硅藻土吸附固定化Bacillus sp.DL-2胞内蛋白酶拆分制备(S)-乙酸苏合香酯

[目的](S)-乙酸苏合香酯是手性药物合成的关键手性砌块,其在多种手性化合物的合成及医药、香料的工业生产中具有重要的作用.传统的化学合成手性化合物的方法需要有毒有机溶剂及重金属的参与,对环境及人类具有严重的危害,同时得到的手性化合物的光学纯度较低.与传统的化学合成相比,酶法选择性拆分消旋体化合物,具有高立体专一性和区域选择性、副反应少、产率高、产物光学纯度好以及反应条件温和的优点,是一种被广泛认可的拆分方法.实验表明,Bacillus sp.DL-2胞内蛋白游离酶可拆分制备(S)-乙酸苏合香酯,然而游离酶不易回收且稳定性差,将Bacillus sp.DL-2胞内蛋白游离酶制备成固定化制剂,克服了游离酶对环境敏感,稳定性不高的缺点,为工业化生产(S)-乙酸苏合香酯奠定了基础.[方法]酶的固定化方法主要有物理吸附法、离子结合法、共价结合法、交联法和包埋法.以吸附法固定酶,酶的构象很少改变,因此,酶的催化活力损失较少;且吸附法固定化操作过程简单,因此吸附法在经济上是最具吸引力的固定化方法.硅藻土由硅藻的细胞壁沉积而成,硅藻土表面的多孔性与负电性使其呈现明显表面吸附性,因而被常用做吸附载体.以硅藻土作为固定化载体,对Bacillus sp.DL-2胞内蛋白酶进行固定化,用以拆分制备高光学纯的(S)-乙酸苏合香酯.利用单因素实验优化,确定制备固定化酶的最佳固定化条件及制备(S)-乙酸苏合香酯的最佳拆分条件,并测定了制备的固定化酶对金属离子的敏感度及储存稳定性.[结果]最佳固定化条件为:温度40℃,pH为7,固定化时间10 h,载体添加量100 g/L.在最佳固定化条件下制备了固定化酶,优化确定了制备(S)-乙酸苏合香酯的最佳拆分条件为:固定化酶用量为160 mg/mL,拆分时间7 h,拆分温度30℃,缓冲液pH为7.[结论]在最佳固定化及拆分条件下,制备的(S)-乙酸苏合香酯e.e.值可达到96.8％,转化率为73.9％,且固定化酶对金属离子敏感度较低,对反应环境要求较低,适用于工业化生产.固定化酶在4℃条件下储存,随保存周数的增加,e.e.值及转化率均逐渐降低,但4周后e.e.值仍能达到90.1％,转化率保持在66.6％左右,具备较高的储存稳定性,为工业化生产(S)-乙酸苏合香酯提供了参考.     

烯虫酯原药中S-对映体的手性拆分及测定方法研究

本文采用高效液相色谱法,以正己烷及异丙醇混合溶剂为流动相,用CHIRALPAK AD-H色谱柱和二极管阵列检测器,在270nm下,对烯虫酯对映体进行拆分,并用外标法测定烯虫酯中S体的含量,该方法的线性相关系数为:0.999 5,标准偏差为:0.20,变异系数为:0.21%,平均回收率为:99.55%,结果表明:该方法可用于测定S-烯虫酯原药的含量。     

需求可拆分的车辆路径问题的分段求解

将需求可拆分的车辆路径问题分成两阶段求解，针对单车场、单车型、无时间窗要求、纯装货或纯卸货情况，分别设计了先分组后路径及先路径后分组算法求解．通过实验表明，在成本上，先分组后路径求得的解好于先路径后分组求得的解，且比现有蚁群算法和禁忌搜索算法求得的成本更低，但先路径后分组的方法可以避免一个点的需求被拆分成两次以上满足，求解速度也更快．     

(±)-N-(2,6-二甲苯基)-丙氨酸甲酯的脂肪酶酶促水解拆分方法

酶法拆分(±)-N-(2,6-二甲苯基)-丙氨酸甲酯,其反应体系为:在含1 mmol (±)-N-(2,6-二甲苯基)-丙氨酸甲酯的100 mL 0.2 mol·L-1磷酸缓冲液(PBS)中,添加2 g 聚乙二醇(PEG-6000),并用皱落假丝酵母脂肪酶(Candida rugosa lipases,CRL)拆分,反应后分离得到R-(+)-N-(2,6-二甲苯基)-丙氨酸甲酯.进一步采用高效液相色谱检测酶促反应的转化率,采用250 mm× 4.6 mm,5 μHypersilODS色谱柱,以甲醇与水混合液(体积比为80: 20)为流动相, 230 nm为检测波长,外标法峰面积定量.(±)-N-(2,6-二甲苯基)-丙氨酸和其甲酯的回收率在91.5%～96.1%之间.     

