硅藻土吸附固定化Bacillus sp.DL-2胞内蛋白酶拆分制备(S)-乙酸苏合香酯

[目的](S)-乙酸苏合香酯是手性药物合成的关键手性砌块,其在多种手性化合物的合成及医药、香料的工业生产中具有重要的作用.传统的化学合成手性化合物的方法需要有毒有机溶剂及重金属的参与,对环境及人类具有严重的危害,同时得到的手性化合物的光学纯度较低.与传统的化学合成相比,酶法选择性拆分消旋体化合物,具有高立体专一性和区域选择性、副反应少、产率高、产物光学纯度好以及反应条件温和的优点,是一种被广泛认可的拆分方法.实验表明,Bacillus sp.DL-2胞内蛋白游离酶可拆分制备(S)-乙酸苏合香酯,然而游离酶不易回收且稳定性差,将Bacillus sp.DL-2胞内蛋白游离酶制备成固定化制剂,克服了游离酶对环境敏感,稳定性不高的缺点,为工业化生产(S)-乙酸苏合香酯奠定了基础.[方法]酶的固定化方法主要有物理吸附法、离子结合法、共价结合法、交联法和包埋法.以吸附法固定酶,酶的构象很少改变,因此,酶的催化活力损失较少;且吸附法固定化操作过程简单,因此吸附法在经济上是最具吸引力的固定化方法.硅藻土由硅藻的细胞壁沉积而成,硅藻土表面的多孔性与负电性使其呈现明显表面吸附性,因而被常用做吸附载体.以硅藻土作为固定化载体,对Bacillus sp.DL-2胞内蛋白酶进行固定化,用以拆分制备高光学纯的(S)-乙酸苏合香酯.利用单因素实验优化,确定制备固定化酶的最佳固定化条件及制备(S)-乙酸苏合香酯的最佳拆分条件,并测定了制备的固定化酶对金属离子的敏感度及储存稳定性.[结果]最佳固定化条件为:温度40℃,pH为7,固定化时间10 h,载体添加量100 g/L.在最佳固定化条件下制备了固定化酶,优化确定了制备(S)-乙酸苏合香酯的最佳拆分条件为:固定化酶用量为160 mg/mL,拆分时间7 h,拆分温度30℃,缓冲液pH为7.[结论]在最佳固定化及拆分条件下,制备的(S)-乙酸苏合香酯e.e.值可达到96.8％,转化率为73.9％,且固定化酶对金属离子敏感度较低,对反应环境要求较低,适用于工业化生产.固定化酶在4℃条件下储存,随保存周数的增加,e.e.值及转化率均逐渐降低,但4周后e.e.值仍能达到90.1％,转化率保持在66.6％左右,具备较高的储存稳定性,为工业化生产(S)-乙酸苏合香酯提供了参考.     

大亚湾造礁石珊瑚现状

正大亚湾是位于广东省粤东的一个典型的亚热带海湾,岸线曲折、岛屿众多、生境多样,是渔业资源重要的繁殖场所,富有南亚热带特色,有大量的造礁石珊瑚分布。造礁石珊瑚是一种对环境极其敏感的营海底底栖固着生活的生物,对海域环境状况有很好的指示作用。造礁石珊瑚还是列入世界《濒危野生动植物种国际贸易公约》附录Ⅱ的国家保护动物。本文通过参照国际上通用的造礁石珊瑚调查方法,实地对大亚湾造     

