大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

利用PCR技术扩增出大鲵虹彩病毒(giant salamander iridovirus, GSIV)主要衣壳蛋白(MCP)编码区长度为1 392 bp 的片段, 克隆到 pMD19-T载体上, 构建重组质粒 pMD19-T-MCP。经PCR鉴定确认正确后, 以10倍梯度稀释 pMD19-T-MCP重组质粒, 作为标准模板进行 TaqMan实时荧光定量PCR扩增, 制作标准曲线, 建立了大鲵虹彩病毒的 TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。制作的标准曲线有极好的线性关系, 且线性范围宽, 相关系数为0.990 19。组内重复试验的CT值标准偏差为0.52%。检测结果显示, 该方法对大鲵虹彩病毒的检测有高度的特异性, 与锦鲤疱疹病毒、弗氏柠檬酸杆菌、嗜水气单胞菌以及鲤上皮瘤细胞基因组DNA之间均无交叉反应, 特异性好, 检测总DNA灵敏度为10个病毒核酸分子拷贝数, 约1.1×10-3 pg/μL病毒核酸, 较之常规PCR的敏感度高出约1 000倍。研究建立的大鲵虹彩病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强, 对大鲵虹彩病毒病的快速诊断与病毒病原定量检测有重要意义。     

肌醇对氨氮应激下团头鲂幼鱼免疫的影响

为了研究氨氮应激下肌醇对团头鲂幼鱼免疫的影响,实验选择初均重为(3.40±0.07)g的健康团头鲂幼鱼450尾,随机分为6组,每组3个重复,分别投喂含肌醇0、101.2、202.3、404.8、809.1和1 616.4 mg/kg的精制饲料,实验期为90 d。结果表明:与对照组相比,氨氮应激前,404.8 mg/kg肌醇添加组显著提高了团头鲂幼鱼淋巴细胞百分比、补体3、补体4和血液呼吸爆发活性(P0.05);氨氮应激12 h,404.8和809.1 mg/kg肌醇添加组的血液白细胞、红细胞、淋巴细胞百分比、血红蛋白和血清补体3、补体4水平显著升高(P0.05),皮质醇水平显著降低(P0.05),202.3和404.8 mg/kg肌醇添加组的血细胞呼吸爆发活性显著提高(P0.05);氨氮应激72 h,404.8 mg/kg肌醇添加组的血液白细胞、红细胞、淋巴细胞百分比、血红蛋白、血清补体3和血细胞呼吸爆发活性显著升高(P0.05),皮质醇水平显著下降(P0.05),809.1 mg/kg肌醇添加组的血清补体4水平显著升高(P0.05)。研究表明,饲料中添加适量的肌醇(404.8 mg/kg)即可增强团头鲂幼鱼的免疫力,对团头鲂幼鱼抗氨氮应激起到了一定的保护作用。     

大黄蒽醌提取物对罗氏沼虾抗鳗弧菌感染的研究

将罗氏沼虾随机分成5组,每组三个平行,每个平行约1000尾(个体均重1g左右),第1组为对照组,投喂基础日粮,另外4组为试验组,在基础日粮中分别添加0.05%、0.1%、0.2%、0.4%大黄蒽醌提取物,饲养6周后对罗氏沼虾进行鳗弧菌(Vibrio anguillarum)感染.测定生长以及0、12、24、48h血清和肝胰腺溶菌酶、丙二醛(MDA)、总抗氧化能(T-AOC)以及超氧化物歧化酶(SOD)等指标.生长试验表明,与对照组相比,0.1%组、0.4%组罗氏沼虾的增重率、特定生长率显著提高,饵料系数显著降低.攻毒试验Ⅰ表明,各组48h内罗氏沼虾血清溶菌酶活性、肝胰腺溶菌酶含量、血清T-AOC均呈先升高后降低趋势,其中它们的最大值分别出现于0.4%组的12h、0.2%组24h、0.1%组12h;肝胰腺SOD活力呈上升趋势,而血清MDA则一直下降.攻毒试验Ⅱ表明,大黄蒽醌提取物能有效地降低试验组罗氏沼虾的死亡率,提高免疫保护率,其中0.4%组的保护效果为最佳.因此,在饲料中添加大黄蒽醌提取物降低罗氏沼虾对病原的敏感性,增强机体抗病力,促进生长.     

