不同日龄滩羊皮肤组织化学特征比较

为比较2、35日龄滩羊皮肤毛囊的发育特点与血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和血管内皮生长因子受体2（vascular endothelial growth factor receptor 2，VEGFR2）的分布特征，探究出生后滩羊被毛生长发育的变化特点，试验应用常规HE染色及改良Masson胶原纤维染色、Gomori银氨法染色、磷钨酸染色等特殊染色观察2与35日龄滩羊皮肤组织结构特点；应用免疫组织化学法结合免疫荧光染色法观察VEGF及VEGFR2在2与35日龄滩羊皮肤组织中的分布定位，并用IPP图像分析软件进行定量分析。结果显示：与2日龄滩羊皮肤组织比较，35日龄滩羊表皮与真皮间界限更加清晰，毛囊结构发育完整；毛囊密度显著降低（P<0.05）；胶原纤维与弹性纤维含量增加，形成网格状分布。免疫组化及免疫荧光结果显示，VEGF及VEGFR2在滩羊皮肤表皮及毛囊外根鞘、皮脂腺上均有表达。统计表明，VEGF及VEGFR2在2日龄滩羊皮肤组织中的表达量均显著高于35日龄（P<0.05）。综合上述结果，滩羊毛囊发育过程中，胶原纤维和弹性纤维增加明显；VEGF与VEGFR2通路在毛囊角质形成中起直接调节作用。     

农村建设项目招投标的法律研究及优化措施

加强农村建设项目的招投标管理,对提高农村建设项目质量和效益具有重要意义。目前,我国农村建设市场发育不成熟,管理体制不完善,围标、串标现象频现,监管机制尚不合理。需要对农村招标、投标制度立法,加强研究,预防围标、串标行为的发生,并且强化监管力度,促进我国农村招标市场健康有序的发展。     

猫源C11orf96基因表达及其在细胞中的定位分析

本研究旨在通过克隆猫源C11orf96(Felis catus C11orf96,fC11orf96)基因,并制备其多克隆抗体分析该基因在细胞中的定位。以猫肾细胞cDNA为模板克隆fC11orf96基因,并利用无缝重组连接成功构建重组质粒pET-32a (+)-fC11orf96-Fe。随后将重组质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后成功表达fC11orf96-Fe重组蛋白,并利用该重组蛋白制备多克隆抗体。最后利用Western blot及间接免疫荧光试验分析多克隆抗体的有效性及其细胞定位。结果表明,成功获得猫C11orf96基因CDS序列,全长372 bp,可编码124个氨基酸,表达的fC11orf96-Fe蛋白主要以包涵体形式存在,蛋白大小约49 ku。由该重组蛋白制备的多克隆抗体能够识别细胞内源性fC11orf96蛋白和外源真核表达蛋白,并且发现fC11orf96蛋白定位于细胞质。本研究成功克隆得到猫C11orf96基因,并且fC11orf96蛋白定位于细胞质,为后续研究C11orf96的生物学功能奠定了基础。     

性激素受体在子午岭黑山羊隐睾及正常睾丸中的分布比较

旨在研究性激素受体[雄激素受体（androgen receptor,AR）、雌激素受体（estrogen receptor,ER）]在子午岭黑山羊正常睾丸与隐睾组织中的分布与隐睾症的关系,应用免疫组织化学及免疫荧光技术方法结合形态计量学统计软件,比较了正常睾丸与隐睾的组织化学特点。特殊染色结果显示：与正常组相比,隐睾组间质组织疏松,管腔面积明显减小,糖原含量明显减少,胶原纤维及网状纤维含量增多。免疫组化及免疫荧光结果显示：1） AR在正常睾丸组Leydig细胞呈高密度强阳性表达,在各级生精细胞呈中等强度阳性表达,隐睾组中Leydig细胞及各级生精细胞表达明显减弱,且在精原细胞偶见表达;2） ER在正常睾丸Leydig细胞呈高密度强阳性表达,管周肌样细胞呈中等强度阳性表达,Sertoli细胞偶见表达,各级生精细胞无表达;3） ER在隐睾Leydig细胞、初级精母细胞、精原细胞和Sertoli细胞中均呈中等强度阳性表达;4）统计结果显示,隐睾组AR的平均光密度较正常组显著降低（P<0.05）,而ER的平均光密度则显著高于正常组（P<0.01）,且隐睾组AR与ER表达量比值基本接近1：1。子午岭黑山羊隐睾组织胶原纤维和网状纤维分布较正常睾丸多,生精小管基膜主要成分以中性糖蛋白为主,酸性糖蛋白含量明显降低影响精子的正常形成;隐睾组织精原细胞及Sertoli细胞ER与AR表达失常尤为明显,可为哺乳动物隐睾的相关研究提供一定参考。     