饲料添加海水螺旋藻对凡纳滨对虾生长、营养和相关免疫因子的影响

海水螺旋藻营养价值丰富,在水产养殖中具有潜在的应用价值,文章主要探究饲料中添加不同比例的海水螺旋藻粉对凡纳滨对虾生长、营养成分和非特异性免疫指标的影响,研究结果为海水螺旋藻的饲料添加剂应用提供参考。在基础饲料中添加不同比例的海水螺旋藻粉(0%、0.7%、2.1%、3.5%和5.0%),饲喂凡纳滨对虾56 d后,测定其生长性能、肌肉中营养成分及肝胰脏中碱性磷酸酶(APK)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶(LYZ)和酚氧化酶(PO)的活力。结果表明,饲料中高含量添加海水螺旋藻(5.0%)显著提高凡纳滨对虾的生长性能(P0.05),饲料中添加海水螺旋藻对凡纳滨对虾的粗脂肪含量无明显影响(P0.05),但可以显著提高其肌肉中粗蛋白含量(P0.05),高含量添加海水螺旋藻(5.0%)显著提高凡纳滨对虾肌肉中二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)的含量(P0.05),饲料添加海水螺旋藻粉可以显著提高凡纳滨对虾APK和LYZ的活力(P0.05),随添加量的增加呈上升趋势,对PO、SOD和GSH-Px活力也有一定的提高,但无明显的规律。饲料中添加一定比例的海水螺旋藻可以提高凡纳滨对虾的非特异免疫力,并增加凡纳滨对虾的营养价值(粗蛋白、EPA和DHA),因此螺旋藻粉可以作为一种对虾饲料添加剂进行应用。     

饲料中添加螺旋藻对三角鲤肌肉营养及部分免疫指标的影响

为研究饲料中螺旋藻水平对三角鲤肌肉营养及部分免疫指标的影响,试验选取平均体重为(100±1.0)g的三角鲤450尾,随机分成5组,每组3个重复,每个重复30尾鱼。对照组投喂基础饲料,试验组分别投喂添加0.5%、1%、2%、3%不同螺旋藻浓度梯度的饲料,试验周期60 d。结果显示:①相对于对照组,各试验组总胆固醇含量显著下降(P0.05);粗脂肪含量整体下降,1%、2%添加组差异显著(P0.05)。②各试验组总蛋白和球蛋白含量先升高后下降,在2%添加组为最高,相对于对照组,2%添加组的总蛋白和球蛋白含量均显著增加(P0.05),其他组仅总蛋白含量显著增加(P0.05)。③各试验组白蛋白和粗蛋白含量整体上升,相对于对照组,1%、2%、3%添加组白蛋白含量增加显著(P0.05),3%添加组粗蛋白含量增加显著(P0.05)。由此可见,饲料中添加螺旋藻对三角鲤肌肉营养及部分免疫指标有一定的影响,本试验条件下,综合考虑生长性能及免疫指标,理论上螺旋藻适宜添加量应为3%。     

溶珊瑚弧菌hapR基因的敲除及功能研究

溶珊瑚弧菌(Vibrio coralliilyticus)是多种珊瑚的致病菌。hapR是弧菌群体感应系统核心的泛调控基因。前期实验中发现，溶珊瑚弧菌在感染佳丽鹿角珊瑚时，致病力与其接种密度密切相关，推测溶珊瑚弧菌的群体感应系统可能是调控其毒力的关键因子。笔者利用同源重组技术成功构建了溶珊瑚弧菌hapR缺失株△hapR-Vc450和回补株ChapR-Vc450，表型测试结果表明，hapR的缺失影响溶珊瑚弧菌的菌落形态，但不影响细菌的运动性和鞭毛结构；hapR缺失后，细菌最大生长量明显减少，但生物膜的形成量显著增加；用溶珊瑚弧菌人工感染鹿角珊瑚，结果显示，hapR缺失后菌株毒力增加，表明hapR在溶珊瑚弧菌中可能具有与霍乱弧菌hapR相似的功能，可以抑制毒力基因的级联激活。     

我国热带典型海草床潜在致病菌群落结构及其毒力基因丰度的空间特征

该研究利用16S rRNA扩增子测序技术分析了中国热带(新村、黎安、潭门)典型海草床水体潜在致病菌的群落结构,通过选择性培养基分析可培养弧菌和肠球菌的丰度,进一步利用定量PCR分析弧菌(Vibrio)和肠球菌(Enterococcus)典型毒力基因含量。结果发现,新村、黎安海草床水体潜在致病菌与潭门有显著差异;可培养弧菌和肠球菌及其典型毒力基因vhh、toxR、aspA、esp和gelE均呈现新村黎安潭门的趋势,而弧菌典型毒力基因ctxA、tlh、trh和vvp呈现黎安新村潭门的趋势。新村和黎安较高的人类活动强度如营养负荷,可能是导致其海草床致病菌和毒力基因丰度较高的重要原因,而新村和黎安的差异可能与不同的人类活动方式有关。     

