冬瓜杂种种子纯度鉴定的SSR分析

种子纯度是种子质量的核心指标,目前冬瓜、节瓜杂种优势已被广泛地应用于生产。探索出一种快速、准确的冬瓜、节瓜品种纯度鉴定方法是确保种子质量的技术保证,也是品种纯度检测实现商业化的前提。本研究以‘绿优’冬瓜和‘梅花8号’节瓜及其各自亲本为试验材料,利用SSR分子标记技术对亲本及杂种之间的多态性进行分析。结果显示,从200对SSR引物中筛选出2对多态性引物scaffold4775和scaffold5674,用于‘绿优’冬瓜和‘梅花8号’节瓜杂种种子纯度的鉴定。其扩增片段电泳条带清晰可辨,杂交种中呈现双亲的互补带型,SSR标记表现出稳定的显性和共显性,能将‘绿优’冬瓜和‘梅花8号’节瓜与其父母本区分开来。分子检测平均纯度均为98%,田间纯度鉴定分别为98%和99%,结果基本一致,表明引物scaffold4775和scaffold5674可用于‘绿优’冬瓜和‘梅花8号’节瓜的纯度鉴定。SSR分子标记呈现出经济快速、准确等特点,在冬瓜、节瓜品种纯度鉴定上其应用前景十分广泛。     

水牛SND1基因克隆及生物信息学分析

试验旨在利用电子克隆法对水牛SND1（staphylococcal nuclease and tudor domain containing 1）基因进行克隆和序列分析，为探究该基因对水牛泌乳性能的作用机制奠定基础。以奶牛SND1基因（GenBank登录号：NM_205784.1）作为种子序列，利用Primer Premier 5.0设计3对引物，以水牛基因组DNA为模板，PCR扩增水牛SND1基因mRNA序列，扩增获得序列连接pMD18-T载体，通过测序拼接获得水牛SND1基因mRNA全序列，并对其进行生物信息学分析。结果显示，水牛SND1基因完整编码序列长为3 503 bp，包含长为2 733 bp CDS序列，编码910个氨基酸，蛋白分子式为C₄₅₂₃H₇₁₈₃N₁₂₈₁O₁₃₅₄S₂₆，分子质量为102.01 ku，理论等电点（pI）为6.74，不稳定系数为42.07，平均亲水性为-0.419，属可溶酸性蛋白。二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主，其中α-螺旋占37.80%，无规则卷曲占34.18%。结合Protfun 2.2在线软件对SND1的功能进行预测分析表明，该蛋白在嘌呤和嘧啶、中央中间代谢、能量代谢、氨基酸生物合成发挥功能的可能性分别为0.449、0.401、0.303和0.262。SND1基因编码区序列与黄牛、绵羊、山羊、猪、马、人的同源性分别为98.7%、97.8%、97.8%、93.8%、93.1%和91.7%，物种之间同源性较高，系统进化情况与其亲缘关系远近一致。利用SMART在线软件预测蛋白结构域，结果显示，水牛SND1蛋白包含有4个SN区域，说明SND1基因编码区在进化过程中较为保守。     

广西芒果树叶片苔藓发生情况调查及药剂筛选试验

对广西芒果树叶片苔藓的发生情况及防治药剂进行了初步研究?调查了广西芒果主产区的南宁市(武鸣区?兴宁区)和百色市(田东县?田阳县?田林县和右江区)?在南宁市开展4种药剂的18种不同浓度或者配比组合的药剂筛选试验?结果表明, 南宁市芒果树叶片平均发病率达到88.5%, 右江区发病率为81.7%, 其后依次为田东县?田林县和田阳县, 发病率分别为56.1%?54.8%和34.2%?通过不同药剂及其不同配比药效试验, 80%乙蒜素乳油的防效极显著优于46%氢氧化铜水分散粒剂?32%唑酮·乙蒜素乳油和70%甲基硫菌灵可湿性粉剂?80%乙蒜素乳油500倍液?1 000倍液和1 500倍液的防效分别为93.37%?85.82%和51.85%?综上, 芒果树叶片苔藓已在广西全区普遍发生, 南宁市和右江区受害严重, 推荐使用80%乙蒜素乳油1 000倍液防治?     

重庆市主要烟区土壤肥力状况综合评价

利用模糊数学和偏相关分析计算出重庆烤烟种植区土壤肥力综合指数IFI值,对各植烟区肥力状况进行分析与综合评价.结果表明:重庆市植烟土壤肥力因子多处于中等至强变异强度,对土壤综合肥力指数贡献最大的为有机质,其次是碱解氮、 pH值、有效硼、速效磷,贡献最低的是有效锌,其中,速效磷、速效钾和有效锌变异强度较大,土壤各因子与15年前相比,土壤pH值、土壤水溶性氯、土壤有效硼、有效锌和有效镁下降,其余指标则有不同程度上升.重庆市植烟区县整体土壤肥力综合指标值较高,但不同营养元素质量分数丰缺状况不同,不同区县的养分质量分数差异较大,重庆烟田需加强测土配方施肥,采用综合养分管理技术,提升烟田地力水平,促进烟草产业可持续健康发展.     

