甘草总黄酮对高脂条件下罗非鱼肝损伤的保护作用

为了研究甘草总黄酮对高脂饲料造成的罗非鱼(Oreochromis niloticus)脂肪肝损伤是否具有保护作用,随机将180尾健康无伤罗非鱼分成6组,即对照组、高脂饲料模型组和4个不同浓度甘草总黄酮组(0.05、0.10、0.50、1.00 g·kg^-1甘草总黄酮),每组30尾。饲喂90 d后,采集罗非鱼各实验组肝,测定肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)活性、丙二醛(MDA)含量、甘油三酯(TG)含量、总胆固醇(TC)含量、总抗氧化能力(T-AOC)水平,Western blotting法检测肝中核转录因子-κB P65(NF-κB P65)和核转录因子-κB C-Rel (NF-κB C-Rel)蛋白表达水平,RT-PCR法测定肝中微粒体甘油三酸酯转移蛋白(MTTP)和载脂蛋白B100(ApoB100)基因表达情况。结果表明:与对照组相比,高脂饲料模型组罗非鱼肝匀浆中TG、TC、MDA含量极显著(P<0.01)升高,GSH活性、SOD活性、T-AOC水平均极显著(P<0.01)降低;MTTP和ApoB100 mRNA表达水平降低(P<0.01或P<0.05);Western blotting结果显示,NF-κB P 65和C-Rel蛋白表达水平升高。饲料中加入甘草总黄酮后,与高脂饲料模型组相比,罗非鱼肝中GSH活性、SOD活性、T-AOC水平不同程度提高,TC、TG、MDA含量和NF-κB P65、C-Rel蛋白表达水平不同程度降低,MTTP和ApoB100的mRNA表达水平升高,以0.50 g·kg^-1甘草总黄酮组效果较好。说明甘草总黄酮对于罗非鱼脂肪肝损伤具有一定的保护作用,可以缓解高脂饲料造成的脂肪肝损伤。     

虎杖提取物对CCl4诱导建鲤损伤肝细胞生化指标的影响

为探明虎杖对鱼类损伤肝细胞是否具有修复作用，分离建鲤肝细胞，设6个试验组：I组(空白对照组)；II组(CCl4模型组)；III组(800 μg/mL虎杖提取物对照组)；IV组(造模前200、400、800 μg/mL虎杖提取物处理组)；V组(造模后200、400、800 μg/mL虎杖提取物处理组)；VI组(造模前、后200、400、800 μg/mL虎杖提取物处理组)。各组细胞经处理后继续培养12 h，收集肝细胞培养液，检测上清培养液中丙氨酸转氨酶(GPT)、天冬氨酸转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)等酶活性，丙二醛(MDA)含量及肝细胞的存活率。结果表明：III组肝细胞培养液中GOT、GPT、LDH、SOD、MDA值及细胞存活率与I组相比无明显变化(P＞0.05)，说明800 μg/mL虎杖提取物没有细胞毒性，可用于后续试验；与II组相比，IV组中800 μg/mL虎杖提取物处理组的效果优于其他2个浓度组，可以极显著降低培养液中GOT值(P<0.01)，显著降低培养液中GPT、LDH值(P<0.05)，显著提高肝细胞的存活率(P<0.05)，而MDA含量和SOD值差异无统计学意义(P＞0.05)；与II组相比，V组中400 μg/mL虎杖提取物效果优于其他2个浓度组，可以极显著降低培养液中GOT值(P<0.01)，显著降低培养液中LDH值(P<0.05)，显著提高肝细胞的存活率(P<0.05)，但GPT值、MDA含量、SOD的差异无统计学意义(P＞0.05)；与II组相比，VI组中800 μg/mL虎杖提取物效果优于其他2个浓度组，能极显著降低培养液中GOT、GPT、LDH在肝细胞中的释放(P<0.01)，显著降低培养液中MDA含量(P<0.05)，显著提高肝细胞的存活率(P<0.05)。综合以上结果，以VI组中800 μg/mL的虎杖提取物效果最好，能有效抑制CCl4所造成的肝细胞损伤，其机制可能与其抗氧化作用有关。     

奥利亚罗非鱼SOX9基因cDNA全长的克隆及分析

SOX9基因是重要的转录调控因子,与性别分化形成密切相关.以奥利亚罗非鱼(Oreochromis aurea)为研究材料,使用RT-PCR和RACE法分离和克隆了奥利亚罗非鱼卵巢中SOX9基因cDNA的全长序列.序列全长1 582 bp,其中5'端非翻译区长71 bp,3'端非翻译区长75 bp,开放性阅读框长1 437 bp,编码478个氨基酸.其中第98位开始共81个氨基酸为HMG保守盒.将奥利亚罗非鱼SOX9基因与虹鳟等八种动物的氨基酸序列相比较发现,它们同源性达75%左右,表明SOX9基因在进化中较保守.     