近江牡蛎（Crassostrea hongkongensis）家系早期发育生长比较

选取数量性状有较大差异的6个近江牡蛎（Crassostrea hongkongensis）作为亲本，成功建赢了9个半同胞家系，并对各个家系的受精、孵化、成活和早期生长的情况进行比较。结果显示，各家系子代的受精率、9孵化率和成活率均受亲本成熟度的影响；各家系的早期生长中，家系CH1、CH4和CH7的生长率大于其他家系；近江牡蛎幼虫的早期生长阶段受母本效应影响明显。     

3种有益微生物对菲牛蛭养殖水体理化因子及成活率的影响

为减少高密度养殖下菲牛蛭(Hirudinaria manillensis)疾病发生和养殖废水排放,研究比较了3种商品化有益微生物制剂(硝化细菌T1、光合细菌T2和EM复合菌T3)对养殖水体的净化效果。结果表明,3种有益微生物制剂在15d内均能使养殖水体的pH稳定在6.8以上,溶氧量(DO)分别比对照组提高30.12%、26.95%和46.12%;化学耗氧量(COD)分别比对照组低1.02mg/L、1.13mg/L和1.53mg/L;3个处理组对氨氮(NH4+-N)的平均降解率分别为48.48%、45.23%和63.10%,亚硝态氮(NO2-N)平均值分别比对照组低0.16mg/L、0.19mg/L和0.27mg/L;菲牛蛭存活率均高达90%以上,明显高于对照组的53%。3种有益微生物制剂均有显著增加溶氧量、降低氨氮、亚硝态氮和化学耗氧量的效应,对菲牛蛭养殖水体均具有很好的净化作用,其中以EM复合菌效果最佳。     

副溶血弧菌对斑节对虾和日本对虾的致病力研究

作为条件致病菌的弧菌，前人对其致病性已作了大量的研究，但不同研究者得出的结果很不一致，有的甚至相互矛盾［1－4］，其差异主要在于浸泡感染能否使健康对虾致病。因此，本实验以不同的感染方式以及不同的实验条件，对斑节对虾体内分离出的副溶血弧菌的致病力进行研究，以便了解对虾弧菌病的发病条件。１材料与方法１.１材料 对虾：体长７～９ ｃｍ的健康斑节对虾（Ｐｅｎａｅｕｓ ｍｏｎｏｎｄｏｎ）和日本对虾（Ｐ．ｊａｐｏｎｉｃｕｓ），直接购于养殖场。 菌株：对虾病原菌一副溶血弧菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｐｏｒａ－ｈａｅｍｏｌｙｔｉ…     

凡纳滨对虾EST微卫星标记初步筛选

对161 075条凡纳滨对虾dbEST(database of “Expressed Sequence Tags”)的数据进行SSR序列筛选,搜索参数为二~六核苷酸重复6次以上(包括6次),共获得含SSR的EST序列12 600条,占整个凡纳滨对虾dbEST数据库的7.8%,其中二核苷酸重复10 104条,占总ESTSSR序列的80.2%; 三核苷酸重复2 036条(16.1%),四核苷酸重复336条(2.7%),五核苷酸重复35条(0.3%),六核苷酸重复89条（0.7%）。大部分发现的微卫星序列为完美型(perfect)的重复序列。在二核苷酸所获得的SSR重复单元中,AG/CT是优势重复单元,共分布4 820条,占二核苷酸各重复单元的47.8%;其次是AC/GT重复,共分布3 584条,占二核苷酸各重复单元的35.4%;最后是AT/TA 和CG/GC,分别占二核苷酸各重复单元的16.6%和0.2%。通过对凡纳滨对虾EST序列中SSR位点信息的发掘分析,共设计77对微卫星引物,在10个个体中成功扩增的引物有54对,成功扩增率为70.1%。其中多态性丰富的引物28对,多态率为51.9%。等位基因数为2～5,PCR产物大小为140～600 bp。本研究筛选的ESTSSR标记将为凡纳滨对虾的分子遗传学研究、种质鉴定等提供可靠的工具。