降钙素基因相关肽在牦牛附睾中的定位与表达

【目的】分析降钙素基因相关肽（calcitonin gene related peptide,CGRP）在牦牛附睾中的转录水平及蛋白分布特点,探究其对精子运输及成熟的功能。【方法】采集6头3~4岁健康成年牦牛的附睾,将其解剖为头、体、尾三部分,应用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）、Western blotting分别检测CGRP mRNA和蛋白在附睾的头、体、尾中的表达水平;采用H.E染色法分析附睾组织结构特点;采用免疫组化和免疫荧光技术分析附睾各部分CGRP的分布及表达情况。【结果】RT-qPCR结果表明,CGRP在牦牛附睾头的相对表达量显著高于附睾体和附睾尾（P＜0.05）,附睾尾表达量最低（P＜0.05）;Western blotting检测结果表明,CGRP蛋白水平在附睾尾中的表达水平显著高于附睾头和附睾体（P＜0.05）。显微镜下观察表明,牦牛附睾组织纤毛长度从头部至尾部逐渐降低,差异显著;附睾头间质组织的间质平滑肌层厚度显著低于附睾体和附睾尾（P＜0.05）;基细胞和晕细胞在附睾尾分布显著,上皮厚度亦在附睾尾显著降低。免疫组化及免疫荧光分析发现,CGRP主要分布于附睾上皮、基底膜及附睾间质小血管,附睾上皮晕细胞的表达强度最高。【结论】CGRP主要分布于牦牛附睾上皮和间质小血管,提示CGRP对牦牛附睾间质小血管的收缩发挥调节作用。牦牛附睾尾晕细胞数量最多,晕细胞中CGRP的高强度表达提示其可能参与附睾尾的免疫调节。     

FGF22及其受体在庆阳黑山羊正常睾丸与隐睾中的表达比较

试验旨在研究成纤维生长因子22（fibroblast growth factor 22,FGF22）及其受体2（fibroblast growth factor receptor 2,FGFR2）、硫酸乙酰肝素糖蛋白（heparan sulfate proteoglycans,HSPG）在庆阳黑山羊正常睾丸与隐睾中的分布与表达,探究其在山羊睾丸发育和隐睾形成中的作用。采用HE和特殊染色观察其组织学结构特征,进而以免疫组织化学及免疫荧光法结合形态计量学统计研究FGF22、FGFR2和HSPG在山羊正常睾丸及隐睾中的定位。结果表明,山羊隐睾较正常睾丸生精小管缩窄,腔内各级生精细胞排列紊乱,间质的胶原纤维和网状纤维增多,糖原类物质阳性反应较弱,FGF22在隐睾组织的Leydig、Sertoli细胞、管周肌样细胞及血管内皮细胞整体表达密度相较于正常睾丸显著减弱（P<0.05）。HSPG在正常睾丸表达显著强于隐睾（P<0.05）,间质组织变化尤其明显。FGFR2在隐睾组表达显著增高（P<0.05）,且以Sertoli细胞强阳性表达为主。庆阳黑山羊隐睾较正常睾丸发育异常,间质组织有纤维化趋势,糖原类物质含量减少;FGF22及HSPG表达降低应与隐睾局部环境温度变化密切相关;FGFR2在隐睾组表达增高提示其在发生隐睾时可能通过Sertoli细胞进行适应性调节。