猪胚胎期小肠组织MKRN3基因启动子区CpG岛的甲基化模式分析

为揭示猪MKRN3基因启动子区CpG岛在胚胎小肠组织的甲基化模式,本实验以梅山猪-大白猪正反交为模型,以65、100日龄的胚胎小肠组织为研究材料,首先利用生物信息学手段预测猪MKRN3基因的启动子区CpG岛,围绕预测的CpG岛设计引物,采用重亚硫酸盐测序法检测梅山猪、大白猪正反交不同发育时期胚胎小肠组织中目的基因的甲基化水平。结果表明:在大白×梅山65日龄胚胎小肠中,猪MKRN3基因启动子区CpG岛呈现高度甲基化(70.8%),而在梅山×大白65日龄胚胎小肠中呈现低甲基化(8.4%),正反交后代的甲基化模式截然相反;在大白×梅山100日龄胚胎小肠组织中,目的基因CpG岛呈现低甲基化(16.4%),而在梅山×大白100日龄胚胎小肠组织中的平均甲基化水平为37.2%。MKRN3基因启动子区CpG岛的甲基化模式随着正反交、胚胎发育时期不同而呈现出一定变化规律,推测该基因的DNA甲基化具有父母本等位基因偏好性,且在胚胎发育65~100日龄父本或母本等位基因可能会发生明显的去甲基化。本研究结果为进一步阐明猪MKRN3甲基化水平调控其基因表达及印记状态提供一定理论基础。     

Necrostatin-1对脂多糖刺激的断奶仔猪血细胞分类计数和血液生化指标的影响

本试验旨在研究程序性坏死阻断剂Necrostatin-1(Nec-1)对脂多糖(LPS)刺激断奶仔猪血细胞分类计数和血液生化指标的影响。选用25头断奶仔猪,分为对照组[10%二甲基亚砜(DMSO)+生理盐水]、LPS组(10%DMSO+LPS)、0.33Nec-1组[0.33 mg/kg体重(BW)Nec-1+LPS]、1.0Nec-1组(1.0 mg/kg BW Nec-1+LPS)和3.3Nec-1组(3.3 mg/kg BW Nec-1+LPS)。注射10%DMSO或Nec-1 30 min后,对照组注射生理盐水,其他组注射100μg/kg BW LPS,分别在注射LPS或生理盐水4 h和24 h后采血液样品待测。结果表明:注射LPS 4 h后,0.33 mg/kg BW Nec-1、1.0 mg/kg BW Nec-1和3.3 mg/kg BW Nec-1显著缓解LPS刺激导致的血小板分布宽度升高(P0.05);0.33 mg/kg BW Nec-1能显著缓解LPS刺激导致的血浆谷草转氨酶(AST)活性和AST/谷丙转氨酶(ALT)比例的升高(P0.05),1.0 mg/kg BW Nec-1显著缓解血浆葡萄糖含量和肌酸激酶活性的降低(P0.05);注射LPS 24 h后,0.33 mg/kg BW Nec-1、1.0 mg/kg BW Nec-1和3.3 mg/kg BW Nec-1可显著缓解LPS刺激导致的嗜酸性粒细胞比例的升高(P0.05),并有缓解嗜酸性粒细胞绝对值升高的趋势(P0.10);0.33 mg/kg BW Nec-1缓解了肌酸激酶活性的降低并提高了血浆总胆固醇和甘油三酯含量(P0.05),1.0 mg/kg BW Nec-1有缓解LPS刺激导致的血浆AST/ALT升高的趋势(P0.10),3.3 mg/kg BW Nec-1能显著缓解AST/ALT比例的升高(P0.05)和葡萄糖的降低(P0.05),并有缓解AST升高和总胆固醇降低的趋势(P0.10)。以上结果表明,Nec-1对LPS刺激导致的免疫应激反应具有一定的缓解作用。     

