对草地贪夜蛾高毒力的苏云金芽胞杆菌菌株筛选与杀虫活性研究

草地贪夜蛾是一种世界性重大农业害虫，给玉米等多种主要粮食和经济作物造成严重危害。为实现对草地贪夜蛾的高效、绿色、持续防控，亟需筛选高毒力苏云金芽胞杆菌菌株资源。本研究以前期实验室储备的对斜纹夜蛾、小地老虎具有杀虫活性的363株野生菌株库为候选菌株，基于菌株杀虫基因差异及进化关系，去除冗余菌株后获得172株候选菌株。通过培养获取这些菌株胞晶混合物，进行杀虫蛋白定量后，测定杀虫活性，获得27株对草地贪夜蛾初孵幼虫具有较高杀虫活性的菌株，其中菌株B14-D2的杀虫活性最高，LC₅₀为0.155 μg/g。克隆了该菌株中的cry1Ea3基因并在HD73^-无晶体突变株中表达，Cry1Ea3蛋白对草地贪夜蛾初孵幼虫LC₅₀为1.789 μg/g。本研究为新的Bt产品和杀虫基因的开发利用提供了丰富资源。     

苏云金芽胞杆菌Cry1Ba3 蛋白定点突变对杀小菜蛾活性的影响

Cry1Ba3是由本实验室发掘的对小菜蛾有高毒力的杀虫晶体蛋白。为了寻找对杀虫活性有重要影响的氨基酸,为杀虫机理研究和改造杀虫蛋白提供理论依据,本研究利用Ple Bio Informatique Lyonnais数据库对Cry1Ba3的二级结构进行模拟;采用BioEdit软件分析Cry1Ba3的疏水区;将Cry1Ba3与Cry1Aa1、Cry2Aa1、Cry3Aa1以及Cry4Ba1进行多序列比对,从而确定了20个氨基酸突变位点。利用半重叠引物PCR的方法对Cry1Ba3进行定点突变,将突变体在大肠杆菌BL21中进行诱导表达。通过浸叶法对各个突变蛋白杀小菜蛾的生物活性进行测定。获得的20个Cry1Ba3突变体均能在大肠杆菌BL21中表达,并以包涵体形式存在。杀虫活性测定结果表明M6(R192L)、M10(W303A)、M19(H485G)对小菜蛾的活性明显降低,二级结构预测表明活性降低的突变蛋白的构象均发生明显变化,其余17种突变蛋白的活性和二级结构都没有明显变化。说明第192位的精氨酸、第303位的色氨酸和第485位的组氨酸对Cry1Ba3的杀小菜蛾活性有重要影响,上述3个位点氨基酸突变引起的蛋白活性减低可能与毒素的空间结构变化有关。     

肠溶氧化锌微球在断奶仔猪养殖中的应用研究

试验选用28日龄体况相近的健康断奶仔猪75头,随机分为5组,分别为对照组和分别添1 600 mg/kg氧化锌、500 mg/kg肠溶氧化锌、1 000 mg/kg肠溶氧化锌和1 500 mg/kg肠溶氧化锌试验组,分析肠溶氧化锌微球对断奶仔猪生长性能、腹泻率和肠道微生物菌群的影响。结果表明,与对照组相比,在仔猪日粮中添加氧化锌和肠溶氧化锌都能显著(P0.05)提高断奶仔猪的生长性能,降低腹泻率。其中,添加500 mg/kg的肠溶氧化锌组,日增重分别比氧化锌组和对照组提高了5.40%和13.20%,料重比分别比氧化锌组和对照组降低了6.62%和12.96%,同时有效地提高直肠中乳酸杆菌数量,降低大肠杆菌菌数。试验结果可见,在仔猪日粮中添加500 mg/kg肠溶氧化锌可显著提高断奶仔猪生长性能,降低腹泻率,可替代1 600 mg/kg氧化锌使用,从而减少锌用量,减轻环境污染。     

基质pH值对枳幼苗生长和抗氧化酶活性的影响

利用沙培培养,模拟不同pH值的胁迫环境,研究基质pH值对枳Poncirus trifoliata(L.)Raf.生长和相关生理的影响,为解决基质高pH值对柑桔生产的负效应提供理论基础.结果表明,随着pH值由6.0升高至8.0,枳幼苗的株高、茎粗、叶片数以及地上部、地下部干重也逐渐下降,说明基质高pH值抑制了枳的发育和生长;随着基质pH值的升高,枳幼苗受到的胁迫明显加重,为保护植物体不受胁迫的伤害,植株体内POD、CAT的活性均明显提高,不利于植株生长.     

