Xa21全生育期表达载体的构建

利用PCR技术,以水稻品种明恢63基因组DNA与携Xa21完整基因组片段的载体pDBXa21作为模板,分别克隆了RSuS1启动子（RSP）、Xa21的开放阅读框至终止子的片段,并构建了RSP驱动水稻广谱抗白叶枯病基因Xa21的转基因表达载体。实时荧光定量PCR技术证实,水稻蔗糖合酶基因1（rice sucrose synthase gene 1,RSuS1）在水稻种子中低表达,在叶鞘与叶中全生育期高效表达。     

窄竹叶柴胡内参基因筛选及皂苷合成关键酶基因表达分析

窄竹叶柴胡(Bupleurum marginatum var.stenophyllum)为柴胡属多年生高大型草本植物，以根入药称为藏柴胡，具有较高的药用价值。本试验采用实时荧光定量PCR技术，利用geNorm、NormFinder及BestKeeper3种不同数据分析软件，从5个常用的候选基因(Actin,α-tubulin,β-tubulin,Cyclophilin,EF-1α)筛选出可在窄竹叶柴胡不同器官稳定表达的基因作为内参基因，并利用筛选得到的内参基因分析皂苷合成关键酶基因(HMGR,IPPI,FPS,SS,β-AS)在窄竹叶柴胡不同器官的相对表达量。结果表明β-tubulin基因可作为窄竹叶柴胡不同器官稳定表达的内参基因；皂苷合成关键酶基因在窄竹叶柴胡的不同器官中表达量有显著差异，IPPI基因在种子中表达量最高，其他基因在根中的表达量均高于在其他器官中的表达量，其中HMGR,FPS,SS在侧根的表达量高于主根。因此，窄竹叶柴胡各器官皂苷合成关键酶基因的表达量不同，最适内参基因为β-tubulin基因，本研究为窄竹叶柴胡分子生物学研究提供一定依据，促进其合理开发和利用。