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为探讨不同保存方法对武汉单极虫Thelohanellus wuhanensis DNA提取和PCR扩增的影响,将从患武汉单极虫病的异育银鲫Carassius auratus gibelio鱼苗上分离出含有孢子的孢囊,分别置于100%乙醇、70%乙醇、2.5%戊二醛、10%福尔马林、Bouin's液、Carnoy's液和Müller's液中保存50 d,经计数调整孢子等量后分别进行DNA提取、常规PCR和巢式PCR扩增。结果表明:100%乙醇和70%乙醇保存方法对武汉单极虫孢子DNA提取、常规PCR和巢式PCR扩增均无任何影响,等同于新鲜孢子,可作为孢子的保存方法;2.5%戊二醛和Bouin's液保存方法只对孢子DNA提取有影响,但均能在常规PCR和巢式PCR扩增后出现特异电泳条带,可作为用于常规PCR和巢式PCR扩增的孢子保存方法;10%福尔马林和Müller's液保存方法对孢子DNA提取和常规PCR扩增均有影响,但均能在巢式PCR扩增后出现特异电泳条带,故只能作为用于巢式PCR扩增的孢子保存方法;Carnoy's液保存方法无论在孢子DNA提取还是进行常规PCR和巢式PCR扩增均无阳性结果,故不能用作孢子核酸分子生物学研究的保存方法。研究表明,除100%乙醇和70%乙醇保存方法外,其他保存方法对孢子DNA提取、常规PCR和巢式PCR扩增均有不同程度的影响。 相似文献
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异育银鲫咽碘泡虫病组织病理与病理生理 总被引:1,自引:0,他引:1
咽碘泡虫(Myxobolus pharynae)病是近几年发生在江苏省盐城地区的大丰、射阳和滨海以及周边地区,引起养殖异育银鲫(Carassius auratus gibelio)大批死亡的一种黏孢子虫病,咽碘泡虫只特异地寄生在异育银鲫的咽部组织内,为了阐明该病对鱼体的损伤作用,我们对不同患病时期的异育银鲫的组织病理和疾病中期的病理生理进行研究。组织病理结果表明:疾病初期病鱼咽部略有轻度充血,咽碘泡虫以营养体阶段寄生在咽部黏膜下层的组织中,并开始形成由成纤维细胞包裹的小孢囊,其他组织器官无病理损伤现象;疾病中期由于小孢囊数量增加和囊内营养体分裂增殖并逐步发育为成熟孢子后体积增大,构成的大孢囊使咽部显著膨大,包裹小孢囊的结缔组织囊壁充血,逐步萎缩而变薄,成纤维细胞核固缩坏死,咽部黏膜层中的上皮细胞淡染、核固缩坏死,味蕾失去应有的结构,鳃组织细胞在鳃小片间严重增生,肾部分区域出现细胞坏死,肾小球肿胀,肾小管上皮细胞出现滴状玻璃样变性,肝、脾、肠和前肾无病理变化现象;疾病后期小孢囊囊壁、黏膜下层和黏膜层组织细胞进一步坏死崩解,出现孔洞,成熟孢子、坏死组织和血液一并流出孔洞,病鱼肠腔中有许多来自坏死的咽部组织细胞和成熟孢子,其他组织器官病理变化与疾病中期相似。疾病中期病鱼的病理生理分析结果表明:病鱼红细胞数量和大小、血红蛋白浓度、血栓细胞数量、血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、血糖、谷丙转氨酶、谷草转氨酶和碱性磷酸酶都分别极显著低于健康鱼(P0.01),出现贫血;病鱼红细胞脆性、白细胞数、嗜中性粒细胞数、单核细胞数、总胆红素、肌酐、尿素和乳酸脱氢酶分别都极显著高于健康鱼(P0.01);淋巴细胞数和嗜酸性粒细胞数与健康鱼相比,无显著差异(P0.05)。由于咽碘泡虫的寄生部位鱼咽部严重膨大堵塞口咽腔并引发鳃组织增生、肾的损伤和贫血等变化,进一步发展为咽部组织坏死破裂出现孔洞流血,导致病鱼无法摄食和呼吸困难等功能障碍而死亡。 相似文献
