根结线虫拮抗放线菌的筛选及菌株HA10002的鉴定与活性物质分析

为了筛选获得对根结线虫具有拮抗能力的强活性放线菌菌株,并从菌株中发现新的杀线虫活性化合物,从海南东寨港红树林采集海泥样品9份,从五指山原始森林等地采集土壤样品51份,用平板稀释法对海泥和土壤样品进行分离;以南方根结线虫2龄幼虫为靶标线虫,采用24孔细胞培养板液体线虫法进行初筛和复筛;根据形态特征、培养特征、生理生化特征和16S rDNA序列对复筛出的活性菌株进行鉴定;菌株发酵液经溶媒萃取、硅胶柱层析、Sephadex LH 20凝胶过滤和制备薄层板层析,采用活性跟踪法从中分离纯化杀线虫活性化合物;化合物经光谱及波谱分析和文献对照,进行结构鉴定。从60份样品中分离得到356株菌落形态有差异的放线菌。初筛得到16株对根结线虫校正死亡率在80%以上的菌株,复筛获得3株线虫校正死亡率在95%以上的菌株,其中分离自海泥样品中的菌株HA10002抗线虫活性最强,发酵原液的校正死亡率达100%。HA10002经鉴定为白浅灰链霉菌,从其发酵液中分离获得2个活性化合物,其中A26 3为Nocardamine,A22 1的结构正在进一步鉴定中。上述结果表明,筛选出的放线菌HA10002能合成2种以上杀根结线虫的活性代谢产物,是一株遗传稳定且具有开发潜力的活性菌株。     

南方根结线虫被穿刺巴斯德芽菌侵染后寿命和生殖相关基因的表达变化

为了探讨南方根结线虫在植物体外被穿刺巴斯德芽菌感染后存活率的变化及感染初期线虫寿命和生殖相关基因的表达情况。首先利用单卵块孵化法对从野外采集的根结线虫进行纯化和分子鉴定。以穿刺巴斯德芽菌孢子体外吸附的南方根结线虫为材料，在显微镜下观察供试线虫的存活情况，每24 h计数一次死亡线虫的条数，总共观察12 d。在被穿刺巴斯德芽菌吸附的第3天收集根结线虫，提取线虫总RNA，采用实时荧光定量PCR检测线虫寿命相关基因cyp-33和生殖相关基因lin-45/mek-2的表达情况。结果表明：通过分子鉴定确认纯化的根结线虫为南方根结线虫；感染了穿刺巴斯德芽菌的南方根结线虫死亡率显著升高；同时在穿刺巴斯德芽菌吸附南方根结线虫的初期，线虫寿命相关基因cyp-33和生殖相关基因lin-45/mek-2的表达水平与对照组相比均下调（p<0.05）。这说明穿刺巴斯德芽菌在吸附南方根结线虫的初期能够促使线虫的存活率降低，并抑制其生殖能力，这可能与基因cyp-33、lin-45和mek-2的调控有关。     

匍枝马尾藻人工栽培初步研究

为探索匍枝马尾藻(Sargassum polycystum)的人工栽培技术,采用浮筏式栽培方式于2015年3—6月在海南省儋州市海头镇进行了匍枝马尾藻的人工栽培试验,记录了该藻的生长规律,并通过栽培水深和夹苗密度试验,比较了不同栽培条件对其生长的影响。结果显示,3月下旬至5月下旬为匍枝马尾藻生长最旺盛的季节,其中藻体长度的快速增长主要集中在4月中旬以前,而藻体重量以相对稳定的速率持续增长至5月下旬。栽培水深和夹苗密度分别对匍枝马尾藻的藻体长度和分枝数有显著影响,而藻体鲜重则同时受到这两个因素的影响(P0.05)。研究表明,适量增加匍枝马尾藻的栽培水深和控制夹苗密度有利于促进其生长;为有效提高匍枝马尾藻的产量,栽培水深应设计为80 cm左右,夹苗密度控制在10 cm左右。     

