四氢嘧啶对热变性凝乳酶复性作用的研究

[目的]加深对部分失活的凝乳酶复性作用的了解,为热稳定性研究中部分失活态凝乳酶的制备提供参考。[方法]研究了四氢嘧啶存在的条件下,复性时间、热处理时间和热处理温度等因素对凝乳酶复性作用的影响。[结果]随着复性时间的延长,凝乳酶的活力逐渐上升。凝乳酶的复性主要发生在前24 h,36 h后凝乳酶活力基本保持稳定,复性后凝乳酶相对酶活力最高可提升21.8百分点,能够测到凝乳酶活力(相对酶活力损失93.3%)的热处理时间,从6 min延长到12 min。在酶活力损失相近时,含四氢嘧啶的凝乳酶在较高温度下(68~70℃)保温较短时间(1~5 min),复性所致的相对酶活力提升显著高于在较低温度下(61~65℃)长时间保温(30~180 min)。[结论]酶的热失活处理的温度和时间对酶分子结构的影响效应并不相同,较长时间的热失活处理比短时高温对酶结构的破坏更彻底。     

蛋鸡α-干扰素基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达与复性研究

根据GenBank中鸡IFN—α序列设计引物对，利用PCR技术克隆并测定了莱航鸡（SPY）的IFN-α基因，命名ChIFN-S1，与GenBank中IFN-α比较，ORF长度均为582个核苷酸，其成熟肽包含162个氨基酸，相互间同源性在98．8％-99．8％。将其成熟肽基因序列克隆入pQE30表达载体后，通过ITPG诱导，收集菌体高压破碎后提取包涵体并进行初步纯化，利用胱氨酸．半胱氨酸再氧化还原法对纯化后的变性液进行分段稀释法复性。细胞病变抑制法（CEF-VSV为检测系统）测定复性液的抗病毒比活性高达10^9U／mg以上．     

手术治疗猪可复性脐疝

脐疝(又名脐赫尼亚)是指腹腔内的器官连同腹膜从天然孔或病理孔脱至皮下或其它腔道内的病症.各种家畜均可发生,但以仔猪、犊牛为多见,是仔猪常见的外科疾病之一.     

重组蛋白包涵体的研究进展

在介绍包涵体形成原因、特性及利弊的基础上,重点阐述了包涵体的复性前准备、主要复性方法及提高复性效率的有效措施。     

苦荞过敏原TBa和TBb基因的共表达及其包涵体复性的研究

[研究目的]利用大肠杆菌共表达苦荞过敏蛋白的两个亚基,并对表达产物进行包涵体复性研究和免疫学活性分析;[方法]用已构建的表达质pET-28a-TBa和pET-32m-TBb,共转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态,利用双抗生素筛选法,获得稳定遗传的双质粒转化子,经IPTG诱导,两个基因在同一宿主菌中共表达,在共表达产物复性过程中,两个亚基互为分子伴侣,相互促进了蛋白质的重新正确折叠;[结果]表迭蛋白以包涵体的形式存在,ELISA检测表明:复性后的蛋白免疫学活性得到了提高;[结论]由此获得了有活性的蛋白质,并且建立了不相容双质粒共表达外源基因和包涵体复性的方法.     

O型口蹄疫病毒VP1基因原核表达及蛋白纯化

以O型FMDV重组质粒pMD18T-O-VP1为模板，利用PCR技术扩增得到O型FMDV-VP1基因片段，将此基因片段与原核表达载体pET32a连接构建重组表达载体pEq32a-O-VP1，经PCR和测序鉴定后，用WIG诱导归1基因的表达，收集不同诱导时间的菌液，进行SDS-PAGE电泳，摸索掌握最佳诱导时间，切取最佳诱导时间电泳胶片做Westem-blotting，分析检验表达产物与其抗血清的反应性。结果显示，分子量约为45ku的蛋白条带反应显著，能被口蹄疫阳性血清识别，表明FMDV-VP1基因在大肠杆菌中得到高效表达，纯化复性的表达蛋白有望开发为诊断抗原和多肽疫苗。     

离子束介导大豆DNA的小麦变异株系蛋白水解酶谱分析

为研究离子束介导大豆DNA的小麦变异株系在返青期、起身期和拔节期的蛋白水解酶变化．采用复性电泳对新乡9号和筛选出的高蛋白变异株系05—10-1和低蛋白变异株系05—6-1，做不同酸碱条件下的蛋白水解酶分析。结果显示．与对照相比。变异株系05-6—1在返青期酸性条件下少检测到一条29kD酶带；在起身期中性和碱性条件下少检测到一条49kD酶带：在拔节期碱性条件下多检测到一条154kD新酶带．而少检测到158kD的酶带：而变异株系05～10—1在这3个生理时期和对照的蛋白水解酶酶谱带型基本一致．主要在某些酶带的酶活上存在差异。     

低能离子束介导大豆DNA的小麦雄性不育变异体蛋白水解酶分析

离子束介导转基因技术[1,2]为远缘分子杂交育种开辟了一条新途径.近年来,这项技术引起了越来越多的育种工作者的关注和应用[3,4],我们运用这项技术,将大豆DNA导入小麦,在当代就获得了一批性状优良的新株系[4].通过对新材料的连续筛选,在第3代发现有个别材料分离出雄性不育变异株(见表1).我们利用复性电泳技术对雄性不育株和可     

波尔山羊脐疝诊治

根据脐疝内容物的活动性。脐疝分为可复性脐疝和不可复性脐疝两种。病初，多数动物的脐疝是可复的。在改变体位时，疝内容物能还纳到腹腔，并能摸出疝轮。此时动物无明显的全身症状，其食欲及精神均正常。若可复性脐疝治疗不及时，可转化为不可复性脐疝。尤其是转化为嵌闭性脐疝时，病畜通常表现出不安、剧痛等全身症状，严重者可死亡。