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以克氏原螯虾(Procambarus clarkii)酚氧化酶(PO)为材料,采用L-DOPA为反应底物,分光光度计测定不同温度和pH条件下PO活力,研究克氏原螯虾PO的特性,为其免疫学研究及优化PO准确测定方法提供依据。结果显示PO活力最高时的温度为35℃,低于和高于35℃活力逐渐下降,45℃以上活力迅速下降;0℃仍具有最高活力的24%。在pH4.0~9.5内PO均具有活力,鳃组织最佳pH5.5,血清最佳pH6.5。因此测定克氏原螯虾PO活力的最佳参数为温度35℃,pH5.5(鳃)或6.5(血清)。以上结果说明冰浴终止反应法测定克氏原螯虾PO活力会影响结果的准确性,要慎用。 相似文献
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硫酸锌胁迫对克氏原螯虾非特异性免疫因子的影响 总被引:4,自引:0,他引:4
将克氏原螯虾(Procambarus clarkii)于浓度为0 mg/L(对照组)、0.40 mg/L、4.04 mg/L及40.37 mg/L硫酸锌(ZnSO4)中分别药浴1 d、2 d、3 d、4 d、7 d、14 d和21 d,测定了肝胰腺和鳃中4种以及血清中6种非特异性免疫因子活性,从免疫学角度探讨ZnSO4对克氏原螯虾的毒性影响.结果显示:21 d内各浓度组在各时间对血清中凝集素活性均无显著影响.血清中溶血素各浓度组活性均表现出随药浴时间延长先逐渐升高再下降的趋势.酚氧化酶(PO)在肝胰腺中各浓度组不同时间之间及相同时间不同浓度组之间的活性差异均不显著,而鳃中在4.04 mg/L以上浓度中药浴2 d内活性显著下降,随药浴时间加长鳃和血清中活性呈增大的趋势.在肝胰腺中4.04 mg/L和40.37 mg/L浓度组药浴1 d、2 d、14 d和21 d的过氧化氢酶(CAT)活性高于或显著高于对照组,药浴3~7 d时低于或显著低于对照组,呈先上升再下降再上升的趋势变化;鳃中始终低于对照组;血清中1~7 d CAT活性均低于对照组,药浴14 d以后显著高于对照组,呈前期抑制后期升高的趋势.酸性磷酸酶(ACP)在4.04 mg/L和40.37 mg/L浓度组中药浴21 d内除40.37 mg/L组药浴3 d时肝胰腺中ACP活性显著高于对照组外,其他时间肝胰腺和鳃中ACP活性主要呈抑制状态,血清中4.04 mg/L组呈先逐渐升高再下降的趋势,而40.37 mg/L组均低于对照组.溶菌酶(LSZ)在4.04 mg/L和40.37 ng/L浓度组中药浴21 d内肝胰腺中活性主要呈前期抑制后期升高的趋势;鳃中4.04 mg/L组LSZ活性先下降再逐渐升高再下降,而40.37 mg/L组活性先升高后下降;血清中各浓度组LSZ活性均高于对照组.结果表明:0.40 mg/L组仅在药浴3 d和4 d时使血清溶血素活性显著升高,而其他时间对其他免疫因子活性均无显著影响;4.04 mg/L以上浓度除对血清凝集素无显著影响外,其他免疫因子活性均发生了显著变化,并且变化规律存在一定的组织差异. 相似文献
