段在3′端和已见报道的两种序列都有一个碱基的差异,但由此推断的氨基酸序列是一致的,不影响其在植物中的表达。把TA29启动子分别与barnase和barstar基因连接起来构成两个嵌合基因pTA29-barnase和pTA29-barstar,在这两个嵌合基因的3′端加上了260bp的Nos终止子(Nos.ter)以增强其在植物中的表达。然后将一个2.0kb的完整除草剂抗性标记“bar cassettee”插在含有这两个基因的质粒上,作为转化和制种过程的筛选标记。若将 前者导入欲作杂交制种母本的植物中,可以获得雄性不育系;后者导入欲作父本的植物中,可获得恢复系。  相似文献
2.
用农杆菌介导法将大豆球蛋白基因导入水稻   总被引:14,自引:0,他引:14       下载免费PDF全文
在克隆水稻谷蛋白基因Gt1启动子的基础上,以农杆菌双元载体pCAMBIA1301为起点,构建出以该启动子带动大豆球蛋白A1aB1b亚基基因表达的双元载体,并用农杆菌介导法转化水稻获得转基因植株.经PCR检测和后代分析,大豆球蛋白基因已整合入水稻基因组,并在后代中稳定遗传.  相似文献
3.
DREB1A基因植物表达载体的构建   总被引:12,自引:10,他引:2  
以 p Bch质粒为基础 ,构建了分别由 35 s启动子、 rd2 9A启动子调控的 DREB1A基因双子叶植物表达载体p BD35 s、p BD2 9A,其植物选择标记为新霉素磷酸转移酶基因 (N PT ) ,适用于双子叶植物的遗传转化。以 p CU质粒为基础 ,构建了分别由 E12启动子、 rd2 9A启动子调控的 DREB1A基因单子叶植物表达载体 p CDE12、p CD2 9A,其植物选择标记为乙酰 Co A转移酶基因 (bar) ,适用于单子叶植物的遗传转化。并分别通过三亲本杂交法和冻融法将重组质粒导入根癌农杆菌 L BA4 4 0 4中 ,为通过农杆菌介导法将 DREB1A基因导入植物奠定基础  相似文献
4.
GRP1.8融合反义4CL1基因调控烟草木质素生物合成   总被引:10,自引:0,他引:10  
该研究成功地将从刺槐 (Robiniapseudoacacia)中克隆得到的定位于形成层表达的GRP1 8启动子 ,分别与GUS报告基因及从毛白杨 (Populustomentosa)中克隆的香豆酸连接酶 (4CL1)基因连接构建成GRP1 8 GUS和GRP1 8 anti 4CL1融合基因 ,转基因于烟草植物 .经组织化学检测分析 ,GUS基因成功地由GRP1 8启动子驱动定位于形成层表达 ;融合基因GRP1 8 anti 4CL1的表达明显地改变了转基因烟草植株的木质素和纤维素的含量和比例 .转基因烟草的木质素含量较对照平均降低了 13 7% ,而转基因植株的纤维素含量较对照升高了 15 6 % .  相似文献
5.
研究克隆了玉米的ubi启动子,以pBI 121为基本载体,构建了含有ubi启动子的中间载体pBI UB及ubi启动子驱动的GFP基因的植物表达载体pBI UG;采用基因枪法将载体pBI UG转入洋葱表皮细胞对启动子活性进行检测,结果表明GFP基因在洋葱表皮细胞中得到了表达。本实验同时采用RT-PCR技术克隆了花生的芪合酶基因(Res),该基因编码的蛋白质的氨基酸序列与已公布的芪合酶的氨基酸序列的同源性为99.49 %,并且164位的活性中心Cys没有发生突变;将该Res基因插入载体pBI UB构建了ubi启动子控制下的花生芪合酶基因植物表达载体pBI UA,并对玉米进行了遗传转化,得到了转化苗。  相似文献
6.
