常见淡水鱼肉制品快速鉴别方法的建立

近年来,随着肉制品掺假问题日益突出,特别是鱼肉制品中掺入廉价成分,混淆鱼肉品种,以次充好的掺假造假问题引起广泛关注。为解决这一问题,有必要针对常见的青鱼(Mylopharyngodon piceus)、草鱼(Ctenopharyngodon idellus)、鲢(Hypophthalmichthys molitrix)和鳙(Aristichthys nobilis)四大家鱼建立快速同时检测鱼肉制品的多重PCR方法。实验通过对青鱼D-LOOP基因、草鱼COI基因、鲢16SrRNA基因和鳙12SrRNA基因序列进行对比分析,针对特异序列设计4对引物,对特异基因进行单一PCR和多重PCR扩增,根据其特异性、敏感性建立并摸索L9(34)正交试验单管多重PCR最佳反应条件,包括引物浓度、Tm值、Mg2+浓度和模板量等,通过对PCR条件的优化,建立快速检测青鱼、草鱼、鲢和鳙四大家鱼鱼肉制品的单管多重PCR鉴定方法。结果表明,针对青鱼、草鱼、鲢和鳙4种鱼肉制品所设计的4对特异引物分别能扩增出298、210、306及639 bp的目的条带,具有高度特异性,反应条件优化后,4种鱼肉制品所含靶基因质粒在50 pg均可同时扩增出较清晰条带,以人工自制鱼肉制品进行了验证,结果表明所建立的方法,能够区分混合样品中4种鱼肉的构成,并对市售鱼肉制品进行检测,结果稳定。本研究所建立的方法能够简单、快速地对青鱼、草鱼、鲢和鳙4种鱼肉制品成分进行检测和监控,且特异性强、灵敏度高,可为鱼肉制品质量安全提供技术支持。     

匙吻鲟形态特征及其两种同工酶的电泳分析

【目的】为了解匙吻鲟(Polyodon spathuln)的形态特征和生化遗传特性,为其制定种质标准和种质鉴定提供理论依据.【方法】采用传统形态学方法测定31尾匙吻鲟的可量性状和可数性状,通过聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳对匙吻鲟5种组织(心脏、眼睛晶状体、肌肉、脾脏和肝脏)的乳酸脱氢酶(LDH)和酯酶(EST)进行了分析.【结果】匙吻鲟的主要形态特征:体表裸露无鳞、光滑,背部灰黑色,常有一些斑点夹杂于其中,两侧逐渐变灰,腹部灰白色.头部有一大而长、形如匙柄的吻,眼小.口大,位于吻末端腹面.尾鳍歪形,上叶长于下叶;尾柄披有梗节状甲鳞.鳍式为背鳍D.37～46、胸鳍P.23～28、腹鳍V.27～34和臀鳍A.25～39.体内骨骼大部分由软骨组成,鳃耙长且排列细密.鳔为一室,呈梭形.2)匙吻鲟的心脏、眼睛晶状体、肌肉、脾脏和肝脏中的LDH酶带条数分别为3～4、3～4、1～2、4～5和5条;EST酶带数分别为2、0、1～2、2和4～5条.【结论】匙吻鲟形态特征研究结果可以为其种质鉴定和制定种质标准提供参考依据.匙吻鲟的2种同工酶系统具有组织特异性,心脏组织EST同工酶可作为鉴定匙吻鲟种质的生化遗传标记.     

中华绒螯蟹中内源性氨基脲的产生途径研究

为探究中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)中内源性氨基脲的产生途径,以雄性及雌性个体的背部蟹壳和腹部蟹壳为研究对象,测定氨基脲在上述组织中的残留水平,分析不同部位蟹壳中的主要成分甲壳素、蛋白质及其水解氨基酸的分布规律,评估并验证其与氨基脲残留的相关性。结果显示:不同部位蟹壳中甲壳素含量与其氨基脲残留水平呈明显的正相关性,蛋白质含量及氨基酸组成与氨基脲残留水平呈负相关性,结果表明,蟹壳中的甲壳素和蛋白质及其水解氨基酸可能是导致氨基脲检出的重要因素。验证实验表明,甲壳素和氨基酸在前处理过程中能产生氨基脲,这一途径可能是导致中华绒螯蟹中内源性氨基脲残留的原因。     