大面积蟹池应用底层管道微孔曝气增氧技术试验（下）

2．市场大规格河蟹价格优势突出，养殖业需要探索研究与之相适应的技术近几年来，河蟹市场竞争激烈，由于价格因素，各地河蟹养殖者纷纷注重“养大蟹”，然而规格仅来自密度的下降，不仅产量有一定限制，而且提高规格的幅度不大。     

不同脂肪源日粮补充维生素E对罗氏沼虾生长、免疫及肉品质的影响

本研究旨在完善罗氏沼虾（）饲料配方，降低罗氏沼虾饲料成本。研究采用3×2双因素设计，配制6组饲料，分别包含鱼油（fish oil，FO）、豆油（soybean oil，SO）、菜籽油（rapeseed oil，RO）三种脂肪源；200 mg/kg（200VE）和600 mg/kg（600VE）两个维生素E（VE）水平。养殖实验在温室水泥池中进行，每个处理3个重复，养殖期8周，每天定点定量投喂3次。结果显示，相对于FO组，SO和RO组增重率、特定生长率显著升高，饵料系数显著下降（>0.05）。对于血淋巴抗氧化指标，在相同VE水平下，FO组血淋巴总抗氧化能力（T-AOC）和超氧化物歧化酶（SOD）活性均显著低于SO和RO组，谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）活性均显著高于SO和RO组（<0.05）。在相同脂肪源下，600VE可显著提高FO组T-AOC活性，RO组GPX活性以及SO和RO组SOD活性（>0.05）。对于血淋巴生理生化指标，谷草转氨酶（AST）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）和甘油三酯（TC）受日粮影响显著（<0.05）。此外，日粮脂肪源和VE水平对肉质也有显著影响。其中，SO组肌肉鲜度和滋味强度较高；RO组鱼腥味较低；FO组肌肉亮度较高，气味强度较低。在200 mg/kg VE水平下，FO组肌肉硬度、胶黏性、耐咀性、黏性和回复性显著高于植物油组（<0.05），而对肌肉蒸煮损失和滴水损失无显著影响（>0.05）。上述结果表明，相对于鱼油，豆油和菜籽油等植物油是罗氏沼虾更优质的脂肪源，VE在以鱼油为单一脂肪源的饲料中有一定的促生长和缓解应激的作用，且脂肪源和VE均显著影响肌肉品质。本研究结果将为降低鱼油在罗氏沼虾饲料中的使用提供数据支持。     

秋季采用配合饲料养殖青虾“太湖2号”试验

正青虾是我国重要的淡水经济虾类,又名河虾,学名日本沼虾,属节肢动物门、甲壳纲、十足目、游泳虾亚目、长臂虾科、沼虾属。青虾营养丰富,味道鲜美,因其高蛋白质、低脂肪、富含多种矿物质及维生素而深受广大消费者的欢迎。随着中国水产科学研究院淡水渔业研究中心青虾"太湖2号"苗种的推广应用,在长江中下游地区已经形成了具有一定规模的青虾养殖产业。但是目前市场上用于青虾的配合饲料多数是从河     

大黄素、维生素C及其配伍对团头鲂感染嗜水气单胞菌后生理生化指标的影响

为综合评价大黄素、高剂量维生素C及其配伍对团头鲂(Megalobrama amblycephala Yih)抗嗜水气单胞菌感染能力的影响,选取1 200尾健康的团头鲂,体质量为(133.44±2.11)g,随机分成4组,其中1组为对照组,投喂基础日粮,另外3组在基础日粮中分别添加60mg/kg大黄素、700 mg/kg维生素C、60mg/kg大黄素+700mg/kg维生素C(配伍组).饲养60 d后,经腹腔注射感染嗜水气单胞菌,并在攻毒前后检测团头鲂血液和肝脏的生化指标以及肝脏2种热休克蛋白70s(HSP70s)mRNA的表达水平;另从各池中取10尾鱼进行同样的攻毒试验,统计攻毒后各时间点鱼的累积死亡率.结果表明,攻毒后,与对照组相比,大黄素、维生素C组不同程度地提高了血清总蛋白(TP)、溶菌酶(LSZ)和碱性磷酸酶(AKP)的水平,肝脏超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性以及HSC70和HSP70 mRNA的表达水平,降低了血清皮质醇(COR)、血糖(GLU)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、甘油三酯(TG)以及肝脏丙二醛(MDA)的水平;配伍组中,这些指标的变化趋势虽与上述类似,但大多与对照组的差异不显著(P＞0.05),且未表现出协同增效作用.此外,各组鱼血清胆固醇(CHOL)的含量在攻毒前后的差异均不显著(P＞0.05).统计也表明,大黄素和维生素C组鱼的累积死亡率在攻毒后24 h、48 h均显著低于对照组(P＜0.05),而配伍组试验鱼的累积死亡率与对照组差异均不显著(P＞0.05).由此可见,在基础日粮中添加大黄素60 mg/kg或维生素C 700 mg/kg,可提高鱼体的非特异性免疫力、抗氧化能力以及2种HSP70s mRNA的表达水平,增强鱼体抗病原菌感染的能力.二者配伍则效果不佳.     

