戴瑞奶绵羊产奶性状的全基因组关联分析

旨在通过对奶绵羊产奶性状的全基因组关联分析（GWAS）,寻找和定位与奶绵羊产奶性状相关的遗传标记和功能基因。本研究以135只戴瑞奶绵羊为试验材料,基于全基因组重测序技术,通过SAMTOOLS进行单核苷酸多态性（SNP）检测,使用PLINK v1.90进行质控,利用GEMMA v 0.98.1的混合线性模型对质控结果进行奶绵羊产奶性状相关的全基因组关联分析。结果表明,有1个SNP与泌乳后90天日均产奶量在全基因组范围内显著相关,8个SNPs达到潜在显著关联,相关的候选基因包括TRNAQ-CUG-2、LOC114117240、ACADL、MYL1、CHD6、SLCO3A1;有2个SNPs与150天日均产奶量达潜在显著关联,相关的候选基因包括PRMT6、RNF180;有2个SNPs与泌乳周期达潜在显著关联,相关的候选基因包括PRMT6、TRNAW-CCA-68、TRNAS-GGA-61。进一步基因功能分析推测,ACADL、SLCO3A1可能是影响奶绵羊产奶性状的候选基因。本研究为奶绵羊产奶性状的分子机制解析提供了一定的基础,为我国奶绵羊新品种培育提供了一定的理论参考。     

蒙古马骨髓间充质干细胞的分离培养及多向分化潜能的研究

旨在探索一个高效分离和扩增蒙古马骨髓间充质干细胞的方法,并通过形态学和多向分化能力进行鉴定.抽取蒙古马骨髓标本,利用密度梯度离心和差异贴壁法分离MSCs,体外扩增后传代,进行相差显微镜形态学观察.在地塞米松、IBMX、胰岛素及罗格列酮的作用下向脂肪细胞诱导分化,以及在地塞米松、VitC、β-磷酸甘油等作用下向成骨细胞诱导分化.结果显示原代和传代细胞呈梭形成纤维细胞样外观,生长增殖能力良好.经定向诱导分化后,细胞分别呈现脂肪细胞、成骨细胞的表型特征.证明所纯化的细胞为尚未分化的基质细胞,而不是组织的成体细胞,它具有多向分化潜能.     

早期饲喂代乳粉对戴寒杂交一代羔羊生产性能及肉品质的影响

为评估早期饲喂代乳粉对羔羊生产性能的影响,对戴寒杂交一代羔羊生产性能及肉品质进行了研究。试验组(early weaned, EW)于7日龄断奶后饲喂代乳粉,对照组(ewe reared, ER)人工饲喂母乳,均自由采食开食料和羊草,于90日龄进行屠宰试验并测定其肉品质。结果显示：除50日龄外,两组的体重、体高等各项生长指标均无显著差异(P>0.05);在7～50日龄时EW组的平均日增重显著低于ER组(P<0.05);51～90日龄时EW组平均日增重显著高于ER组(P<0.05)。90日龄时屠宰指标显示,两组在屠宰后体重、胴体重等指标方面均无显著差异(P>0.05)。肉品质分析显示,水分、粗脂肪、维生素、矿物质和氨基酸等营养性质,pH_{1 h}值、肉色、失水率、蒸煮损失等食用品质及硬度、弹性、黏聚性、胶着度和咀嚼性等加工品质在两组间无显著差异(P>0.05);不饱和脂肪酸中,EW组的亚油酸和α-亚麻酸含量显著高于ER组(P<0.05);饱和脂肪酸中,肉豆蔻酸显著低于ER组(P<0.05),而硬脂酸、棕榈酸及其他脂肪酸含量在两组中...     

蒙古马脂肪来源间充质干细胞体外成脂和成骨诱导分化

取蒙古马背臀部皮下脂肪组织,通过Ⅰ型胶原酶消化、离心等步骤分离培养脂肪组织来源的间充质干细胞(Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADSCs),经过原代培养和传代培养,分别加入成脂诱导剂和成骨诱导剂培养,采用倒置显微镜观察诱导后的细胞形态变化,并通过油红O染色和茜...     

CRISPR-Cas9介导的蒙古牛MSTN基因敲除细胞系的建立

试验旨在利用CRISPR-Cas9技术对蒙古牛胎儿成纤维细胞肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因进行编辑,构建无标记的MSTN基因敲除的蒙古牛细胞系,为培育肌肉发达的蒙古牛提供试验材料。通过组织块贴壁法对妊娠45d的蒙古牛胎儿建立皮肤成纤维细胞系,同时在第2外显子区域选定1个gRNA靶位点,使用在线软件设计sgRNA序列,并选取评分较高的3个sgRNA,采用试剂盒法构建无标记的Cas9/gRNA载体,随后用T7E1酶酶切法对其进行活性验证,将有活性的载体用电转法转染蒙古牛胎儿成纤维细胞,通过无限稀释法和口吸管法将转染后的单细胞接种于96孔板扩繁后提取DNA,对其进行PCR扩增及测序验证来获取阳性细胞。本试验构建了3个无标记的CRISPR-Cas9载体,经验证1个有活性,对电转染后的单细胞进行筛选共获得96个单细胞株,测序分析后有1个单细胞株发生单碱基突变,使得MSTN基因不能编码正常的蛋白。试验成功建立了1个MSTN基因失活的细胞株,可作为后续体细胞核移植的供体细胞,用于生产无标记的敲除MSTN基因的蒙古牛,对培养产肉率高并具有生物安全性的蒙古牛具有重要的意义。     