中链脂肪酸对脂多糖诱导的断奶仔猪肠黏膜免疫屏障损伤的保护作用

本试验旨在研究中链脂肪酸对脂多糖(LPS)诱导的断奶仔猪肠黏膜免疫屏障损伤的保护作用。将24头(21±1)d、体重为(9.0±0.7)kg的杜×长×大三元杂交断奶仔猪随机分为4个处理组,每个处理组6个重复,每个重复1头猪。试验采用2×2因子设计,2个主因子分别为日粮处理(中链脂肪酸或玉米油)和免疫应激(LPS或NaCl)。预试7 d,试验期为21 d。试验第21天,每个日粮组3个重复注射100μg/kg体重(BW)的LPS,另外3个重复猪注射等量的生理盐水,4 h后屠宰取肠道样品待测。结果表明:中链脂肪酸显著提高了空肠绒毛高度(P0.05),降低了空肠、回肠固有层细胞密度和回肠PP结细胞密度(P0.05);中链脂肪酸还缓解了LPS刺激导致的空肠杯状细胞数的升高和上皮间淋巴细胞数的减少。综上,日粮中添加中链脂肪酸有保护仔猪肠黏膜免疫屏障的功能。     

亚麻籽油对脂多糖刺激断奶仔猪肠黏膜结构和免疫细胞的影响

本试验旨在研究亚麻籽油对脂多糖(LPS)刺激断奶仔猪肠黏膜结构和免疫细胞的影响。选择24头(9.15±0.90)kg杜×长×大断奶仔猪,随机分为4组,每组6个重复,每个重复1头猪。试验采用2×2双因子设计,主因子包括:1)饲粮处理(5%玉米油或5%亚麻籽油);2)免疫应激(注射生理盐水或LPS)。饲粮中添加5%玉米油或5%亚麻籽油饲喂21 d,在试验第21天,每组1/2的猪腹膜注射100μg/kg BW的LPS,另外1/2的猪腹膜注射等量生理盐水。注射LPS或生理盐水4 h后,将仔猪麻醉屠宰,取肠道样品待测。结果表明:1)LPS刺激显著降低了空肠、回肠绒毛高度和空肠隐窝深度(P0.05),显著提高空肠固有层细胞密度和嗜中性粒细胞数目(P0.05),有降低空肠上皮间淋巴细胞数目(P=0.080)和回肠杯状细胞数目(P=0.059)的趋势;2)LPS刺激对亚麻籽油组仔猪空肠、回肠绒毛高度无显著影响(P0.05);饲粮添加5%亚麻籽油有提高回肠派氏结细胞密度的趋势(P=0.064),且在LPS刺激下,显著降低空肠固有层细胞密度(P0.05),并有增加空肠上皮间淋巴细胞数目的趋势(P=0.069)。结果提示,5%亚麻籽油在一定程度上可维护LPS刺激断奶仔猪的小肠黏膜结构和免疫功能。     

香菇多糖对脂多糖刺激的仔猪空肠细胞死亡信号通路相关基因表达的影响

本试验旨在探讨香菇多糖对脂多糖(LPS)刺激的仔猪空肠细胞死亡信号通路相关基因表达的影响。选取24头健康的28日龄“杜×长×大”断奶仔猪,平均体重为(8.12±0.19)kg,随机分为4组,每组6个重复,每个重复1头猪。试验采用2×2因子设计,主因子分别为饲粮处理(基础饲粮或基础饲粮中添加0.02%的香菇多糖)和免疫应激处理(注射生理盐水或LPS)。试验第28天,免疫应激组仔猪腹膜注射100μg/kg体重(BW)的LPS或生理盐水。注射LPS或生理盐水4 h后,仔猪麻醉屠宰,取空肠样品待测。试验期为28 d。结果表明:1)LPS刺激导致仔猪空肠绒毛萎缩,肠上皮脱落,肠道形态受损;饲粮添加香菇多糖缓解了LPS刺激所导致的肠道形态结构损伤。2)LPS刺激显著提高了空肠程序性坏死信号通路关键基因受体互作蛋白激酶3(RIP3)mRNA的相对表达量(P<0.05),显著降低了动力相关蛋白1(Drp1)和混合系列蛋白激酶结构域样蛋白(MLKL)mRNA的相对表达量(P<0.05)。饲粮添加香菇多糖显著降低了空肠程序性坏死信号通路关键基因受体互作蛋白激酶1(RIP1)、Fas死亡结构域相关蛋白(FADD)mRNA的相对表达量(P<0.05)。3)LPS刺激显著降低了空肠焦亡信号通路关键基因凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱天冬酶(Caspase)⁃1、白细胞介素-18(IL⁃18)以及凋亡信号通路关键基因Caspase⁃9、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)mRNA的相对表达量(P<0.05),显著提高了空肠焦亡信号通路关键基因核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)及凋亡信号通路关键基因Caspase⁃8 mRNA的相对表达量(P<0.05)。饲粮添加香菇多糖显著降低了空肠焦亡信号通路关键基因NLRP3 mRNA的相对表达量(P<0.05)及凋亡信号通路关键基因Caspase⁃9和原癌基因蛋白xl(Bcl⁃xl)mRNA的相对表达量(P<0.05)。4)LPS刺激显著降低了空肠自噬信号通路关键基因自噬相关基因12(Atg12)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和Unc⁃51样激酶1(ULK1)mRNA的相对表达量(P<0.05)。饲粮添加香菇多糖显著降低了空肠自噬信号通路关键基因Atg12、LC3和ULK1 mRNA的相对表达量(P<0.05)。由此可见,饲粮添加香菇多糖是通过调控程序性坏死、焦亡和自噬信号通路关键基因,从而维持肠道完整性。     