水产动物营养与免疫研究进展

随着水产养殖集约化与规模化的发展,水产品为人类提供了大量优质食物蛋白质,为国家粮食安全、解决我国“三农”问题做出了重要贡献。长期研究实践证明,营养与饲料科技贡献在水产养殖中占有更加重要的地位。饲料组成不仅影响水产动物的营养,而且会影响水产动物的免疫与抗病能力,营养状况是决定水产养殖动物抵抗疾病的能力的重要因素之一。特别是在水产集约化、规模化养殖中,水产养殖动物面临着大量的应激,如：营养、环境因子等激烈变化,易诱发疾病,甚至死亡。反之,水产养殖动物的生理与健康状况也影响饲料的利用与代谢。营养和免疫的关系显著地影响着水产养殖生产,一直是大家关注的热点。在过去的5年中,水产动物营养与免疫方面的研究取得了重大进展,对蛋白质(氨基酸)、脂肪、碳水化合、维生素、矿物元素等多种必需营养素及其免疫、抗病能力等方面做了大量的研究。本文就营养与免疫相关的研究进展做一综述,以供参考。     

团头鲂养殖池塘维氏气单胞菌的致病性耐药性及在不同生态位间的差异

从江苏省常州市团头鲂养殖池塘鱼体内、外环境(内环境包括鱼体肠道、体表黏液、鳃、腹腔、肝脏、肾脏等,外环境包括水体、底泥、浮游生物等)分离鉴定了56株维氏气单胞菌(Aeromonas ueronii),分析56株维氏气单胞菌的致病性、毒力基因及耐药性,并比较了不同生态位间的差异.结果表明:(1)维氏气单胞菌具有一定的致病性,56株维氏气单胞菌中使团头鲂的48h死亡率在40％以上的菌株有26株,为团头鲂细菌性出血病的病原菌之一.(2)细胞兴奋性肠毒素基因alt、溶血索基因hly的检出率分别为26.8％、48.2％,具有2种毒力基因的菌株占19.6％;(alt+、hly+)、(alt+、hly-)、(alt-、hly+)、(alt-、hly-)4种毒力基因菌株型48h致死率分别为41.8％、35％、32.3％、29.2％,表明死亡率与这2种毒力基因可能存在一定的正相关性.(3)维氏气单胞菌对大多数抗生素耐药,对氨苄西林完全耐药,对复方新诺明、诺氟沙星、洛美沙星的耐药率也分别高达94.6％、94.6％、91.1％,只对多黏菌素、庆大霉素较为敏感,敏感率分别为64.3％、48.2％.(4)不同生态位菌株的毒力基因比较结果显示,鱼体上菌株2种毒力基因的携带率(alt30.4％、hly47.8％)大于外界环境毒力基因的携带率(alt10％、hly40％);不同生态位菌株的抗药性呈现出一个特点,即鱼体上分离到的菌株耐药率(67.2％)要明显大于外环境中菌株对药物的耐药率(40％).     

泰和乌骨鸡染色体G-带、Ag-NORs与生产性能关系

以泰和乌骨鸡为研究对象，采用改进的外周血淋巴细胞培养-空气干燥法制备染色体标本片，对泰和乌骨鸡染色体G-带、Ag—NORs进行分析，并对G-带和Ag—NORs频率不同的两组鸡的体重、体尺、屠宰性能及产蛋性能进行比较.结果表明：泰和乌骨鸡体重、体尺、屠宰性能及产蛋性能随G-带众数频率和Ag—NORs均值的升高而呈上升趋势.