被孢霉发酵生产花生四烯酸工艺的研究

以被孢霉Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌａｓｐ．Ｍ１０为菌种，考察温度、葡萄糖加料方式、菌体老化等对菌体生长和花生四烯酸产率的影响，结果表明，采用变温培养、葡萄糖分批加料、菌体老化等工艺，均可提高花生四烯酸产率。     

中草药提取物对香蕉镰刀菌枯萎病病原菌的抑制作用

本研究测试了123种常见中草药提取物对香蕉镰刀菌枯萎病病原菌的抑菌作用.结果表明,供试提取物100倍稀释液对菌株B1的菌丝生长和孢子萌发的抑制作用在50%以上的分别有15种和14种;对菌株B2的菌丝生长和孢子萌发抑制作用在50%以上的提取物分别有7种和9种.进一步测试发现,经过200倍稀释,只有丁香提取物和厚朴提取物对菌株B1的菌丝生长和孢子萌发抑制作用均达到50%以上.丁香提取物对菌株B1和菌株B2菌丝生长的抑制中浓度分别为3 396.31μg/mL和3 375.87μg/mL.     

一种快速、有效的香蕉枯萎病病原菌FOC4的分子检测方法

以ITS测序与SCAR分子标记相结合的香蕉病原菌FOC4分子检测方法,利用通用引物ITS1和ITS4对病原菌SF001的rDNA中ITS序列进行PCR扩增,获得560bp左右的特异条带。经Blast分析比对,确定该菌为FOC。再利用FOC4的特异引物PCL/PDL对基因组上的特征序列扩增区域(SCAR)进行PCR扩增,获得677bp的特有序列,鉴定菌株SF001是尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种。经过致病性测试,菌株SF001表现出典型4号生理小种的病理特征。     

根结线虫拮抗放线菌菌株DA07118的筛选与鉴定及其发酵条件的优化

从海南东寨港红树林、尖峰岭等原始森林及黄流地区发病蕉园采集土壤样品,分离得到215株放线菌菌株。以根结线虫为靶标线虫对215株放线菌进行筛选,获得18株对根结线虫校正死亡率在80%以上的菌株。菌株DA07118抗线虫活性最强,校正死亡率达100%;经5次继代培养,仍具有稳定产生杀线虫活性物质的能力。通过形态学、生理生化反应和16S rDAN分类鉴定,将该菌株归类为链霉菌属Streptomyces。进一步的发酵条件优化试验,确定该菌株产活性物质的最佳培养基配方为（g/L）：麦芽糖10g、蔗糖25g、酵母膏20g、蛋白胨20g、K2HPO4 0.5g,初始pH7.0。发酵优化后,菌株发酵液的10倍稀释液处理后24h对根结线虫的校正击倒率从优化前的75.0%提高到93.7%。     

海绵共附生放线菌Streptomyces sp. A01059抗稻瘟病活性物质的分离研究

对海绵共附生放线菌Streptomyces sp.A01059的发酵液进行研究,以获得有抗稻瘟病活性的化合物;用乙酸乙酯对发酵液进行萃取,然后用活性追踪的方法对乙酸乙酯萃取物进行分析,最后使用制备液相获得相应的活性部位;结果获得分子量为508和522的两个活性化合物;实验首次对放线菌Streptomyces sp.A01059的代谢产物进行分离研究.为稻瘟病的防治提供了新的途径.     

红脚对虾生态养殖技术试验

试验利用微生物制剂对水质进行调控,人参皂甙等增强虾体免疫力,用绿色环保天然抗病毒剂防治虾病,结果表明：采用生物制剂综合防治效果显著,无违规药物残留,产出的红脚对虾全部出口,具有很好的经济效益和社会效益.     

对虾生态养殖综合技术研究

在养殖基地实施生态养虾试验,利用微生物制剂对水质进行调控,用人参皂甙增强虾体免疫力,用绿色环保天然抗病毒剂综合防治虾病。虾体无违规药物残留,产出的虾全部出口美国、日本,具有很好的经济效益和社会效益。