基因工程菌表达效率对细菌总蛋白和包涵体中目的蛋白含量的影响

测定了猪生长激素基因工程菌不同表达效率时细菌总蛋白的含量以及包涵体中重组猪生长激素占包涵体总蛋白的比值。结果表明:随着表达效率的提高,细菌总蛋白含量缓慢增加,最后稳定在一定水平上;当表达效率增加,包涵体中重组猪生长激素占包涵体中总蛋白的百分数也增加,两者上升趋势基本一致。     

外源性猪生长激素对猪血液葡萄糖、胰岛素含量的影响

本实验选择体重60kg 左右,出生日期相近的北京黑猪72头(阉公猪和母猪各半)分为四组,Ⅰ组和Ⅱ组饲喂的饲料含蛋白质14%;Ⅲ组和Ⅳ组饲喂的含蛋白质16%。预饲后,Ⅱ组和Ⅳ组每天每只猪注射猪基因工程生长激素1ml(含2mg);Ⅰ组和Ⅲ组每天每只猪注射75mMNaHCO_3液1ml 作对照。注射28天后颈静脉采血除分析血浆非蛋白氮和游离脂肪酸(待发表)外,还用 Follin-Wu 法分析血浆葡萄糖和用放射免疫法测定血浆胰岛素含量     

北京黑猪对注射猪生长激素(PST)的效应

已知用生长激素(PST)处理美国的肥育猪可提高饲料报酬、生长速度和胴体的瘦肉率。由于中国猪比美国猪更肥一些,饲料报酬较低和生长较慢,因而设想用生长激素处理中国猪可能更有效。本试验在肥育期28天内用 PST 处理北京黑猪(由中国地方猪,约克夏和巴克夏杂交育成),在每天饲喂4次的个体饲养组(n=12,6头公猪和6头母猪)中,每天注射2毫克和4毫克 PST 的猪,其饲养报酬分别提高22.3%和30.6%(P<0.01),主要是提高了生长速度(分别比对照组快24.4%和30.2%)(P<0.01),而对饲料摄入量没有影响。每天注射 PST 2毫克(28天),群饲猪(6头/圈,4圈/处理组)得到了类似的结果:饲料报酬提高22.7%(P<0.01);生长速度提高25%(P<0.01)。屠宰分析的结果表明,每天注射2和4毫克 PST 的猪,最后肋膘厚率平均降低19.2%(P<0.01)。剥离分析半片胴体的结果表明,PST 处理猪的疫肉总量和瘦肉率分别提高21.4%和13%(P<0.01),而总脂肪量和脂肪率则分别降低16.7%(P<0.05)和22%(P<0.01)。胴体的化学分析获得类似结果。PST 处理猪的背最长肌的 ...     

中国伊氏锥虫kDNA小环的克隆及kDNA探针的建立

本研究以质粒ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）为载体，对我国北方和南方疫区伊氏锥虫动基体株的ｋＤＮＡ小环进行了克隆，并以其中之ｐＴＫ０１１－Ｃ＿１为探针对不同地理区的动基体株和无动基体株的不同ＤＮＡ进行杂交，结果表明，我国北、南两大疫区动基体株的ｋＤＮＡ小环大小均约为１ｋｂ，且均属Ａ型，ｐＴＫ０１１·Ｃ＿１只与动基体株的ｋＤＮＡ及ｔＤＮＡ杂交，不与其ｎＤＮＡ杂交，也不与无动基体株的任何ＤＮＡ及黄牛白细胞ＤＮＡ杂交。说明具有特异性，可以用于诊断。ｔＤＮＡ的杂交信号与ｋＤＮＡ相当，诊断中可以代替ｋＮＤＡ作为检测对象。     

实验性佝偻症对鸡血清、肠、肝、肾、骨中碱性磷酸酶活性的影响

用高磷低钙饲料使幼龄来航母鸡产生佝偻症,结果发现佝偻症鸡血清和骨组织碱性磷酸酶(AKP)活性均极其显著地高于正常鸡;肠、肝和肾中AKP活性与正常鸡无显著差异。 鉴定了四种碱性磷酸酶抑制剂,结果表明30mM L一苯丙氨酸对鸡肠AKP活性抑制70％左右,而对肝、肾、骨AKP的抑制作用很小。30mM L一高精氨酸对鸡骨AKP活性抑制81％左右,而对鸡肠AKP基本不抑制。30mM L一高精氨酸对正常鸡血清AKP抑制19％左右,对佝偻症鸡血清AKP则抑制75％左右,对以上结果进行了讨论.     

大肠杆菌内猪生长激素cDNA基因表达产物的免疫电镜观察

本室构建的温度诱导高效表达猪生长激素(pGH)cDNA基因的工程;pPT15/N4830的表达效率为30％左右。相差显微镜下可见表达细菌内有包涵体(inclusion bodies, IBs)存在。高速离心(12000g,10min)pGH主要在沉淀内。由于细菌在某些条件下也能产生其他IB颗料,为了证实我们见到的IBs是由pGH的产生而形成的,以及pGH在大肠杆菌内的分布情况,我们用免疫胶体金技术对诱导后的大肠杆菌进行了观察。所用的一抗为本室制备的兔抗猪生长激素多克隆抗体(滴度为32000),使用时稀释100倍;所用的二抗是10nm金颗料标记的SPA(军事医学科学院陈德惠教授惠赠),使用时稀释20倍。其他操作按常规进行。结果表明:1.大肠杆菌内产生的pGH以IBs的形式存在,IBs的大小不一,平均每个细菌内有3～4个IBs。2.IBs以外没有观察到pGH的存在,这与破细胞离心后上清的免疫印渍(Western blotting)结果相吻合。3.与文献报道的免疫酶标技术相比,用免疫胶体金技术观察的结果更加清晰。方法简便,容易掌握。     

人胰岛素基因杆状病毒表达载体的构建及其在Sf9细胞中的表达

对人胰岛素基因真核表达载体（pCMA／mINS）进行Xho I酶切，回收的含人胰岛素基因组基因的1608bp片段与线性化的杆状病载体pFast Bac I进行连接，获得重组载体pFast/mINS。将该重组载体转化DH10Bac感受态细菌，在体内进行重组，并经2次抗性与蓝白斑筛选，得到杆状病毒重组载体Bacmid/mINS。将该载体转染Sf9细胞，获得了重组杆状病毒，经Tricine-SDS-PAGE和Western-blotting检测，重组杆状病毒在Sf9细胞中的表达产物是胰岛素原，而细胞培养上清中未检测到胰岛素和胰岛素原。     

含第一内含子猪生长激素cDNA基因在COS7细胞中的表达

以CMV真核生物启动子构建了含第一内含子猪生长激素（pGH）cDNA基因（pGHcDNA-in）的表达载体，经DEAE-葡聚糖介导在COS7细胞进行了瞬时表达，通过PP95生物学测定法测定，证明含第一内含子pGHcDNA基因能够在真核细胞中进行分泌性表达，表达出的pGH具有生物学活性。这说明通过该基因转录出的前体mRNA能够在COS7细胞中进行正确剪接，从而翻译出具有生物活性的pGH。加入第一内含子在一定程度上可提高pGHcDNA基因的表达效率。     

健康乳牛和骨病乳牛血清中碱性磷酸酶同功酶酶谱的分析

成年乳牛骨软症(或骨质疏松症)是一种常发疾病,但迄今没有很好的生化指标协助诊断。近年来虽然报道了许多家畜在发生骨病时血清中碱性磷酸酶活性的改变,但对于乳牛骨病时血清中碱性磷酸酶活性的变化