猪鸡饲料中添加植酸酶的作用

植酸酶 (ｐｈｙｔａｓｅ)是一种重要的饲料添加剂和食品添加剂 ,它越来越受到人们的重视并且越来越普遍应用。植酸酶又被称为肌醇六磷酸酶 ,它是催化植酸以及植酸盐水解成为肌醇与磷酸或磷酸盐的一类酶的总称 ,通常是指 6 -植酸酶(ＥＣ - 3 1 3 2 6 )和 3-植酸酶 (ＥＣ - 3 1 3 8)。畜牧业的饲料成分主要是植物 ,植物材料含有大量的植酸 (肌醇六磷酸 )以及植酸盐。植酸是抗营养因子 ,因为它具有很强的螯合能力并带有负电荷 ,它可以和许多金属阳离子(Ｃａ2 +、Ｍｇ2 +、Ｚｎ2 +、Ｆｅ2 +、Ｍｎ2 +等 )形成不溶性的复合物 ,影响动物的消化和吸…     

巨尾桉EuGR1基因的克隆及其低温胁迫下的表达特性分析

本研究通过反转录PCR方法克隆了巨尾桉谷胱甘肽还原酶（Glutathione reductase,简称GR）基因,该基因定位于巨尾桉细胞质、长度为1485 bp,在NCBI申请基因注册（GenBank Accession Number KU904639）。构建了pET-EuGR1原核表达载体,酶活检测表明转化菌株GR活性较高。利用实时定量 PCR分析巨尾桉EuGR1的时空表达特性,结果表明：EuGR1的表达量随着巨尾桉叶片的成熟而降低,在幼叶中表达量最大,近根部的叶片表达量最低;在巨尾桉组培苗中,EuGR1在茎中表达量最大,叶中表达量较低,根中表达量最低。通过转基因抗寒巨尾桉温室苗研究EuGR1基因在低温胁迫下的表达模式,发现常温和低温胁迫下耐寒性强的株系其EuGR1的表达量较高（如P40、P41、P52）,耐寒性弱的株系其EuGR1的表达量较低（如P36、F44、F76）,说明巨尾桉EuGR1的表达量与植株的抗寒能力具有相关性。随着低温胁迫时间的延长,EuGR1的表达量在36 h后出现降低趋势,表明EuGR1在桉树耐低温胁迫的前期发挥作用较大。     

漳州紫泥围垦区海水中弧菌类群研究

[目的]调查紫泥围垦区海水中弧菌类群组成,为相关病害的预防和控制提供有价值的资料。[方法]采用TCBS(Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose)培养基从紫泥围垦区海水中分离得到48株细菌,应用16S rRNA基因-RFLP(限制性酶切图谱多样性分析)、16S rRNA基因序列及系统进化分析方法对48个菌株进行分子鉴定。[结果]紫泥围垦区海水弧菌包括4个类群,分别为group 1-Vibrio crassostreae,占14.6%;group 2-V.atlanticus,占58.3%;group 3-V.splendidus,占12.5%;group 4-V.lentus,占14.6%。4类弧菌皆属于V.splendidus进化分支,能引起虾类、贝类动物的疾病。[结论]该研究明确了特定时间段内紫泥围垦区弧菌为V.splendidus相关的类群,对于针对性地防控这些弧菌引起的养殖动物疾病具有一定的指导价值。     