猪印记基因MKRN3的SNPs筛选及胴体性状关联分析

以梅山猪、大白猪和长白猪为研究对象,筛选出MRKN3基因的单核苷酸多态位点(SNPs)并进行PCR-RFLP验证,利用PCR-Bst UI-RFLP对大白×梅山F2代资源家系(285头)DNA样品酶切分型,将分型结果与猪胴体性状进行关联分析。结果表明:猪MRKN3基因编码区有7个SNPs,分别为293CG、361GA、497GA、630GA、678TC、1376CT、和1407TA;其中678TC位点等位基因频率在中外不同猪种中存在差异;猪MRKN3基因678TC位点与内脂率及臀部膘厚显著相关(P0.05);678TC位点对内脂率具有显性效应(P0.05),表现为该位点杂合子比纯合子具有更高的内脂率;而该位点对臀部膘厚具有加性效应(P0.05),表现为等位基因678C的累加具有降低臀部膘厚的效应。因此,猪MKRN3基因的678TC位点可为猪的分子育种实践提供一定指导作用。     

羧甲基纤维素钠对脂多糖刺激仔猪肝脏损伤的保护作用

为研究日粮中添加羧甲基纤维素钠(Sodium Carboxymethyl Cellulose,CMC)对脂多糖(Lipopoly saccharide,LPS)刺激仔猪肝脏损伤的保护作用，本试验选用24头(8.09±0.23)kg杜×长×大断奶仔猪，随机分为4组，即对照组(基础日粮)、CMC组(基础日粮+0.2%CMC)、LPS组(基础日粮+LPS)、LPS+CMC组(基础日粮+0.2%CMC+LPS)。在试验第17天，LPS组和LPS+CMC组仔猪腹腔注射LPS，对照组和CMC组注射等量生理盐水。4 h后采血，屠宰取肝脏样品待测。结果表明：日粮添加CMC降低了血浆谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)活性(P<0.05)，缓解了LPS导致的肝脏病理损伤；日粮添加CMC缓解了LPS刺激导致肝脏过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性的降低及环氧合酶2(COX2)mRNA表达量的升高(P<0.05)；日粮添加CMC降低了肝脏TNF-α和IL-6水平及髓样分化因子88(MyD88)、核苷酸结合寡聚域受体1(NOD1)、白细胞介素-6(IL-6)(P<...     

猪 MKRN3 基因启动子区CpG岛在胚胎心脏组织甲基化模式分析

以梅山猪-大白猪正反交为模型,以65日龄和100日龄的胚胎心脏组织为研究材料,对MKRN3基因启动子区CpG岛进行预测,根据预测的CpG岛设计引物,采用重亚硫酸盐测序法(BSP法),分析MKRN3基因启动子区CpG岛在胚胎心脏组织的甲基化程度。结果显示:对于65日龄胚胎,猪MKRN3基因启动子区CpG岛在大白×梅山和梅山×大白杂交后代的胚胎心脏组织中均表现高度甲基化(75.6%、76.4%);对于100日龄的胚胎,大白×梅山杂交后代的胚胎心脏组织表现高度甲基化(80%),而梅山×大白杂交后代的胚胎心脏组织呈现低甲基化(35.6%)。由此可见,猪MKRN3基因启动子区CpG岛的甲基化模式随着正反交、胚胎发育时期不同而呈现出一定变化,即在胚胎发育65日龄时,正反交子代均具有高度甲基化;而在胚胎发育至100日龄,正交子代呈现高度甲基化,反交子代呈现低甲基化,说明在胚胎发育晚期父本或母本等位基因可能会发生明显的去甲基化。