寄主植物中抑制十字花科黑腐病菌Ⅲ型分泌系统小分子化合物的鉴定

 寻找抑制植物病原菌III型分泌系统的植物源活性小分子化合物,是研发生物安全农药的重要途径之一。本研究采用水煮提取法从十字花科黑腐病菌寄主植物满身红萝卜中提取分离活性小分子化合物,利用高效液相-质谱联用解析出活性物质的单体结构。然后用荧光素酶基因luxAB构建融合报告系统以及定量PCR检测活性物质对十字花科黑腐病菌III型分泌系统的抑制效果,最后采用剪叶接种和压渗接种的方法研究活性小分子物质对十字花科黑腐病菌的生防作用。研究表明,植物鞘氨醇和二氢鞘氨醇对十字花科黑腐病菌III型分泌系统基因的转录表达有一定程度的抑制作用,但是对I、II、IV型分泌系统基因的表达没有明显的抑制作用。植物鞘氨醇在XCM1上影响菌的生长,而二氢鞘氨醇不影响菌的生长。同时,还发现这两种物质能显著降低Xcc在寄主植株满身红萝卜上的病害症状以及能够使Xcc在非寄主植物辣椒上引起过敏反应的能力丧失。该研究结果为深入研究小分子化合物对十字花科黑腐病菌III型分泌系统的作用机制及后续开发植物源抑制剂提供了一定的理论依据。     

蟛蜞菊醇提物对原代鸡胚心肌细胞抗热应激作用研究

为探究蟛蜞菊醇提物对原代鸡胚心肌细胞抗热应激作用的影响。研究选取12胚龄的文昌鸡胚构建原代心肌细胞体外模型。采用MTT法测定蟛蜞菊醇提物对心肌细胞活性和抗热应激损伤的影响。通过研究热应激组(45℃)与常温组(37℃)的心肌细胞上清液中AST和LDH含量变化,并运用Western Blot检测细胞中Hsp70的表达量,分析醇提物对减缓心肌细胞抗热应激损伤的作用。蟛蜞菊醇提物浓度为0.5～50μg/ml时对心肌细胞无毒性并具有促进活性作用。热应激处理下,醇提物浓度为5～20μg/ml时能够极显著提高心肌细胞的活性(P<0.01),并降低AST和LDH酶含量(P<0.01)。同时,蟛蜞菊醇提物促进了Hsp70的表达量,且表现出浓度依赖性作用,并且在蟛蜞菊醇提物浓度为20μg/ml时作用最佳。结果表明,适当浓度的蟛蜞菊醇提物可以有效减缓热应激对原代鸡胚心肌细胞的损伤,并诱导细胞显著提高Hsp70表达。     

四川老鹰茶醇提物的抑菌及抗氧化活性研究

以四川3个不同地区的老鹰茶及老鹰茶植物的鲜叶为原料,采用超声波辅助提取技术提取醇提物,测定多酚和黄酮含量以及抑菌和抗氧化性活性.结果表明:6种样品醇提物的提取率最高的为石棉老鹰茶鲜叶,为(26.73±0.68)％;总多酚和总黄酮含量最高的是石棉老鹰茶鲜叶,分别为(22.10±0.11)％和(16.77±0.14)％.6种样品醇提物对4种细菌均有抑制作用,且提取物浓度越高抑菌效果越强;其中石棉老鹰茶鲜叶对痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)抑制效果最好,抑菌圈直径达到(2.56±0.09)cm.6种样品醇提物的DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)自由基清除能力和总还原能力均高于对照品BHT(2,6-二叔丁基对甲酚).6种样品抑菌和抗氧化能力结果由强到弱为石棉老鹰茶鲜叶>叙州老鹰茶鲜叶>青川老鹰茶鲜叶>石棉老鹰茶>叙州老鹰茶>青川老鹰茶.试验表明四川3个不同地区的老鹰茶及老鹰茶植物的鲜叶均具有较强的抑菌和抗氧化活性,其中石棉老鹰茶植物的鲜叶相对更好,可优先开发利用.     

利用VIGS技术研究广藿香醇合酶基因PatPTS的功能

广藿香精油主要存贮在植物地上组织的盾状腺毛中。提取广藿香(马来西亚品系)叶片的总RNA后,通过PCR技术扩增得到广藿香醇合酶基因(Pat PTS)的全长c DNA序列,共编码552个氨基酸,与Gen Bank中已报道的印度广藿香中广藿香醇合酶的氨基酸序列存在3.6%的差异。使用烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV),选取Pat PTS作为沉默目的基因,在广藿香中构建病毒诱导基因沉默(VIGS)体系,进一步利用该体系在广藿香中鉴定Pat PTS基因的功能。病毒侵染广藿香叶片后,分别选取不同的时间点,使用GS-MS与qRT-PCR检测Pat PTS催化产物和转录水平的变化,结果发现:β-广藿香烯、β-榄香烯、石竹烯、广藿香醇等倍半萜成分的含量在VIGS侵染后第2周明显下降,1周和3周效果不明显;Pat PTS转录本下降趋势与其调控的倍半萜含量变化趋势类似;表明Pat PTS基因负责了广藿香精油主要倍半萜成分的合成。说明广藿香中VIGS体系已初步建立,并在侵染植物2周后诱导基因沉默和干扰次生代谢产物合成的效果最好,为在广藿香中快速研究基因功能打下基础。     

