克隆文库分析红树林土壤中放线菌的多样性

直接提取8个红树林土壤的总DNA,用放线菌门的特异性PCR引物进行扩增,通过构建16S rRNA文库,测序及系统发育分析,获取新颖放线菌菌株.结果发现,有酸微菌亚纲(Acidimicrobidae) (30.2％)、放线菌亚纲(Actinobacteridae) (68.0％)、红蝽菌亚纲(Coriobacteridae)(1.1％)和去腈基菌亚纲(Nitriliruptoridae)( 0.7％)成员,没有红色杆菌亚纲( Rubrobacteridae)成员.仙农指数和Chao1物种多样性指数(Schao1)表明,红树林土壤样品中含有丰富的放线菌多样性.以16S rDNA基因的相似率≥97％作为临界点,45.1％可能代表新候选种(candidate species)(未培养、分离).本研究为进一步获取新颖的红树林放线菌资源提供了基础.     

富集培养促进宏基因组途径获得聚酮酶基因的研究

进行了富集培养促进宏基因组途径获得聚酮酶基因的研究。结果表明,通过富集培养土壤样品有效提高了红树林土壤高分子量DNA的提取效率,且经分散差速离心(DDC)法预处理并由RH-土壤浸提液富集培养后,可同时检测到放线菌和聚酮化合物合成酶的特征序列,该富集培养样品有助于构建红树林土壤宏基因组BAC文库和聚酮合酶基因的筛选。     

真菌分类技术的研究进展

综述了真菌分类研究中一些常用技术的变化和发展,并归纳和总结了这些技术的优缺点。     

红树林土壤因子对土壤微生物数量的影响

研究海南清澜港红树林土壤微生物数量和8个土壤因子对微生物数量的影响,结果表明,红树林5～20cm土层细菌数量达1.0×106～12.9×106cfu/g(cfu:colony-formingunit)s,放线菌数量达0.7×103～19.0×103cfu/g,真菌数量达0.5×102～5.2×102cfu/g。逐步回归分析显示:土壤pH、含水量、全磷量、全钾量明显影响土壤细菌的数量;土壤pH、有机质含量、有效钾含量明显影响放线菌的数量;土壤pH、全钾量明显影响真菌的数量。通过标准化回归系数分析(通径分析),仅有土壤pH是影响细菌、放线菌数量的主要因子,其直接通径系数分别为0.88和1.15,并且两者都达显著水平;全氮、速效钾通过土壤pH对细菌和放线菌数量的间接作用也比较大,两者对细菌数量的作用系数都为0.44,对放线菌数量的作用系数都为0.58。土壤pH对细菌、放线菌数量的影响作用可能与红树林土壤普遍偏酸的现象有关,而多数细菌、放线菌类群生长的最适pH为6～8。真菌的线性回归模型未达显著水平,未能运用通径分析法来估计土壤因子的影响作用。这可能因为多数真菌类群嗜酸(pH5￣6),而被调查的16个土样,有9个样品pH<5,有2个样品pH>6,土样pH的这种分布使其对真菌数量的影响作用不能用线性模型来拟合。     

抗真菌活性物质的分离纯化及生物活性研究

拮抗菌Bacilluscereus041381菌株在淀粉液体培养基中产生的蛋白质经硫酸铵分级盐析、DEAE-SephadexA-25柱层析、SephadexG-50柱层析后,分离纯化得到的抗菌蛋白在电泳中显现出一条带。初步确定其分子量为2.5KD;所得活性物质对黑曲霉、米曲霉、稻瘟霉、弯孢霉等丝状真菌不具有抗性;对细胞B16,Hela,Smmc-721,K-562的毒性检测,不具有细胞毒性。     