巨须裂腹鱼5种组织乳酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶的电泳分析

为了了解巨须裂腹鱼的生化遗传特性,丰富巨须裂腹鱼种质资源研究的内容,通过聚丙烯胺凝胶垂直板电泳对巨须裂腹鱼5种组织(心脏、眼睛晶状体、肌肉、肝脏和肾脏)中的乳酸脱氢酶(LDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)进行了电泳分析.结果表明:所测样本鱼心脏LDH酶带数为6～7条、眼睛晶状体LDH酶带数为6～10条、肌肉LDH酶带数为5～7条、肝脏LDH酶带数为8～11条和肾脏中的LDH酶带数为8～10条;LDH-C基因只在肝脏中特异性表达.心脏MDH酶带数为4～8条、眼睛晶状体MDH酶带数为2～4条、肌肉MDH酶带数为3～4条、肝脏MDH酶带数为4～5条和肾脏MDH酶带数为4～7条.5种组织中LDH在肝脏中表达的酶带数最多,肝脏MDH酶带着色最深,表达活性程度最强.巨须裂腹鱼的LDH和MDH同工酶系统具有组织特异性和个体差异性.组织特异性主要体现在LDH和MDH酶带数目和表达活性程度不同两方面,与各组织执行特定生理功能密切相关.巨须裂腹鱼同工酶个体差异性可能是其漫长的进化过程中为了能适应特殊生境的需要.研究结果可从生化遗传角度为巨须裂腹鱼制定种质标准和资源保护利用提供一定理论依据.     

长江鲟科鱼类尿液成分中L-色氨酸的检测分析

采用高效液相色谱-荧光法(HPLC-FLD)建立了中华鲟和长江鲟尿液中L-色氨酸的测定方法。中华鲟和长江鲟尿液样品由V(甲醇)∶V(乙腈)=1∶1提取,离心后,上清液经ENVI-18固相萃取小柱净化,利用symmetry@C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)进行分离,以乙腈-1%(体积分数)甲酸水溶液(10∶90,体积分数)为流动相等度洗脱,在流速1.0 mL/min,荧光波长λ_(ex)=285 nm,λ_(em)=353 nm条件下进行检测。结果显示:L-色氨酸标准品的峰面积与其质量浓度在0.010～2.000μg/mL范围内线性关系良好,线性回归方程为y=247.27x-0.125 5(R~2=1)。L-色氨酸的检出限(LOD)为0.005μg/mL,定量限(LOQ)为0.020μg/mL。L-色氨酸空白加标回收率为82.2%～102.1%,样品基质加标回收率为85.6%～95.1%,相对标准偏差(RSD)均小于5.7%。本方法有良好的回收率和精密度,且步骤简便,经济省时,可用于中华鲟和长江鲟尿液L-色氨酸的检测,为研究L-色氨酸在濒危鲟鱼中华鲟和长江鲟信息交流方面的作用奠定方法学基础。     

大口黑鲈形态特征、染色体核型及眼晶状体乳酸脱氢酶的电泳分析

旨在了解大口黑鲈(Micropterus salmoides )的种质特性，为其种质鉴定提供理论依据。采用传统形态学方法观测样品形态特征，借助肾细胞滴片空气干燥法制备染色体标本并进行核型分析，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法研究大口黑鲈眼晶状体乳酸脱氢酶(LDH)。结果表明：大口黑鲈体呈纺锤形，口裂大，斜裂；背部黑绿色，体侧青绿；吻端至尾鳍基部有排列成带状的黑斑。鳃盖上有3条呈放射状的黑斑；背鳍鳍式 D.VIII~XI-11~14；臀鳍鳍式A.III-9~12；左侧第一鳃弓外侧鳃耙数为6~7，鳔1室，脊椎骨总数30~32。染色体数目2n=46，核型公式为2m+2st+42t，臂数NF=48，未发现带有随体、次缢痕的染色体和异型性染色体，大口黑鲈进化上符合高位类群核型特征；眼晶状体中的LDH酶带5条，观察到LDHA、LDHB和LDHC 3个基因位点。综上所述，在对大口黑鲈进行种质鉴定时，建议采用多种种质鉴定技术手段系统化地考察和评价其种质状况。