ASIP基因编辑细毛羊自然突变和编辑基因型的遗传研究

为了探究控制毛色的多拷贝基因（ASIP）编辑细毛羊自然突变（D₉、D₅）和编辑突变的遗传特征和规律,分别将深棕色毛色表型的F₀代基因编辑中国美利奴细毛羊公羊与白色表型野生型母羊,有深色斑点表型的F₀代基因编辑母羊与野生型公羊交配,获得白色表型和深棕色及斑点状毛色表型F₁代个体23只。通过分析F₀、F₁代基因编辑羊ASIP基因的自然突变和编辑突变基因型,掌握编辑基因型的遗传规律和特征,以及自然突变、编辑突变与毛色表型的相关性。结果表明：F₀代基因编辑个体的4种主要编辑基因型（4 bp碱基缺失、5 bp,12 bp碱基插入、27 bp碱基缺失伴随1 bp碱基插入及2 bp碱基缺失）均在17只F₁代基因编辑羊得到遗传（另6只为野生型）。基因突变与毛色表型的相关性分析结果表明,D₉或D₅自然突变、ASIP基因编辑突变和拷贝数共同影响或决定基因编辑中国美利奴羊毛色图案的形成。     

特克赛尔羊×阿勒泰羊F2代部分肉质性状的全基因组关联分析

本研究测定了462只特克赛尔羊×阿勒泰羊杂交F2代羊背最长肌的肉质性状，利用全基因组关联分析（GWAS）方法初步筛选肉质性状（熟肉率、失水率）的候选基因，并通过QQ-plot图对群体层化效应进行了检测。结果表明，以上肉质性状群体层化分析没有发现明显的整体系统偏差，也不存在明显群体层化效应。关联分析结果表明共有16个SNP位点达到基因组显著水平，其中与熟肉率显著相关的位点8个，与失水率显著相关的位点8个。根据基因注释和文献检索结果，推测DOCK4、AOAH和CREB5基因可作为影响绵羊熟肉率的候选基因，所筛选出的候选基因主要通过调控肌纤维类型、参与肌肉生长过程等途径影响熟肉率；推测PRKCE和PRKG1基因可作为影响绵羊失水率的候选基因，筛选出的候选基因主要通过调控细胞分化、肌肉收缩、脂肪生成及参与肌动蛋白细胞骨架等作用而影响失水率。本研究结果将为改良绵羊肉质嫩度、多汁性提供候选分子标记，为地方品种绵羊标记辅助选择提供新的思路。     

阿勒泰羊FKBP5基因的克隆及其在组织中的表达

【目的】研究FKBP5基因和蛋白在绵阿勒泰羊不同组织、不同卵泡发育时期中的表达和定位情况。【方法】利用PCR法扩增获得阿勒泰羊FKBP5基因CDS区全长序列,并构建分子系统进化树;利用Real-time qPCR和Western Blot检测阿勒泰羊卵巢等不同器官和组织中FKBP5基因和蛋白的表达量;利用Real-time qPCR技术检测FKBP5基因在阿勒泰羊不同大小卵泡及黄体中的表达情况;利用免疫组化技术检测FKBP5蛋白在阿勒泰羊卵巢中的表达定位。【结果】阿勒泰羊FKBP5基因CDS区序列全长1390 bp,编码462个氨基酸;绵羊与山羊和牛的亲缘关系较近,与鸡(禽类)亲缘关系较远;FKBP5基因和蛋白在绵羊心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、子宫、卵巢、输卵管和睾丸中均有表达,其中在输卵管中表达量最高,接下来依次是肝脏、脾脏、子宫、卵巢和睾丸等器官和组织,在心脏、肺和肾脏中表达量较低;FKBP5基因在大卵泡中的表达量最高,且极显著高于卵巢、小卵泡和黄体(P<0.01),其次是卵巢和小卵泡,在黄体中表达量最低;FKBP5基因在大、小卵泡不同细胞中的表达情况略有不同。其在大卵泡膜细...     