phaC1、phaC2基因双价植物表达载体的构建及其转基因烟草的获得

利用聚合酶链式反应(PCR)技术，从类产碱假单胞菌YSl(Pseudomonas psuedoalcaligenese YSl)染色体DNA中扩增并克隆了调控短链与中链PHA生物合成的两个关键酶基因：phaCl、phaC2基因。同时利用套叠PCR技术对phaCl基因进行了改造，经过基因拼接构建了植物表达载体pC3C1(嵌合phaCl)、pC3C2(嵌合phaC2)和pC3C1C2(嵌合phaCl和phaC2双基因)。将构建好的嵌合phaC1和phaC2双基因的植物高效表达载体pC3C1C2，用冻融法转入根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens EHAl05)并且通过农杆菌介导的叶盘法转化烟草(Nicotiana tobacum Honghuadajinyuan)。2个月后获得了一批卡那霉素抗性烟草植株，抗性植株大田生长表型正常，生长速度相对缓慢。抗性植株经过PCR、PCR-Southern、Southern检测初步确定有32％烟草稳定整合了phaCl和phaC2。用氯仿一次氯酸钠直接从部分Southern检测阳性转化植株中抽提纯化得到PHA，在产物合成水平确证有25．6％的转基因植株。     

转基因烟草生产生物可降解塑料(PHA)遗传稳定性的初步分析

为检测转只pseudoalkaligenese YS1的PHA合成酶phaC1、phaC2双价基因在转基因烟草后代植株的遗传稳定性，以已获得的两株转PHA合成酶phaC1、phaC2双价基因的烟草及其后代为材料，通过对转基因烟草各后代进行PCR、PCR-Southern检测，初步确定了P.pseudoalkaligenese YS1 PHA合成酶phaC1、vhaC2双价基因能在转基因植株的后代中稳定地遗传；利用卡那霉素抗性大田直接筛选、Southern blot等方法对阳性植株作了进一步检测。用氯仿-次氯酸钠对74株PCR-Southern检测为阳性的转化植株中进行PHAs抽提，有61株中得到目的产物。所转化的烟草在产物合成水平上转化率为67．7％。     

微生物资源的生物勘探

从传统资源研究方法和"meta-技术"两方面阐述了微生物勘探的必要性,介绍微生物勘探的主要内容与研究方法,讨论微生物勘探对微生物资源研究的意义与价值及其发展趋势。     

木薯渣固态发酵植酸酶的条件研究

木薯渣粗蛋白及无机盐含量较低，与麸皮、米糠混合或同时添加无机氮源及无机盐，可作为发酵培养基合成植酸酶。高浓度的磷抑制植酸酶的合成。最佳发酵条件为：木薯渣为唯一碳原，添加 ２％ ＮＨ４ＮＯ３， ０．０１％ Ｋ２ＨＰＯ４， ０．０５％ ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ， ０．０５％ ＫＣＩ， ０．０１％ ＦｅＳ－Ｏ４· ７Ｈ２Ｏ， ０．９％ ＳＤＳ，培养基水分含量 ６０％～６５％， １０ｇ木薯渣／２５０ ｍＬ三角瓶，接种量为２ｍＬ菌悬液（２．８×１０个孢子／ｍＬ），自然 ｐＨ值，培养温度 ２８～３１℃，第８ｄ达产酶高峰，高峰期产酶量为 ６７３０ Ｕ／ｇ干曲。     

玫瑰孢链霉菌NRRL11379产达托霉素前体物A21978C的发酵培养基优化

[目的]对玫瑰孢链霉菌NRRL 11379进行发酵培养基优化,寻找产物A21978C较好的发酵培养基配方。[方法]从16种发酵培养基中筛选较好的培养基,通过单因子试验和正交试验进行优化。[结果]得到玫瑰孢链霉菌NRRL 11379产达托霉素前体物A21978C组分的最佳发酵培养基为:葡萄糖1%、可溶性淀粉4%、黄豆粉1%(、NH4)2SO40.3%、MOPS 6%、K2SO40.8%、NaCl 0.1%。[结论]优化后的产量约为60 mg/L,比优化前提高9.2倍。