2种多糖对鲤鱼离体培养免疫细胞活性的影响

采用Percoll密度离心等技术,对鲤鱼的头肾巨噬细胞和外周血白细胞进行分离纯化,并离体培养。体外暴露不同浓度的黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)和香菇多糖(Lentinan,LNT)后,分别采用MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)法测定它们对鲤鱼外周血白细胞增殖的影响;NBT(nitroblue tetrazolium)还原法和Griess试剂显色法测定对头肾巨噬细胞的呼吸暴发的影响。结果显示,香菇多糖能显著诱导巨噬细胞的氧暴发活性,黄芪多糖则没有显著的诱导作用;香菇多糖低浓度时对细胞的氮呼吸暴发活性无显著影响,黄芪多糖能显著诱导氮呼吸暴发活性,随着两者作用浓度的增加均表现为高浓度抑制作用;香菇多糖和黄芪多糖都能显著促进鲤鱼外周血淋巴细胞的增殖。结果表明黄芪多糖和香菇多糖对离体培养鲤鱼免疫细胞有明显活性作用,对鲤鱼非特异性免疫和特异性免疫具有促进作用,是有潜力的鱼用免疫增强剂。     

黄芪对鲤头肾中巨噬细胞的增殖和一氧化氮产量的影响：离体研究

用密度梯度离心分离鲤头肾中的巨噬细胞和嗜中性粒细胞。用RPMI细胞培养液对分离的细胞进行原代培养,在细胞培养液中加入不同浓度的黄芪水提取液来研究黄芪对鲤头肾中免疫细胞非特异性免疫应答的影响。黄芪水提取液单独使用时能刺激鲤头肾中巨噬细胞的增殖,但不能刺激巨噬细胞的氮暴发活性。用黄芪和脂多糖(LPS)混合刺激巨噬细胞和中性粒细胞时,黄芪水提取液能显著提高脂多糖刺激所产生的一氧化氮的产量。研究结果表明,黄芪不仅能刺激巨噬细胞数量的增加,而且能协同脂多糖增强头肾中免疫细胞的功能,从而对机体的非特异性免疫起调节作用。     

猪苓多糖对四氯化碳诱导建鲤肝损伤的保护作用

[目的]研究猪苓多糖对四氯化碳（CCl4）诱导建鲤急性肝损伤的保护作用,为鱼类肝胆综合征治疗药物的筛选提供理论依据.[方法]在基础饵料中添加不同比例（0.1％、0.5％和1.0％）的猪苓多糖连续饲喂建鲤8周后,采用CCl4进行急性肝损伤造模,72 h后采集血液分离血清,检测血清中总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、总抗氧化能力（T-AOC）及丙氨酸转氨酶（GPT）、天冬氨酸转氨酶（GOT）活性;采集肝脏组织匀浆上清液,检测匀浆上清液中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）含量;同时采集肝脏组织制备组织切片,显微镜下观察组织结构变化.[结果]经CCl4诱导处理能引起建鲤血清肝功能指标、抗氧化指标显著变化,肝脏组织结构明显受损,肝细胞核仁大部分消失,呈核空泡化.但在基础饵料中添加1.0％猪苓多糖能极显著降低血清GOT、GPT活性（P＜0.01）,显著升高血清TP、ALB、T-AOC值（P＜0.05,下同）;显著升高肝脏组织匀浆上清液中SOD、GSH、GSH-Px活性,显著降低MDA含量;明显抑制CCl4对肝脏组织结构造成的损伤,肝脏组织结构基本恢复正常.[结论]在建鲤基础饵中添加1．0％猪苓多糖对CCl4所引起的肝脏损伤有明显的保护作用,可有效清除机体内自由基和抑制脂质过氧化。     

银杏叶提取物对鲤生长性能、抗氧化功能和免疫相关基因表达的影响

为探讨日粮中添加不同水平的银杏叶提取物(Ginkgo bioba extract, GBE)对鲤(Cyprinus carpio)生长性能、血清生化指标、抗氧化功能、细胞色素酶以及免疫相关基因表达的影响, 在基础饲料中分别添加不同含量的银杏叶提取物[0 (对照组)、0.5 g/kg、1.0 g/kg、5.0 g/kg]投喂鲤 60 d。饲喂实验结束后, 称重并采集血液、肝脏、肠道、 鳃和肌肉组织, 检测相关生化指标以及基因表达的变化。结果表明: 与对照组相比, 饲料中添加不同水平 GBE 对鲤生长性能和饵料系数均未产生显著影响(P>0.05)。血清生化数据显示: 饲料中添加 GBE 显著提高了总蛋白(TP) 含量, 而降低了葡萄糖(Glu)和皮质醇(cortisol)水平(P<0.05), 但对总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶(ALT) 和谷草转氨酶(AST)含量无显著影响(P>0.05)。抗氧化参数表明: 与对照组相比, 日粮中添加 GBE 对血清、肝脏、 肠道、鳃和肌肉中丙二醛(MDA)含量无显著影响(P>0.05), 但肝脏中总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD) 和过氧化氢酶(CAT)活性、以及还原型谷胱甘肽(GSH)含量均显著升高。同时, 1.0 g/kg GBE 显著提高了肠道和鳃 T-AOC 含量(P<0.05); 5.0 g/kg GBE 显著提高了鳃 GSH 含量(P<0.05)。基因表达结果显示: 与对照组相比, 饲料中添加 GBE 能显著诱导肝脏和肠道中 cyp3a 基因表达, 而下调 cyp1a 和 cyp1b 基因表达; 同时, 肝脏和肠道中免疫相关基因(c3 和 c-lyz)表达量在 1.0 g/kg GBE 添加组中显著上调(P<0.05)。综上所述, GBE 作为饲料添加剂不能改善鲤的生长性能和饵料系数, 但可以增强鲤的抗应激、抗氧化能力和免疫相关基因的表达, 并且未对鲤产生肝毒性, 鲤饲料中 GBE 建议添加量为 1.0 g/kg。     