一株产脂肪酶芽胞杆菌菌株SJXYZ的鉴定

[目的]对分离自市售高温灭菌牛奶的产脂肪酶菌株SJXYZ进行鉴定。[方法]通过16S rRNA基因序列及系统发育树分析、形态观察和生理生化特性分析,对菌株SJXYZ生物学特性进行初步鉴定。[结果]16S rRNA基因序列分析显示该菌株属于芽胞杆菌属(Bacillus),与B.altitudinis 41KF2b~T(高地芽胞杆菌)、B.xiamenensis HYC-10~T(厦门芽胞杆菌)、B.safensis FO-36b~T(沙福芽胞杆菌)、B.zhangzhouensis DW5-4~T(漳州芽胞杆菌)、B.australimaris NH7I_1~T(南海芽胞杆菌)和B.pumilus A~TCC 7061~T(短小芽胞杆菌)相似度皆为97%以上。系统发育分析显示,该菌株与B.altitudinis 41KF2b~T亲缘关系最近,但形成独立的进化分支,无法归入已知物种。菌株SJXYZ为革兰氏阳性,直杆状,运动性,最适温度为30~35℃,适宜p H为5~9,适宜盐度(Na Cl)为0%~5%;产脂肪酶,不产纤维素酶、淀粉酶、蛋白酶;对氨苄西林(10μg)、庆大霉素(10μg)、氟哌酸(10μg)、头孢唑啉(30μg)、四环素(30μg)、头孢噻吩(30μg)、链霉素(10μg)敏感。所测特性与B.altitudinis 41KF2b~T有较大的差异。[结论]菌株SJXYZ可能为新的物种,暂命名为Bacillus sp.SJXYZ。     

蓝莓不同多酚物质的分离与抑制细胞氧化损伤功能的比较

以大兴安岭野生蓝莓为原料,通过Folin-Ciocalteu法、pH示差法和高效液相色谱法分析蓝莓中的总酚、总花色苷和维生素C(Vc)等功能成分的含量;采用XAD-7大孔树脂、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析法对蓝莓中的不同多酚组分进行分步纯化;以2,2’-偶氮二异丁基脒二盐酸(AAPH)诱导HepG-2细胞氧化损伤为评价模型,比较不同蓝莓多酚组分对抑制细胞氧化损伤的功能,并探讨组分间的协同作用。结果表明:每100g蓝莓鲜果中含有459mg总酚、277mg花色苷和2 721μg VC;在多酚类物质中,蓝莓主要以花色苷和酚酸为主,分别占总酚的40.21%和38.27%,其次为黄酮类,占4.45%;在蓝莓多酚的3个组分中,花色苷、酚酸和黄酮对HepG2细胞内活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)的最大清除率分别为37%、49%和53%,且组分间在清除细胞内ROS时存在加和作用,但无协同增效效果。综上所述,大兴安岭野生蓝莓富含多酚类物质,具有良好的抗氧化活性;除花色苷外,酚酸也是蓝莓中的主要抗氧化活性物质;因此,蓝莓良好的抗氧化活性与其丰富的总酚含量密切相关,这为利用大兴安岭野生蓝莓开发功能性食品提供了理论依据.     

十六烷基三甲基溴化铵对蛋白核小球藻的毒性效应

以蛋白核小球藻为受试物,分别设0(CK)、0.06、0.12、0.18、0.24、0.30、0.36 mg/L十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)处理,考察CTAB对藻生长和生化指标的影响,分析其致毒机理。结果表明:CTAB对蛋白核小球藻96 h EC50值为0.17 mg/L;藻细胞叶绿素a、水溶性蛋白质含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性随CTAB浓度增加呈先升后降趋势,当CTAB剂量≤0.06 mg/L时,叶绿素a含量略微上升,>0.06 mg/L时,叶绿素a含量急剧下降;CTAB剂量≤0.24 mg/L处理下蛋白质含量增加,CTAB剂量≥0.30 mg/L处理时水溶性蛋白含量低于对照组;除剂量≤0.06 mg/L处理外,SOD活性随CTAB剂量的增大呈下降趋势;脂质过氧化丙二醛(MDA)含量则随CTAB浓度增加逐渐上升;CTAB对蛋白核小球藻的致毒机理为通过破坏细胞膜完整性,抑制SOD活性,导致MDA含量持续上升。