山羊TNNT3基因可变剪切及其对骨骼肌细胞分化的作用

【目的】快速骨骼肌肌钙蛋白T（fast skeletal troponin T3,TNNT3）作为肌钙蛋白(troponin, Tn)家族成员,调节横纹肌收缩、参与骨骼肌的生长发育并影响家畜肉质性状。通过获得山羊TNNT3基因的可变剪切体,分析山羊TNNT3基因可变剪切的表达模式及其在肌细胞分化中的作用,深入解析TNNT3基因在山羊骨骼肌生长发育过程中的作用机制。【方法】基于NCBI已公布山羊TNNT3基因（NM_001314210.1）和牛TNNT3基因（XM_010821200）mRNA序列,使用软件Primer Premier 6.0设计引物,以简州大耳羊胚胎期和出生后7个阶段骨骼肌为试验材料,克隆测序获得山羊TNNT3基因的CDS区可变剪切体,利用软件ORF Finder、EditSeq、DNAMAN、ClustalW和MEGA_X_10.1.8等对序列进行生物信息学分析;进一步设计实时荧光定量（real-time PCR,RT-qPCR）及半定量引物,研究TNNT3基因剪切体在7个不同组织（背最长肌（longissimus dorsi muscle,LD）、半膜肌（semimembranosus muscle,SM）、心、肝、脾、肺、肾）和7个发育阶段（胚胎期E75、E90、E105和出生后B3、B45、B150、B300）肌肉组织（背最长肌和半膜肌）中表达模式;此外,对转录本TNNT3_3进行体外编码能力检测确定其具有编码蛋白的能力,并在山羊骨骼肌卫星细胞（skeletal muscle satellite cells,MuSCs）中过表达,观察细胞形态变化以及检测标志基因的表达变化,研究其对山羊MuSCs分化的作用。【结果】①TNNT3（NM_001314210.1）CDS区全序列主要含有18个外显子,其中外显子16/17相互排斥,转录后单一表达。克隆发现山羊TNNT3基因 5个新转录本（TNNT3_1—5）,其外显子数分别是15、15、20、16、14。②生物信息学分析结果显示山羊TNNT3基因核苷酸序列和氨基酸序列与绵羊、牛、猪等哺乳动物具有很高的一致性,而与鱼类和爬行类动物的一致性较低,说明TNNT3基因序列在哺乳动物高度保守。③TNNT3 mRNA在背最长肌、半膜肌、心、肝、脾、肺、肾7个组织中都有表达,其中在骨骼肌中高度富集(P < 0.01),心脏及肺次之,其余组织中较低;TNNT3 mRNA在背最长肌和半膜肌中的表达始终处于一个动态变化中,胚胎期TNNT3在半膜肌的表达量高于背最长肌（P<0.05）;出生后则背最长肌中高于半膜肌（P<0.05）。④山羊TNNT3基因转录本TNNT3_3重复出现保守的外显子9—11（138bp）,体外翻译实验显示其可编码蛋白且蛋白大小与预期基本相符（37 kD）;相较于对照组,在山羊MuSCs中过表达该转录本使肌分化标志基因Myomaker、MyoG和MyH4 mRNA极显著升高(P < 0.01)。【结论】获得了山羊TNNT3基因具有完整CDS区5个新可变剪切体,TNNT3主要在肌肉组织（背最长肌和半膜肌）中高表达,在哺乳动物中高度保守且促进成肌分化。初步表明TNNT3基因在动物肌肉生长发育中具有重要的生物学功能。     

重瓣榆叶梅花中多糖提取工艺及动态含量研究

采用超声波辅助提取法,优化重瓣榆叶梅花朵中多糖提取的工艺条件,并在最佳工艺条件下研究了重瓣榆叶梅花朵生长过程中多糖含量的动态变化。在单因素试验的基础上,利用响应面分析法对多糖的主要提取工艺参数进行优化和方差分析。得到最佳工艺条件为:提取温度70℃,提取时间40min,超声波功率120 W,液料比为60mL/g,在上述工艺条件下,测得处于花开初期的重瓣榆叶梅花中多糖的含量最高,其提取率可达到2.809%。说明花开初期时的重瓣榆叶梅花利用价值相对较高。     

重庆地区变色牵牛品种的栽培和应用

变色牵牛是一种观花型缠绕草本植物,具有生长迅速、花期长、观赏性好、可耐寒越冬、多年栽培等优点。本文通过对一种变色牵牛品种在重庆地区的特征特性、种植技术和应用方式的介绍,以期推广该品种在重庆地区的发展应用。     

热处理对进口辐射松木材化学性质的影响

热处理引发的木材组分含量及其分子结构的改变,是导致木材材性变化的本质原因,探索不同热处理温度下辐射松木心、边材的化学组分变化。结果表明,热处理后辐射松木材的抽提物含量降低,pH值升高,缓冲容量增加;心边材木质素结构差异较小,随处理温度升高,木质素单元主要连接结构(β-O-4'芳基醚键)断裂程度增加。     

基于XML技术与上层控制的农村地表水质数据交换模型研究

为解决目前农村地表水质数据交换中存在的问题,考虑使用上级结点主动从下级结点处提取的方式获取数据,提出了上层控制权的思想。通过上级结点直接控制访问下级结点数据库的形式,建立数据交换模型,利用XML进行目标数据库字段到本地数据库字段的映射,构建通用的数据库查询语句自动生成系统,提取所需数据,实现异构数据库之间数据的无缝交换。     

重庆市主城区花境植物应用调查与分析

对重庆市主城区花境植物进行了调查和分析.结果表明:(1)目前重庆市主城区已应用花境植物171种,隶属65科138属,其中以多年生草本为主,较多的科有禾本科、菊科、唇形科和百合科等.(2)表现优良的有140种,存在部分有病虫害、易倒伏植物.(3)观赏价值高的有157种,其中以观花观叶为主,观干、观果的极少;花期主要集中在春夏秋三季,以夏季为盛;常绿植物有93种.(4)应用安全的有161种,存在部分有毒、易扩散植物.(5)运用层次分析法(AHP)对重庆市主城区花境植物进行综合评价,筛选出观赏应用价值高的常绿植物52种,其中综合评分在3.5以上的可大规模推广应用.     

牛磺酸生产、应用现状及发展对策研究

查阅并分析了国内外相关文献,就目前牛磺酸的应用、生产现状及发展前景做了综述,并探讨了牛磺酸作为一项具有潜力的产业在未来发展过程中应注意的问题。     

浅谈农村地区环境污染现状与治理对策

指出了农村地区环境污染对人们的生态环境造成了威胁，分析了农村地区环境污染现状，从宣传策略、政策法规、环境治理等方面探讨了相应的对策与建议。     

中国环境污染损失测算及成因探析

结合对我国的环境污染损失进行的测算,剖析了我国经济增长与环境污染损失的关系,对环境污染出现加剧的成因进行了探析。