冬种马铃薯卷叶病田间调查及RT-PCR检测技术研究

对惠州市冬种马铃薯卷叶病发病情况进行调查研究,建立了马铃薯卷叶病毒(PLRV)RT-PCR检测技术。结果表明,马铃薯卷叶病发病率为3.0%～29.7%。比较LiCl、异硫氰酸胍和试剂盒3种方法提取马铃薯卷叶病毒总RNA,以异硫氰酸胍和试剂盒提取效果较好,LiCl次之;根据卷叶病毒外壳蛋白基因序列设计引物,从感染马铃薯卷叶病毒的马铃薯叶片中提取出病毒RNA,合成cDNA并运用RT-PCR技术进行体外扩增,得到一条长度约336bp的特异PCR扩增产物,与理论设计的外壳蛋白基因大小一致,而健康叶片RNA扩增未得到任何产物。应用RT-PCR技术对马铃薯试管苗和种薯进行了卷叶病毒检测。     

勒杜鹃种质资源的ISSR分子鉴定技术研究

采用ISSR分子标记技术对17份勒杜鹃种质资源材料进行遗传多样性分析。从48个ISSR引物中共筛选出4个引物，对17份勒杜鹃材料基因组DNA进行有效扩增，扩增出37条带，其中多态性带35条，多态性比率为94．6％。用NTSYS—pc2．10e软件计算勒杜鹃种质材料间的Jaccard遗传相似系数，17种勒杜鹃种质资源材料之间的遗传相似性系数介于0．31～0．89之间，平均遗传相似性系数为0．69。其中11号与其他的种质材料相似系数较低，说明其间存在较高的遗传多样性。利用UPGMA进行的系统聚类分析表明，17份勒杜鹃种质资源材料可划分成2组，11号独立聚成一类，其余16份勒杜鹃种质材料聚成另一大类。供试勒杜鹃种质材料遗传多样性相对较低，迫切需要拓宽勒杜鹃的遗传基础。     

芸香科药用植物ISSR-PCR反应体系的建立及优化

[目的]建立和优化芸香科药用植物的品种的ISSR反应体系,为芸香科药用植物的资源评价、品种鉴定提供依据。[方法]以象头山芸香科植物柚、山油柑、3个品种为研究对象,从DNA提取、退火温度、循环次数、引物筛选等方面研究ISSR反应及优化条件。[结果]选用的20个引物中有3种引物扩增效果较好,以柚为代表的优化结果表明,引物826对芸香科植物扩增的最适退火温度为52.0℃,最佳循环次数为35个循环。[结论]ISSR适合于芸香科药用植物的品种的鉴定。     

基于ISSR分子标记的冬种马铃薯品种遗传多样性分析

以引进的冬种马铃薯品种为研究对象,通过ISSR-PCR分子标记技术对36个马铃薯品种进行分子标记鉴定,分析其遗传多样性,用DNA提取试剂盒提取马铃薯总DNA,筛选合适的引物,建立PCR扩增体系.结果表明:提取的总DNA质量较好,利用筛选出的9个引物经过PCR扩增后共得到81条清晰的条带,平均多态性条带比率达80.25％;聚类分析结果表明,36个马铃薯品种之间的遗传相似系数为0.78～0.91,以遗传相似系数0.80为阈值可以把36个马铃薯品种分为4大类,为冬种马铃薯的选育提供理论依据.     

水稻粒长基因GS3的功能基因标记鉴定

为了研究水稻粒长基因GS3的功能基因标记,建立水稻分子标记辅助育种技术体系,利用GS3特异引物对13个水稻长粒品种和9个短粒品种进行多态性扩增,回收特异性产物并测序,通过分子生物学比对分析寻找控制水稻长、短粒的功能基因标记。结果表明:在26对GS3特异性引物中,有4对引物扩增出多态性条带,分别是HGS3F3R3、HGS3F7R7、HGS3F10R10和HGS3F15R15,共产生10条多态性带,其中多态比率分别为33.3%、83.3%、50.0%和66.7%。通过NCBI Blast序列比对,确认了GS3功能基因的标记。     

茄子ISSR和SSR分子标记的鉴定技术分析

以茄子为研究对象,初步建立起茄子的ISSR和SSR分子标记技术体系,包括DNA提取、退火温度、循环次数和引物筛选等。结果表明,ISSR分子标记体系中,从49条引物中筛选出3个条带清晰的引物对6个品种进行扩增,共检测出26条带,其中多态性带21条,多态性比例为80.77%;SSR分子标记体系中,从4对引物中筛选出3个条带清晰的引物对6个品种进行扩增,共检测出17条带,其中多态性带5条,多态性比例为29.41%,2种方法均能把6个茄子品种区分开来,本实验为茄子品种鉴定和新品种选育提供理论依据。     

利用ISSR技术检测梅菜试管苗的遗传稳定性研究

利用植物组织培养方法建立起梅菜无性系,并连续进行5次继代培养;利用已优化的ISSR-PCR反应体系对不同继代次数(1~5代)的梅菜试管苗进行遗传稳定性分析。结果表明:在梅菜无性系继代过程中,从试管苗的形态方面观测没有发生明显的变化。但利用已优化的ISSR-PCR检测技术对2个梅菜品种亲本及不同继代试管苗进行检测,2个品种之间带型差异明显,同1个品种在不同世代带型基本一致,但从第4代开始,部分引物带型发生变化,但变化甚微,具有较高的遗传稳定性,在4代以内仍可稳定遗传。     

马铃薯卷叶病毒实时荧光定量PCR检测技术研究

研究利用Primer Premier 5.0软件对GenBank数据库中已登录的马铃薯卷叶病毒全基因组序列进行比对,以管家基因Actin作为内参基因,以马铃薯卷叶病毒基因作为目的基因,设计特异性强的引物,采用相对定量法,建立马铃薯卷叶病毒的实时荧光定量检测体系,并利用建立的检测方法对不同马铃薯植株中的马铃薯卷叶病毒(PLRV)进行检测。结果表明:建立的马铃薯卷叶病毒实时荧光定量PCR检测体系获得的Real-time PCR扩增基线平整,指数扩增明显,斜率大,重复性好,变异系数小;马铃薯卷叶病毒cDNA被稀释10~4倍后依然能被检测出来,具有较好的灵敏度;此检测方法成功检测出患病植株中含有马铃薯卷叶病毒,并对其表达情况进行了相对定量。该方法具有高效、特异性强以及能够定量检测等优点,为从分子生物学水平检测马铃薯卷叶病毒提供了一种新手段。     

惠州市冬种马铃薯卷叶病毒病的发生、鉴定及气象影响因子研究

以惠州冬种马铃薯为研究对象,探索不同气象条件对冬种马铃薯卷叶病毒的影响。以田间调查的形式统计了不同时期冬种马铃薯卷叶病毒的发病情况,并对马铃薯卷叶病毒进行分子鉴定,分析了惠州市冬季气温、相对湿度及降水等气象条件对冬种马铃薯卷叶病毒病的影响。结果表明:3次调查马铃薯卷叶病毒病的平均发病率依次为2.48%、12.6%、70.18%,呈上升趋势;分子鉴定结果显示确为马铃薯卷叶病毒的感染;气象条件对冬种马铃薯卷叶病毒的发生有着重要的影响,其中高温、少雨,相对湿度在70%~80%的气象条件易造成马铃薯卷叶病毒病的发生和传播。