296位氨基酸位阻效应影响黄花蒿没药醇合酶环化反应的起始

【目的】探究黄花蒿没药醇合酶第296位氨基酸突变抑制环化反应的机制。【方法】利用Quik Change?Multi Site-Directed Mutagenesis的方法将黄花蒿没药醇合酶的296位氨基酸残基由苏氨酸突变成异亮氨酸。原核表达,蛋白纯化后测定其催化特异性。【结果】黄花蒿没药醇合酶T296I体外催化(2E,6E)-法尼基焦磷酸主产物为非环化的法尼烯;但是将T296I蛋白与中间体(3R,6E)-橙花叔醇焦磷酸一起孵育时可生成环化的主产物α-bisabolol,野生型酶的天然产物。【结论】黄花蒿没药醇合酶T296I点突变进一步证明氨基酸残基的空间体积和立体化学是自然环化反应起始的控制关键,其位阻效应能够抑制法尼基焦磷酸向橙花叔醇焦磷酸转化。     

正交试验对人参多糖水提醇沉工艺的优化

为了得到人参(Panax ginseng)多糖的高效提取方法,以提高人参多糖的提取效率,采用水提醇沉的方法提取多糖,采用L_9(3~4)的正交试验优化人参多糖的工艺;并且在优化工艺条件下对人参样品进行了提取,采用紫外分光光度法测定人参多糖质量分数。结果表明:通过对人参多糖的提取进行单因素考查,选取提取工艺的温度、提取时间、m(人参粗粉)∶V(蒸馏水)、提取次数作为正交试验设计因素(以其中影响较小的因素为误差),按照正交试验方法对人参多糖进行提取工艺优化。提取工艺最佳条件为提取温度100℃、提取时间4 h、提取2次、m(人参粗粉)∶V(蒸馏水)=1 g∶20 mL;按照优化工艺提取人参样品中的多糖,对人参样品中的多糖质量分数进行测定。检测结果表明:市场销售的人参中多糖质量分数变化相差较大,在一定程度上影响人参的使用效果。     

肉桂酸终止低醇葡萄酒酒精发酵的工艺优化

以天津汉沽“玫瑰香”葡萄为原料酿造低醇葡萄酒，以添加SO2终止发酵为对照，以酒精度、酵母菌致死率和稳定性等重要理化指标及感官评价为检测依据，比较了单纯添加不同浓度的肉桂酸（100、150、200、250 mg/L），以及肉桂酸（50、75、100、125 mg/L）协同SO2（60 mg/L）共同终止酒精发酵对酿造低醇葡萄酒品质的影响，并采用高效液相色谱法检测了最终成品酒中肉桂酸的含量。结果表明：单纯添加肉桂酸组和肉桂酸协同SO2组均优于对照组（单纯SO2 组），其中单纯添加250 mg/L肉桂酸终止发酵能获得品质最高且稳定性最好的低醇葡萄酒，其酒精度为6.32%(V/V)，酵母菌致死率达98.58%。所酿低醇玫瑰香葡萄酒呈浅玫瑰红色，澄清透明，果香、酒香平衡，酸甜适中，无酵母味，具有一定的玫瑰香的品种香。该低醇葡萄酒中肉桂酸检测含量为62 mg/L。     

咪唑并嘧啶类杀菌剂对大肠杆菌抑菌活性的QSAR研究

在B3LYP/6-311++(d,p)水平上对26个咪唑并嘧啶类抗菌剂进行全优化和振动分析计算,得到各分子的量子参数、拓扑指数和热力学参数。应用遗传算法(GA)-主成分分析法(PCA)-神经网络(PNN)筛选出与抗菌活性密切相关的6个参数作为分子描述符;采用主成分神经网络方法建立了咪唑类抗菌剂与大肠杆菌抑制活性的定量结构—活性关系(QSAR)模型,同时采用内外部双重验证的方法检验模型的稳定性。模型的统计学参量如下:相关系数的平方(R~2)、留一法(LOO)交互验证相关系数(Q_(LOO)~2)、外部样本验证相关系数(Q_(F1)~2)、均方根误差(RMSE)分别为0.9991、0.9989、0.9996和0.155。结果表明:最低空轨道能(E_(lumo))和正辛醇/水分配系数(logP)是影响咪唑并嘧啶类杀菌剂的抗菌活性的主要因素,模拟外部验证和交叉验证表明模型具有良好的稳健性和预测能力,可用于同系列化合物抗菌活性的预测。     

灰绿碱蓬多糖脱蛋白工艺研究

蛋白本身具有热敏感性,糖蛋白复合物在脱除蛋白质以后,多糖自身的生物活性会明显增加。本文测定了灰绿碱蓬根、茎、叶的基本营养成分,采用水提醇沉法提取了灰绿碱蓬多糖,并优化了多糖脱蛋白工艺比较了Savage法、(NH4)SO4沉淀法、TCA法和酶-Savage法这4种方法的脱蛋白效果。结果显示,灰绿碱蓬多糖的最佳脱蛋白方式为酶-Savage法,酶添加量为7%,Savage溶液处理一次,此条件下脱蛋白效果和多糖保留率均最好,蛋白质脱除率为80.71%,多糖保留率为67.27%。