氧化应激对鲤抗氧化状态和免疫功能的影响

为探讨氧化应激对鲤抗氧化状态和免疫功能的影响,本实验以H_2O_2作为活性氧自由基(ROS),将鲤暴露于不同浓度的H_2O_2(0、0.25、0.50和1.00 mmol/L)中,诱导鲤产生氧化应激反应。连续暴露7 d后,采集鲤血液和肝组织,以检测相关生化指标以及基因表达量的变化。结果显示,与空白对照组(0 mmol/L)相比,随着H_2O_2浓度的升高,血清葡萄糖(GLU)、皮质醇(cortisol)和乳酸(LA)含量显著升高;而碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)活性仅在1.00 mmol/L H_2O_2处理组中显著高于其他实验组。氧化应激参数显示,与空白对照组(0 mmol/L)相比,0.50和1.00 mmol/L H2O2处理显著降低血清过氧化氢酶(CAT)活性,而提高还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和总抗氧化能力(T-AOC)水平;在肝脏组织中,1.00 mmol/L H_2O_2处理显著降低了GSH含量,促进了MDA生成。基因表达结果显示,与空白对照组相比,1.00 mmol/L H2O2处理组显著上调了肝脏组织中cyp1a表达,而下调了cyp1b表达;同时0.50和1.00 mmol/L H2O2处理显著上调了hsp70、hsp90、c3、c-lyz和hep的表达。研究表明,氧化应激暴露可诱导鲤产生明显应激反应和脂质过氧化,降低机体抗氧化能力并激发免疫应答反应。     

水飞蓟素对建鲤肝细胞DNA损伤的保护作用及相关细胞因子的影响

为了评价水飞蓟素对建鲤肝组织损伤的保护作用,探索其可能的保肝机制,本研究用含水飞蓟素(0.1、0.5和1.0 g/kg)的饲料饲喂建鲤60 d,再腹腔注射30%四氯化碳(CCl4)植物油混合液,损伤72 h后采集肝组织,分别研究肝指数、肝细胞DNA损伤、肝组织病理切片、核转录因子NF-κB/C-Rel及细胞因子i NOS和IL-1β的mRNA表达量的变化。结果显示,0.5和1.0 g/kg的水飞蓟素能显著抑制CCl4导致的建鲤肝指数增大,同时能有效减少肝细胞DNA断片的产生,对肝细胞彗星的慧尾长、尾部DNA百分含量、尾矩及Olive尾矩等损伤指标均有显著改善作用;水飞蓟素能明显减轻CCl4作用导致的肝组织广泛性空泡变性、细胞轮廓不清、核固缩和核溶解等组织学病变;0.5和1.0 g/kg的水飞蓟素能显著抑制CCl4诱导的NF-κB/C-Rel和i NOS表达量的增加,而低、中、高浓度的药物均能显著下调IL-1β的表达量;随着水飞蓟素浓度的增大,对肝指数、肝细胞DNA损伤、病理切片及细胞因子的mRNA表达的影响均表现出剂量效应。结果表明,水飞蓟素能有效改善肝细胞DNA的损伤程度,其保肝作用可能与抑制NF-κB活化及下调其下游细胞因子i NOS和IL-1β的表达有关。     

甘草提取物对2,3,7,8-四氯二苯并-p-二噁英致建鲤精密肝切片组织损伤中生化指标及免疫功能的影响

利用精密肝组织切片来评价甘草提取物对2,3,7,8-四氯二苯并-p-二噁英(TCDD)诱导建鲤精密肝切片损伤的保护作用,将制备的肝组织切片分为6个处理组,即Control组、TCDD模型组、甘草提取物对照组、甘草提取物前处理组、甘草提取物后处理组、甘草提取物前后处理组,其中甘草提取物前处理组、甘草提取物后处理组、甘草提取物前后处理组分别换用含0.2、0.4、0.8 mg·mL^-1的甘草提取物L-15培养基与精密肝切片共培养,用于检测损伤肝切片培养液中丙氨酸转氨酶(GPT)、天冬氨酸转氨酶(GOT)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、免疫球蛋白M(IgM)的含量变化,结果表明:前处理组甘草提取物可以较好缓解TCDD对肝组织造成的损伤,降低了肝切片培养液中GOT、GPT活性以及MDA、TNF-α、IL-1β、IgM含量,提高了培养液中SOD活性。这说明甘草提取物可以有效抑制TCDD造成的肝组织损伤,对肝组织具有明显的保护作用。