拆分销售种子包装行为违法性分析

在农作物种子经营过程中，经常可以看到未办理农作物种子经营许可证而专门销售不再分装的包装种子的商家，根据购种者的要求，擅自拆开种子外包装，随意称量、粗糙包装后出卖。此类现象在农作物种子销售中发生得比较普遍，符合少量购种者的实际需求。但行为本身具有一定的社会危害性，违反了《中华人民共和国种子法》(以下简称《种子法》)的有关规定，属于法律禁止的行为。在农业行政监管过程中，如何正确把握此类行为的违法性质，大家有着不同的认识，实践中形成了几种具有代表性的意见。一是认为经营者的行为属无种子经营许可证经营种子；二     

（±）-N-（2,6-二甲苯基）-丙氨酸甲酯的脂肪酶酶促水解拆分方法

酶法拆分（±）-N-（2,6-二甲苯基）-丙氨酸甲酯,其反应体系为：在含1 mmol（±）-N-（2,6-二甲苯基）-丙氨酸甲酯的100 mL 0.2 mol.L-1磷酸缓冲液（PBS）中,添加2 g聚乙二醇（PEG-6000）,并用皱落假丝酵母脂肪酶（Candida rugosalipases,CRL）拆分,反应后分离得到R-（＋）-N-（2,6-二甲苯基）-丙氨酸甲酯。进一步采用高效液相色谱检测酶促反应的转化率,采用250 mm×4.6 mm,5μHypersil（ODS色谱柱,以甲醇与水混合液（体积比为80∶20）为流动相,230 nm为检测波长,外标法峰面积定量。（±）-N-（2,6-二甲苯基）-丙氨酸和其甲酯的回收率在91.5%-96.1%之间。     

分子蒸馏技术拆分蛇床子油及GC-MS分析

[目的]采用分子蒸馏技术拆分蛇床子油,并进行气相色谱-质谱(GC-MS)分析.[方法]短程分子蒸馏分为两级,一级蒸发温度为60℃、真空度50.0 mbar,二级蒸发温度为60℃、真空度5.0 mbar,进样温度均为30℃、冷凝温度10℃、刮膜转速200 rpm.利用GC-MS对蛇床子油及不同馏分物进行成分分析.[结果]两级分子蒸馏共得到3部分馏分物,总上样量为346.70 g,回收总计339.82 g,总回收率为98.01％;一级轻组分(DF1)为164.93 g(47.57％),二级轻组分(DF2)为133.42 g (38.48％),二级重组分(RF2)为41.47 g(11.96％).对原油和各级馏分物分别进行GC-MS分析,共检测出28个化合物,主要成分为右旋萜二烯、4-异丙基甲苯、α-蒎烯、1,2-环氧柠檬油精、反-柠檬烯氧化物等,但各部分中成分数量及相对含量差别显著.[结论]分子蒸馏是一种能有效分离纯化挥发油的技术,可应用于挥发油的加工利用.     

配体交换色谱手性流动相法拆分和定量茶氨酸对映体

建立了配体交换色谱手性流动相法拆分茶氨酸对映体的方法。采用PolarisC18柱;流动相为L-脯氨酸:Cu2+(摩尔比)为2:1,Cu2+浓度为0.5mmol/L,pH6.8,甲醇的加入体积比为2%;波长254nm;流速0.9ml/min;柱温30℃。L-茶氨酸的进样量在0.09542μg~4.241μg范围内峰面积与进样量之间线性关系良好,回收率在97.45%~100.4%之间;D-茶氨酸的进样量在0.08486μg~4.243μg范围峰面积与进样量之间线性关系良好,回收率在97.07%~100.1%之间。该方法通用,准确。     

大发展时代的农村青少年——一项关于农村劳动力代际再生产的研究

在田野调查的基础上,通过呈现农村青少年的生活,考察在中国社会大发展背景下,中国农村劳动力代际再生产的模式和现状,并探讨了这种劳动力代际再生产模式对农村青少年的成长,以及他们未来进入劳动力市场产生的影响。反思了目前农村劳动力代际再生产的模式和中国的发展方式,提出发展应该为民众提供更多自由选择的空间。     

植物安全转基因技术研究现状与展望

转基因技术是进行基因功能研究和作物遗传改良的重要工具。根癌农杆菌介导转化法和基因枪轰击法是两种主要的遗传转化方法。从1996年首例转基因作物商业化种植以来,2012年全球有28个国家和地区种植转基因作物,种植面积已达1.7亿公顷。随着全球转基因作物的大面积商业化种植,转基因植物的安全性越来越多地受到公众关注。安全转基因技术的研发对于转基因植物的商业化生产具有重要意义。文章详细介绍了目前已报道的安全转基因技术原理及其应用现状。按其作用原理和目的将其分为4类:安全选择标记、标记基因删除及基因叠加、基因漂移防控法和基因定点编辑整合技术。其中,安全选择标记按其筛选原理分为糖代谢相关标记、氨基酸代谢相关标记、激素相关标记和抗逆相关标记。与抗生素和除草剂抗性标记相比,这类标记基因及其表达产物对人和其他生物更安全。标记基因删除及基因叠加技术包括共转化法、位点特异性重组法、转座子法、同源重组法以及基于位点特异性重组的基因叠加技术,其中共转化法又包括农杆菌介导的共转化法和基因枪介导的表达盒共转化法。基因叠加技术为复合性状转基因植物研发奠定了基础,有望成为未来多性状转基因植物研发的重要技术之一。基因漂流防控法包括叶绿体转化法和基因拆分法。基因定点编辑和整合技术包括锌指核酸酶、TALEN和CRISPR/Cas9系统介导的基因定点编辑和整合技术。其中,TALEN和CRISPR/Cas9技术,设计简单,成本低,易操作,靶点分布广泛,有望成为安全转基因研发和应用的重要技术。文章对这些技术原理及其应用现状进行了综述,讨论了其优缺点,并展望了安全转基因技术研发重点和发展趋势。