 利用番茄果实特异性启动子-E8启动子,将霍乱肠毒素B亚单位基因(ctb)用根癌农杆菌浸润法转入番茄植株,并使其在果实中特异表达,然后对试验小鼠进行口服免疫,研究转基因番茄果实的免疫原性。结果表明,ctb基因在14株番茄植物基因组中被证实有整合,并在其中2株的番茄果实中有特异性表达,最高表达量分别为455和385 ng·g-1FW,口服免疫后的小鼠血液和肠道粘膜中均检测到抗CTB抗体。表明获得了在番茄果实中特异、高效表达霍乱肠毒素B亚单位基因(ctb)的植物口服疫苗候选植株。  相似文献
7.
 【目的】将A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]的HA基因插入鸡β-actin启动子高效真核表达载体pCAGGS,构建了DNA疫苗质粒pCAGGHA5,以提高H5亚型禽流感DNA疫苗的表达水平和免疫保护效果。【方法】将pCAGGHA5和表达GD/1/96(H5N1)HA基因的质粒pCIHA5通过间接免疫荧光法和Western-blot分析检测转染293T细胞后瞬时表达的HA抗原蛋白,随之将pCAGGHA5及pCIHA5分别以100 ?g和10 ?g剂量一次免疫3周龄SPF鸡,4周后用100 LD50的HPAIV GD/1/96(H5N1)鼻腔途径进行攻击。【结果】间接免疫荧光法和Western-blot分析表明2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,载体pCAGGS表达水平显著高于载体pCI;免疫SPF鸡后,100?g pCAGGHA5可形成5/5的免疫保护,100?g pCIHA5可形成2/4的免疫保护,10?g pCAGGHA5可形成对免疫鸡5/5的免疫保护,而10?g pCIHA5 则基本不能形成免疫保护,pCAGGHA5诱导的HI抗体水平远远高于pCIHA5。【结论】鸡β-actin启动子表达载体pCAGGS可显著提高HA基因体外表达水平和H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平,增强免疫保护效果。  相似文献
8.
不同启动子调控的DREB1A基因对黄瓜的遗传转化   总被引:6,自引:0,他引:6  
以黄瓜(CucumissativusL.)主栽品种长春密刺的子叶节为受体材料,采用农杆菌介导法,将分别由诱导型启动子rd29A和组成型启动子35S调控的转录因子DREB1A基因导入黄瓜,获得大量PCR阳性植株。统计结果表明:诱导型启动子rd29A调控的DREB1A基因抗性芽率和再生植株PCR阳性率明显高于组成型启动子35S。  相似文献
9.
转基因鱼的研究进展   总被引:5,自引:0,他引:5  
转于的外源基因构建需要有妄动仓,目的基因和终止子等,常用外源基因的导入方法有显微注射,电穿孔等,并介绍了外源基因表达模式及常用的标记基因。转基因鱼的研究比较落后,当务之急是从分子水平上分析鱼类的生理现象及表达基因的结构。  相似文献
10.
mRNA差异显示技术的研究进展   总被引:5,自引:0,他引:5  
针对mRNA差异显示技术中的假阳性高和放射性污染等缺陷.文章从改进引物设计、应用非放射性标记、优化PCR参数、假阳性鉴定等方而进行了综述。①采用4种兼并或单碱基引物作锚定引物;用特异和长序列(≥20bp)专一性引物作为随机引物.可增加特异性;在锚定引物之前加上了一段T 启动子序列.在随机引物前加上一段M 重复序列.可使DDRT—PCR的体系的扩增特异性更一致。②针对放射性同位素检测法的缺点。文章提出并比较了几种常用的非放射性同位素标记方法。③保证起始(模板)mRNA质量和浓度,降低dNTP浓度,选择最适的反转录和PCR退火温度.可优化PCR参数。④用两种不同的反转录酶进行反转录平行实验,很容易区分出RNA制备过程中造成的假阳性.目前假阳性鉴定大多还是以Northern印迹为基础,再作些适当的改进。  相似文献
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