寨卡病毒SYBR GreenⅠreal-time PCR方法的建立及应用

为建立一种针对寨卡病毒的快速诊断方法,本研究根据寨卡病毒的3’端保守基因序列,设计合成1对引物,建立了检测寨卡病毒的荧光定量PCR方法。结果显示:所建立的检测方法的Ct值与标准品在1.41×10^1~1.41×10^10^ copies/μL具有良好的线性关系,相关性为1,斜率为-3.502;灵敏性结果显示,该方法的检测限度为1.41×10^1 copies/μL,是普通PCR的10000倍;特异性结果显示,对CHIKV、DENV和JEV无特异性扩增,特异性强;重复性试验结果显示,组内和组间变异系数均小于1%,重复性好。本研究建立的SYBR Green I real-time PCR检测方法,可用于寨卡病毒感染的快速诊断。     

养心通脉Ⅱ号方治疗慢性心力衰竭气阴两虚血瘀证的疗效观察

目的 评估养心通脉Ⅱ号方治疗广西地区慢性心力衰竭（chronic heart failure，CHF）的临床疗效，探索中医药治疗CHF的新途径。方法 采用多中心临床随机对照试验，将58例广西桂东、桂西、桂南、桂北共7家医院CHF气阴两虚血瘀证患者随机分为两组，对照组28例予西药常规治疗，治疗组30例予西药常规治疗加养心通脉Ⅱ号方，疗程6个月。对比两组患者治疗前后氨基末端脑钠肽前体（N-terminal pro-B-type natriuretic peptide，NT-proBNP）、6分钟步行试验（6-minute walk test，6MWT）、左室射血分数（left ventricular ejection fractions，LVEF）、中医证候积分、中医证候积分临床疗效、心功能疗效及明尼苏达心力衰竭生活质量调查表（minnesota living with heart failure questionnaire，MLHFQ）。结果 治疗后治疗组NT-proBNP、6MWT、LVEF、中医证候积分均明显优于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；在中医证候积分临床疗效方面，治疗组总有效率83.34%，对照组60.72%，差异有统计学意义（P<0.05）；在心功能疗效方面，治疗组总有效率86.66%，对照组67.85%，差异有统计学意义（P<0.05）；治疗后两组MLHFQ评分均增加（P<0.05），治疗组较对照组更能改善生活质量，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 养心通脉Ⅱ号方能有效改善气阴两虚血瘀型CHF患者的心功能，缓解中医证候，值得临床推荐。     

粪源环丙沙星对潮土中抗生素抗性基因的影响

为了探究粪源环丙沙星(Ciprofloxacin, CIP)对潮土中抗生素抗性基因(Antibiotic resistance genes,ARGs)的影响,布置培养试验(81 d),设置5个处理,分别为Ⅰ:CK(对照),Ⅱ:CIP(外源添加CIP),Ⅲ:DF(不含CIP的鸭粪),Ⅳ:DF+CIP(Ⅲ基础上外源添加CIP),Ⅴ:DF(CIP)(粪源CIP)。采用PCR技术分析土壤中6大类27种抗生素抗性基因和4种可移动遗传元件的检出情况,并利用荧光定量PCR技术对检出频率较高的目的基因及总细菌基因(16S rRNA)的绝对丰度进行检测。结果表明:不同处理土壤中共检出6种ARGs(tet G、sulⅠ、qnr A、qnr S、aad A2、aad D)和1种可移动遗传元件(intⅠ),且检测到的目的基因基本一致。DF(CIP)和DF+CIP处理对土壤中细菌和不同种类ARGs的影响不同。DF(CIP)、DF+CIP处理均显著降低了土壤中16S rRNA、tet G的绝对丰度;DF(CIP)处理显著增加了土壤中sulⅠ、aad A2的绝对丰度;DF+CIP处理显著增加了土壤中qnr A的绝对丰度。不同种类的ARGs与intⅠ、土壤理化性质的偏相关性分析表明,土壤中intⅠ与sulⅠ、aad A2呈正相关,与qnr A呈负相关,qnr A与CIP残留量呈正相关,tet G与有机质呈正相关。研究结果可为科学地评价氟喹诺酮类抗生素的环境风险以及粪肥的合理施用提供一定的理论依据。     

Plant regeneration via protoplast electrofusion in cassava

Protoplast electrofusion between callus protoplasts of cultivar TMS60444 and mesophyll protoplasts of cultivar SC8 was performed as an approach for the genetic improvement of cassava. The fusion products were subsequently cultured in protoplast culture medium(TM2 G) with gradual dilution for approximately 1–2 months. Then the protoplast-derived compact calli were transferred to suspension culture medium(SH) for suspension culture. The cultured products developed successively into embryos, mature embryos, and shoots on somatic embryo emerging medium(MSN), embryo maturation medium(CMM), and shoot elongation medium(CEM), respectively. And the shoots were then rooted on Murashige and Skoog(1962) medium(MS). Sixty-six cell lines were obtained and 12 of them developed into plantlets. Based on assessment of ploidy level and chromosome counting, four of these plantlets were tetraploid and the remaining eight were diploid. Based on assessment of ploidy level and simple sequence repeat(SSR) analysis, nine tetraploid cell lines, one diploid variant plant line and nine variant cell lines were obtained. The diploid variant plant line and the nine variant cell lines all showed partial loss of genetic material compared to that of the parent TMS60444, based on SSR patterns. These results showed that some new germplasm of cassava were created. In this study, a protocol for protoplast electrofusion was developed and validated. Another important conclusion from this work is the confirmation of a viable protocol for the regeneration of plants from cassava protoplasts. Going forward, we hope to provide technical guidance for cassava tissue culture, and also provide some useful inspiration and reference for further genetic improvement of cassava.     

