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1.
通过体外DNA重组技术将P25基因连接在pET28a(+)载体上,构建成重组质粒。经PCR扩增、酶切鉴定及DNA序列分析,融合的P25基因序列正确。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经过亲和层析得到纯品目的蛋白P25。  相似文献
2.
 将人工合成的人胸腺肽α1(Tα1)基因插入到载体pBV222,转化大肠杆菌DH5α菌株并置42℃诱导表达可溶性融合蛋白。融合蛋白经镍亲和层析柱纯化,加入肠激酶切割,再将酶切反应体系回到镍亲和层析柱。所获穿过液中的重组胸腺肽α1(rTα1),经十二烷基硫酸钠-聚苯烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和反相高效液相色谱(RP HPLC)分离及分析,纯度分别为94.5%和72%。以癌症患者外周血淋巴细胞开展玫瑰花环试验,所获rTα1纯品显示出与化学合成Tα1(sTα1)相同的生物学活性。  相似文献
3.
分析甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)围食膜几丁质结合蛋白SeCBP66氨基酸序列,利用PCR技术扩增获得缺失信号肽编码区围食膜几丁质结合蛋白的基因△(s)-secbp66。将△(s)-secbp66克隆到表达载体pET28a和pPIC9K,分别转化大肠杆菌BL21和毕赤酵母GS115进行原核及真核表达;将△(s)-secbp66克隆到质粒pFastBacTM,转化大肠杆菌DH10Bac构建重组Bacmid,转染昆虫细胞系Sf9及BTI-TN-5B1-4(HighFive)从而在昆虫细胞系中进行表达。结果表明:SeCBP66在原核细胞中未见表达,在酵母细胞中表达产物呈弥散状,而在昆虫细胞系中则能稳定的表达116kDa的特异蛋白。  相似文献
4.
从野油菜黄单胞杆菌(Xanthomonas campestris pv.Campestris)中PCR克隆得到删除信号肽的纤维素酶基因engXCAΔSP,并成功使用CPEC(circular polymerase extension cloning)方法构建了原核表达载体pET28a-engXCAΔSP;将该载体转入大肠杆菌rosetta(DE3)中,用IPTG诱导蛋白质的表达;通过Ni-NTA树脂非变性亲和纯化到了较纯的蛋白。SDS-PAGE电泳结果表明:engXCAΔSP基因编码出约50 kD的蛋白质ENGXCAΔSP。然后对该酶成功进行了固定化。该酶比活为60 U.mg-1,固定前后最适温度为53℃与62℃,最适pH为5.4与5.8,动力学常数分别为Vmax:411μmol.mL-1.h-1与383μmol.mL-1.h-1,Km:0.2500%与0.3125%。  相似文献
5.
<正>项目来源:黑龙江省科技计划(GAO06B202)技术水平及获奖专利情况:发明专利名称:人工设计原核表达系统高效表达牛α干扰素成熟多肽的基因。专利申请号:200810064638.6项目简介:干扰素是一族具有抗病毒、影响细胞生长、分化和调节免疫功能等活性的蛋白质。牛α干扰素对牛的许多病毒性疾病都有明显的治疗效果,生产实践之中,将牛干扰素作为疫苗佐剂,与治疗不同疾病的疫苗联合,可以研制出免疫效果更好的新型疫苗,对牛病防治产生积极的影响。利用基因重组干扰素来防治家畜的病毒性疾病,是一种非常有效的手段。  相似文献
6.
为了研制番茄口服疫苗,按番茄偏爱密码子设计合成了编码诺如病毒(Norovirus,NVs)VA387毒株P粒子(P particles)基因PGENE(1 039 bp),并在该基因5'端添加了编码His-tag(6×His)的DNA序列。将构建的原核表达载体pMAL-c2-PGENE导入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3 free),用1 mmol/L的IPTG(Isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside)诱导P粒子在BL21(E.coli)中表达。依据SDS-PAGE胶检测结果,对诱导温度(37℃)和时间(6 h)进行了优化,用Western blot技术证实了重组P粒子特异性和免疫活性,为研制番茄口服NVs(VA387)亚基疫苗-P粒子做了必要的准备。  相似文献
7.
随着世界分子生物学的研究不断发展,基因表达技术有了很大的提高。到目前为止,人们已经研究出多种原核和真核表达系统用以生产重组蛋白。原核生物表达系统主要有大肠杆菌表达系统、枯草芽孢杆菌表达系统等;真核生物表达系统主要包括酵母表达系统、丝状真菌表达系统等。各种表达系统各具优缺点,对其进行了详细介绍。  相似文献
8.
将含缺失跨膜区M2蛋白重组质粒pGEXsM2的大肠杆菌,用终浓度为0.6mmol/L IPTG在37℃下诱导表达,获得可溶性表达的融合蛋白;在Western blot试验中,M2特异性单克隆抗体14C2与目的蛋白发生反应,在35kD处有一条特异性条带,表明表达的重组M2蛋白具有免疫学活性;表达产物使用GST亲和吸附柱进行纯化,获得了大量的目的蛋白及微量的GST蛋白,使用分光光度仪确定纯化后M2蛋白的浓度约为5.6mg/mL。本实验为进一步研究M2生物学特性、建立M2特异性抗体的间接ELISA检测方法及研制M2亚单位疫苗奠定了基础。  相似文献
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