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对中华绒螯蟹血淋巴的血清、血浆和血细胞裂解上清液(HLS)中酚氧化酶(PO)的活力以及该酶最适pH和温度进行了测定分析,结果表明在血清和HIS中都有PO活力,而血浆中无PO的存在,血清中的PO来自于血细胞;以L—Dopa为底物,中华绒螯蟹PO活力的最适pH值为6.5,最适温度为40℃。采用SDS、Ca^2+、Mg^2+以及SDS与Ca^2+联合和SDS与Mg^2+联合分别对酚氧化酶原(proPO)进行激活试验,血清和HLS中的PO活力都有显著的增加,其中SDS的激活作用最强,Ca^2+、Mg^2+的激活作用最弱,SDS与Ca^2+联合和SDS与Mg^2+联合的混合激活作用介于SDS和Ca^2+、Mg^2+之间,激活试验表明中华绒螯蟹的PO主要以酚氧化酶原(proPO)形式存在于血细胞中。 相似文献
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陆宏达 《上海海洋大学学报》2001,(4):374-379
中华绒螯蟹 (Eriocheirsinensis)也称河蟹 ,通过人工繁殖蟹苗进行精养或半精养的养殖方式是从 2 0世纪 90年代初开始的 ,但发展极快。 94年以后 ,大规模的人繁蟹苗和成蟹养殖在苏、浙、皖、沪等省市迅速展开 ,在许多水产养殖地区河蟹养殖业已成为渔业生产的主业。近几年来河蟹病害已成为河蟹养殖成败的主要问题 ,而中华绒螯蟹抖抖病是目前危害最大、流行最广、造成河蟹养殖业经济损失最大的一种疾病。作者对该病的原因、病理研究后 ,为了能更有效地控制该病的发生和发展 ,又进行了该病流行病学方面的观察 ,根据疾病的流行… 相似文献
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本文报导上海地区患暴发性病毒病的中国对虾肝胰脏病理变化的研究结果。组织病理变化方面,肝胰脏呈以弥漫性坏死为主的变质性病变;在肝胰脏的上皮细胞核内见到2种病毒颗粒,还见到2种球形包涵体,其浮尔根染色反应为阳性。生化病理变化方面,病虾肝胰脏的酯酶(EST)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性显著减弱,表明病虾代谢功能与免疫功能明显衰退。 相似文献
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用五氯酚钠带水清塘具有用药量少、成本低、操作方便以及对野杂鱼类杀伤力强、清塘彻底效果好等优点.多年来,不少水产养殖户总喜欢用它来清塘.但是,我们发现也有不少的农户由于不太了解该药物的特性,从而忽视了此药的药效期,往往在药效期未过去的情况下,投放鱼种或鱼花,结果导致鱼类中毒死亡,造成不应有的损失.例如,2000年3月份我县有一农户用五氯酚钠对一块1334平方米(2亩)大小的池塘进行清塘,清塘后12天就将150公斤的二龄鱼种投放进去.谁知,鱼种投入塘内不久就出现异常现象,鱼儿乱窜,傍晚全部中毒死亡,直接损失超过千元.据专家反映,类似这种现象在各地屡见不鲜.对此,笔者提醒有关养殖户用五氯酚钠清塘一定要严格注意药效期.经专家实践证明,五氯酚钠的药效期一般需要20天左右的时间才会过去.而且在投放鱼种前一定要先试水.如果在8~12小时之间,所试水的鱼没有异常现象,说明药效期已经过去,这时方可投放鱼种.鱼类对五氯酚钠非常敏感,一般每667平方米水面、1米水深只需用药1.5公斤就足够了.用药时间最好选在晴好天气的中午进行,将药对水全池泼洒.这时水温高,用药后扩散快,浓度高,效果好.
另外,五氯酚钠还可用于虾蟹池清塘.因为虾蟹对此药不敏感,使用后不会伤苗,而对野杂鱼类则能全部消灭,特别是有一定数量的虾蟹种苗的池塘最适合使用它.如果使用其它药物清塘,虾蟹种苗就会遭灭绝之灾,而且还要等到药效过后才能投放苗种.而使用五氯酚钠清塘则不受时间限制,可随时投放虾蟹苗种. 相似文献