体外法研究硝酸钠调控水牛瘤胃甲烷生成对脂肪酸生物氢化途径的影响

本试验旨在研究硝酸钠调控水牛瘤胃甲烷生成对脂肪酸生物氢化途径的影响。选取3头体重约为（650±50）kg、安装永久性瘤胃瘘管的水牛作为瘤胃液供体动物，通过体外批次培养，设计发酵底物的精粗比为40：60，试验设4个组，每组5个重复，每组各添加0.25 mg/mL的α-亚麻酸，硝酸钠添加水平分别为0（对照）、1、2、3 mg/mL。分别培养3、6、9、12、24 h时测定产气量和甲烷产量，在培养24 h结束后测定体外发酵参数和脂肪酸含量。结果表明：①添加硝酸钠显著降低了瘤胃培养液24 h的总产气量、甲烷（CH₄）含量和甲烷/总产气量的比例（P<0.05），添加1、2和3 mg/mL硝酸钠后瘤胃液甲烷含量分别降低了89.62%、91.20%、91.75%。②添加硝酸钠组瘤胃培养液的pH和氨态氮（NH₃-N）含量显著高于对照组（P<0.05），添加1 mg/mL硝酸钠组微生物蛋白（MCP）含量也显著高于对照组（P<0.05），其他组别差异不显著（P>0.05）；添加硝酸钠组瘤胃液乙酸浓度差异不显著（P>0.05），但丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸和异戊酸浓度显著低于对照组（P<0.05），乙酸/丙酸显著高于对照组（P<0.05），添加3 mg/mL硝酸钠组瘤胃液总挥发性脂肪酸（TVFA）含量显著低于对照组（P<0.05）。③添加1 mg/mL硝酸钠组瘤胃液C18：2 cis-9，trans-11、C18：2 trans-10，cis-12、C20：1、不饱和脂肪酸（UFA）含量及UFA/SFA显著高于其他组（P<0.05）；添加硝酸钠组瘤胃液C18：2n6c、C18：1n9t、C20：5n3（EPA）和C22：6n3（DHA）的含量均高于对照组，且1 mg/mL硝酸钠组含量最高，但差异不显著（P>0.05）；添加1 mg/mL硝酸钠组瘤胃液C18：3n3、C18：2n6c和C18：1n9c含量均高于对照组，差异不显著（P>0.05）。由此可见，体外添加硝酸钠显著降低了瘤胃液总产气量和甲烷含量，pH和NH₃-N含量显著升高，TVFA含量降低，通过显著减少丙酸含量而升高乙酸/丙酸；添加1 mg/mL硝酸钠可显著提高瘤胃液共轭亚油酸（CLA）和UFA含量，且在抑制甲烷产生的同时能够降低不饱和脂肪酸的生物氢化程度。     

红锥4种林型土壤理化性质及微生物量差异分析

【目的】研究广西国有高峰林场不同红锥人工林对土壤理化性质及微生物生物量的影响,旨在为该区红锥人工林合理经营和持续生产发展提供科学依据。【方法】以红锥纯林、红锥+湿地松混交林、红锥+米老排混交林、红锥+火力楠混交林4种红锥林型人工林0~60 cm土层为研究对象,分析4种红锥林型的土壤理化性质和微生物生物量差异以及变化规律。【结果】4种林型3个土层(0~20、20~40、40~60 cm)间土壤有机碳(SOC)、全氮(TN)、容重(ρb)、含水率(θg)以及微生物生物量碳(MBC)和微生物生物量氮(MBN)均差异显著,且随着土层深度的增加,4种林型的SOC、TN、全磷(TP)、θg均表现为逐渐降低,ρb表现为逐渐增大。0~60 cm土层4种林型间SOC、TN、TP、θg、pH值、ρb均差异极显著。其中红锥+米老排混交林土壤SOC、TN、TP、θg和MBC、MBN均最大,pH值和ρb最小;红锥纯林土壤SOC、TN、TP和MBC、MBN均最小,pH值和ρb最大。相关分析表明,MBC与SOC、TP呈显著正相关,与ρb呈显著负相关;MBN与SOC、TN、TP呈显著正相关,与ρb呈显著负相关;SOC、TN、TP与ρb呈显著负相关。【结论】红锥混交林能够有效提高土壤养分,改善土壤质地,且红锥阔叶混交林较红锥针阔混交林的效果更佳。