基于微卫星多重PCR技术的特克塞尔×哈萨克杂交羊亲子鉴定

本研究旨在建立一套适用于特克塞尔×哈萨克杂交羊亲子关系的鉴定体系。试验选取11个微卫星标记位点进行组合扩增，通过优化微卫星标记位点组合的引物浓度、退火温度及反应体系等条件，建立了4组多重PCR体系，对多重PCR扩增产物采用毛细管电泳进行基因型分型，经PROSize3.0软件读取基因型分型结果，Cervus 3.0软件分析群体的遗传多样性，鉴定特克塞尔×哈萨克级进F2代（特哈级进F2）和横交F2代（特哈横交F2）的亲子关系。结果表明，特哈级进F2和特哈横交F2的等位基因数为180和140、平均等位基因数为16.364和12.727、平均观测杂合度（Ho）为0.533和0.544、平均期望杂合度（He）为0.807和0.831、平均多态信息含量（PIC）为0.783和0.803。对特哈级进F2和特哈横交F2两个品种70只候选亲本和64只候选子代的11个微卫星标记位点进行亲子关系鉴定，结果表明：当双亲基因型未知时的累积排除概率（CE-1P）为0.9995和0.9997；当单亲基因型已知时的累积排除概率（CE-2P）均达到1.0000；双亲基因型已知的累计排除概率（CEPP）均达到1.0000。说明选择的11个微卫星标记位点具有高度的多态性和较高的排除概率，适用于遗传分析和个体的亲子鉴定。利用微卫星标记建立的特克塞尔×哈萨克杂交羊亲子鉴定体系为分析绵羊群体遗传多样性和辅助育种工作提供了理论依据。     

体外胚胎生产技术在国内肉羊快繁中的应用分析

为了进一步提升活体采卵和体外受精技术(OPU-IVF)在肉羊商业化快繁的作用，明确今后研发方向和商业化模式，本研究以国内代表性体外胚胎工厂化生产基地为对象，对2019—2021年基地肉羊体外胚胎生产的部分数据和应用效果及其与高校、科研院所的产学研合作情况进行了分析与总结。结果表明：2019—2021年黑头萨福克、黑头杜泊等优质品种肉羊胚胎生产规模持续扩大，生产效率明显提升；不同品种之间的采卵效率、卵子受精后的发育效率差异明显；腹腔镜法的整体效率比手术法更具优势，并可缩短采卵间隔，从而提高体外胚胎生产效率。以上结果说明，通过技术研发，近年来国内肉羊体外胚胎生产规模和技术水平发展迅速，使我国在国际上率先实现了肉羊OPU-IVF技术的大规模商业应用。     

不同毛色ASIP基因编辑中国美利奴细毛羊皮肤组织中黑色素分布及ASIP蛋白的表达定位

为了研究ASIP基因在中国美利奴细毛羊被毛颜色形成过程中的作用机制，试验分别选取体况良好的3只野生型纯白色中国美利奴细毛羊，20只纯白色、8只棕色和10只黑色ASIP基因编辑中国美利奴细毛羊背部的皮肤组织，通过H.E.染色对比样本皮肤组织结构及黑色素分布差异；采用免疫组织化学染色检测ASIP基因编辑中国美利奴细毛羊白色、棕色、黑色3种皮肤组织中ASIP蛋白的表达定位情况。结果表明：野生型与ASIP基因编辑中国美利奴细毛羊的皮肤均由表皮、真皮、皮下结缔组织3部分组成，且表皮层最薄，各毛色皮肤结构组成无差异；黑色素颗粒主要分布于黑色、棕色ASIP基因编辑中国美利奴细毛羊皮肤组织的毛囊、毛干中，且黑色较棕色皮肤组织中分布的黑色素颗粒更为密集，而在白色被毛的野生型和ASIP基因编辑中国美利奴细毛羊皮肤组织中均未发现黑色素颗粒；ASIP蛋白在白色被毛的ASIP基因编辑中国美利奴细毛羊的表皮、毛囊外根鞘、毛乳头周围的毛基质中大量存在，在棕色、黑色皮肤组织中几乎不存在。说明ASIP蛋白在特定部位的表达情况与ASIP基因编辑中国美利奴细毛羊的白色被毛毛色的发生相关。