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禽波氏杆菌免疫荧光检测和抗体检测ELISA方法的建立与应用 总被引:3,自引:0,他引:3
采用改良的Wooldridge法提取了禽波氏杆菌外膜蛋白(0MP),通过Bradford方法测定禽波氏杆菌OMP含量为320μg/mL,SDS-PAGE电泳检测发现禽波氏杆菌P5株OMP含有5种成分,相对分子质量分别为58、47、41、36、24ku;P8株OMP含有6种成分,相对分子质量分别为58、47、41、38、21、16ku。将提取的禽波氏杆菌OMP免疫健康青紫兰兔,每周免疫1次,共免疫4次,获得了兔抗禽波氏杆菌OMP高免血清,以此高免血清建立了检测禽波氏杆菌的间接ELISA和间接免疫荧光(IFA)方法,并对其工作条件进行了优化和筛选,试验结果表明间接ELISA抗原、抗血清最佳工作浓度分别为10μg/mL、1:12800,酶标二抗工作浓度为1:5000,最佳包被条件为4℃、24h,最佳封闭条件为37℃、1h;间接免疫荧光(IFA)兔高免血清释释度为1:20,FITC标记羊抗兔IgG稀释度为1:10,感作时间为45min时,禽波氏杆菌特异性黄绿色荧光最清晰,非特异性荧光最弱。经临床检测证明该两种方法均具有简便、快速、特异性强的特点,为禽波氏杆菌病的流行病学、血清学调查和临床快速诊断奠定了基础。 相似文献
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2006-2007年期间,山东6地区规模化毛皮动物养殖场出现母狐空怀、流产,幼狐呼吸困难,鼻孔出血,气喘并伴有腹泻、死亡等症状,为探明病因,对发病场进行流行病学调查和送检的236份病料组织进行病原学检查,结果表明造成该病的主要原因是由绿脓杆菌(Pseudomonas aerudinosa)、沙门菌(Salmonella)、大肠杆菌(Escherichia coli)和普通变形杆菌(Proteus vulgaris)共感染所致.这4种细菌单独感染、二重感染、三重感染和四重感染的平均感染率分别为50%、45.8%、3.8%和0.4 0%.在分离的4种细菌中以绿脓杆菌的分离率为最高,达到86%,对该痛原又进行(G+C)mol%、16SrRNA序列同源性和系统发育分析,构建了包括9株邻近种属细菌在内的系统发育树,其中与绿脓杆菌(AJ249451)同源性最高,为99.2%,进一步确定该病原菌属于假单胞菌属中绿脓杆菌.本研究为目前规模化毛皮动物养殖场蓝狐病的原因提出了新的思路,为疾病的防治提供了依据. 相似文献
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福建非洲菊产区根腐病病原菌的分离与鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
福建清流是我国重要的非洲菊产区,近年来该地区根腐病为害严重。本研究以表现出根腐病症状的非洲菊病根为材料进行了病原菌分离。经形态学和分子生物学鉴定,分离获得尖孢镰刀菌、隐地疫霉菌、炭疽菌、腐皮镰刀菌等多种致病菌,其中尖孢镰刀菌和隐地疫霉数量最多。经柯赫氏定理验证确定隐地疫霉为导致福建清流地区根腐病发生的主要病原菌。本研究可为福建清流地区非洲菊根腐病防治策略的选择提供依据,同时可为今后非洲菊-根腐病互作机理、拮抗菌的筛选研究奠定基础。 相似文献
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利用噬菌体随机肽库筛选传染性法氏囊病病毒VP2模拟表位 总被引:2,自引:0,他引:2
用纯化的4株传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2单克隆抗体(1B5,5D1,2H11和I4-4-3)筛选噬菌体随机12肽库,对40个克隆(10个单克隆噬菌斑×4株单克隆抗体)进行ELISA验证,获得32个阳性克隆,选20个阳性克隆(5个单克隆噬菌斑×4株单克隆抗体)进行DNA序列分析,确定了4个优势12肽为不同传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗原表位.这4个12肽在一级结构上没有3个以上连续氨基酸与GenBank中传染性法氏囊病病毒、VP2的氨基酸序列相同之处,与单抗的结合可被VP2蛋白有效地抑制,推测可能是构象依赖性表位.将4个模拟表位串联表达后获得目的蛋白,经SDS-PAGE分析,目的蛋白占菌体总蛋白的20%,分子量30 kD.用多克隆抗体对目的蛋白进行免疫印迹分析,结果表明目的蛋白具有特异性和反应原性.试验结果提示:筛选的是传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2单抗的模拟表位. 相似文献
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在中国水稻单产的光合潜力和"农业生态区划"(AEZ)模型计算的最大潜力的基础上,运用ARIMA(自回归单整移动平均)模型预测了2016—2020年中国水稻单产水平。结果表明,2016、2017、2018、2019和2020年中国水稻单产分别为7 070、7 189、7 311、7 435和7 561 kg/hm~2,分别是其最大潜力7 800 kg/hm~2的90.64%、92.17%、93.73%、95.32%和96.94%,说明提高中国水稻单产将变得越来越困难,未来总产的提高应主要依靠改良中低产稻田。 相似文献
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利用大孔树脂分离纯化桤叶唐棣花色苷,通过吸附—解吸试验确定纯化的最佳工艺条件.结果显示:将pH=2.0、花色苷质量浓度为0.100 g/L的粗提液按2柱体积/h通入XDA-8大孔树脂柱,再用体积分数为30%、50%、70%、90%乙醇以3柱体积/h各冲洗4柱体积,花色苷纯度从2.13%增加到39.55%,提高了18.57倍.结合UPLC-MS对纯化物进行鉴定分析,确定主要含矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、飞燕草素-3-葡萄糖苷和锦葵素-3-葡萄糖苷3种成分.经抗氧化和抑菌试验,发现纯化物具有还原性,能有效清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基和羟自由基(·OH),清除率与质量浓度呈正相关;纯化物对3种供试菌具有不同的抑制效果,其由大到小为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌,且质量浓度越大,抑菌性越强.因此,XDA-8大孔树脂可用于纯化桤叶唐棣花色苷,纯化物具有抗氧化性,且对细菌可以起到抑制作用. 相似文献
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