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利用特异引物从基因组BAC文库筛选到1个35 kb的片段,对该片段测序比对分析发现可能含有p26的复制区.为了验证该片段中是否含有p26的复制区,首先,将大肠杆菌和苏云金芽胞杆菌穿梭载体pHT304用EcoR I酶切切掉苏云金芽胞杆菌复制子后自连,获得复制子克隆载体pHT304E;随后,将12 kbEcoR I片段亚克... 相似文献
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苏云金芽胞杆菌中华亚种CT-43菌株(Bacillus thuringiensis subsp.chinensis)是高产苏云金素(简称Thu)的野生菌株.但在产生Thu时总伴随有其他代谢物(简称ZZ)的合成.而且ZZ很难与Thu分离开.本实验通过比较不同的培养基,得到G培养基能抑制菌株CT-43合成ZZ.然后利用分批补料发酵的方法,通过正交试验设计,进一步抑制ZZ的合成,并提高Thu在有机萃取物中的含量.得到优化后的发酵工艺是:菌株CT-43在G培养基中培养至第20 h,同时补柠檬酸钠和葡萄糖至终浓度分别为2.0 g/L和16 g/L,再继续发酵至第52 h.通过此发酵工艺制备的Thu峰面积占初提物总峰面积的74.84%,比用LB培养基发酵所得提取物的29.85%提高了两倍多.为得到高纯度的Thu和更深入的研究创造了条件.最后通过液质联用技术证实,发酵工艺优化后,菌株CT-43发酵上清液中主要物质是Thu,几乎检测不到ZZ,而且优化后的Thu分子量并没有改变. 相似文献
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为探讨苏云金芽胞杆菌高温诱导产黑色素机制,利用含mini-Tn10转座子载体pIC333构建苏云金芽胞杆菌油松亚种4CA1,随机插入突变体库,以寻找相关调控基因。通过高温诱导筛选得到1株在42℃产黑色素减弱的菌株;克隆得到mini-Tn10中断基因的部分序列,通过测序及同源性比对分析,确定中断基因为超氧化物歧化酶基因sodA2。 相似文献
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苏云金芽胞杆菌CT-43高产苏云金素,其内生质粒pBMB0558上virD4基因编码的VirD4蛋白与Ⅳ型分泌系统中结合底物的偶合蛋白(T4CPs)高度同源.本研究利用插入缺失突变方法,构建同源双交换载体,敲除CT-43中的virD4基因,得到1株突变株BMB1122.HPLC检测结果显示,突变株BMB1122发酵上清... 相似文献
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通过携带Mini-Tn10转座子的温度敏感性质粒载体pIC333构建了苏云金芽胞杆菌YBT-1518菌株的插入突变体库。从突变体库中筛选得到1株芽胞不能在萌发剂L-丙氨酸诱导下萌发的突变株(命名为MA1),进一步的试验表明该突变株菌株的芽胞在其他氨基酸L-苯丙氨酸、L-缬氨酸和L-亮氨酸以及糖类萌发剂葡萄糖、果糖和蔗糖的诱导下也都不能萌发,表明MA1很可能属于新型的芽胞萌发缺陷突变株。 相似文献
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植物激活蛋白Ap36在苏云金芽胞杆菌的表达及抗病作用 总被引：1，自引：0，他引：1
以含有植物激活蛋白(Activator protein)基因ap36的质粒pMYE为摸板，设计一对特异引物，通过PCR反应扩增出激活蛋白基因开放读码框序列，使用XbaI和SphI双切PCR产物，插入到用这两酶双切的pBMB982-304质粒slh motif的下游，构建重组表达质粒pBMB0588，转化苏云金芽胞杆菌无质粒突变株BMB171。结果表明，目标蛋白以融合蛋白的形式成功表达。为探讨表达植物激活蛋白的重组菌是否能够诱导植物获得抗性，用重组菌在28℃培养24小时发酵液原液处理番茄幼苗和土豆片。结果显示，发酵液处理90min后，番茄叶片过氧化物酶(POD)和脯氨酸含量较对照分别提高了57.14%和131.59%；4d后苯丙氨酸解氨酶(PAL)含量较对照也有所提高；经重组菌发酵液处理的马铃薯片，对马铃薯软腐病表现出很强的抗病性。 相似文献
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苏云金芽胞杆菌抗软腐病aiiA基因转花魔芋研究 总被引：3，自引：0，他引：3
采用农杆菌介导的遗传转化方法,将来自苏云金芽胞杆菌经密码子优化的人工合成酰基高丝氨酸环内酯酶aiiA基因导入花魔芋,以提高魔芋抗软腐病的能力.以花魔芋的茎为外植体,通过与含有植物双元表达载体pU1301的农杆菌EHA105共培养,将aiiA基因导入魔芋基因组.经过潮霉素两次筛选,得到9块独立的抗性愈伤组织,经分化,生根,移入温室盆栽成活的抗性再生苗34株.对不同抗性愈伤来源的T0代再生苗进行PCR检测得到的阳性植株比例为62.7%,斑点杂交进一步确认外源aiiA基因已成功地整合到魔芋基因组中.Western杂交显示,aiiA基因在魔芋植株中能正常表达,其最高表达量占魔芋叶片总可溶蛋白的0.02%～0.06%.酰基高丝氨酸环内酯酶活性检测表明转基因魔芋叶片的蛋白可以降解酰基高丝氨酸环内酯信号分子. 相似文献
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