CRISPR-Cas9介导的蒙古牛MSTN基因敲除细胞系的建立

试验旨在利用CRISPR-Cas9技术对蒙古牛胎儿成纤维细胞肌肉生长抑制素（myostatin,MSTN）基因进行编辑,构建无标记的MSTN基因敲除的蒙古牛细胞系,为培育肌肉发达的蒙古牛提供试验材料。通过组织块贴壁法对妊娠45 d的蒙古牛胎儿建立皮肤成纤维细胞系,同时在第2外显子区域选定1个gRNA靶位点,使用在线软件设计sgRNA序列,并选取评分较高的3个sgRNA,采用试剂盒法构建无标记的Cas9/gRNA载体,随后用T7E1酶酶切法对其进行活性验证,将有活性的载体用电转法转染蒙古牛胎儿成纤维细胞,通过无限稀释法和口吸管法将转染后的单细胞接种于96孔板扩繁后提取DNA,对其进行PCR扩增及测序验证来获取阳性细胞。本试验构建了3个无标记的CRISPR-Cas9载体,经验证1个有活性,对电转染后的单细胞进行筛选共获得96个单细胞株,测序分析后有1个单细胞株发生单碱基突变,使得MSTN基因不能编码正常的蛋白。试验成功建立了1个MSTN基因失活的细胞株,可作为后续体细胞核移植的供体细胞,用于生产无标记的敲除MSTN基因的蒙古牛,对培养产肉率高并具有生物安全性的蒙古牛具有重要的意义。     

绒山羊皮肤干细胞的初步分离及碱性磷酸酶鉴定

以0.02%胰酶4 ℃过夜消化,分离表皮,37 ℃消化30 min,打成单细胞悬液,经100 μg/mL Ⅳ型胶原处理的培养皿黏附10 min,除掉未黏附的细胞,加入培养基(80% DMEM-F12+20% FBS+氢化可的松(25 μg/mL)+青霉素(100 IU/mL)+链霉素(100 μg/mL)+胰岛素(15 μg/mL)+转铁蛋白+EGF(20 μg/mL))培养24 h,而后将此细胞消化接种到经20 μg/mL丝裂霉素C处理4 h的成年绒山羊成纤维细胞滋养层上,培养2 周后有各种形态的克隆状细胞集落出现,用碱性磷酸酶(AKP)染色呈深黑紫色,初步判断细胞呈阳性。本研究旨在分离绒山羊皮肤干细胞,为研究干细胞分化机制,探索绒毛发育机理,培育高产高质绒毛性状奠定分子育种理论基础。     

激光跟踪仪在农机制造行业的应用

采用传统的检测设备及方法，检验效率低，人工成本高，未解决该问题，提出在生产过程中使用激光跟踪仪对整机关键尺寸及工装夹具进行测量。激光跟踪测量是工业测量系统中一种高精度的测量仪器，它具有高精度、高效率、实时跟踪测量、安装快捷、操作简便等特点，能够满足农机产品在生产制造过程中大尺寸工件及工装夹具的测量需求。     

戴瑞奶绵羊血清中生殖激素含量与超排效果相关性研究

目前家畜超数排卵还存在个体差异大、整体效果不稳定的问题。本研究旨在探讨戴瑞奶绵羊血清中生殖激素与供体超排效果的相关性，以期为供体超排性能预测提供依据。本研究分别在超数排卵处理前与配种前采集外周血进行促卵泡生成素(Follicle-stimulating hormone, FSH)、促黄体生成素(Luteinizing hormone, LH)、雌二醇(Estradiol, E2)、孕酮(Progesterone, P4)、抗缪勒管激素(anti-Müllerian hormone, AMH)和抑制素(Inhibin, INH)激素浓度检测，与回收总胚数和可用胚数进行相关性分析。超数排卵前血液检测结果显示：FSH、E2、AMH(FSH: r=0.91, P<0.05; E2: r=0.76, P<0.05; AMH: r=0.86, P<0.05)与回收总胚数和可用胚数呈显著正相关；LH、P4、INH(LH: r=-0.81, P<0.01; P4: r=-0.79, P<0.05; INH: r=-0.56, P<0.05)与回收总胚数和可用胚数呈显著负相关。超数排卵后配种前血液检测结果显示：FSH、E2、P4、AMH(FSH: r=0.62, P<0.05; E2: r=0.93, P<0.05; P4: r=0.69, P<0.05; AMH: r=0.97, P<0.01)与回收总胚数和可用胚数呈显著正相关；LH、INH(LH: r=-0.86, P<0.01; INH: r=-0.60, P<0.05)与回收总数和可用胚数呈显著负相关。本研究结果表明：在超数排卵前戴瑞奶绵羊静脉血液中FSH、LH、E2、P4、AMH、INH这几种激素均与最终超排效果存在相关性。超数排卵前静脉血液中FSH、AMH激素浓度与总胚数和可用胚数拟合度最高，存在高度相关性，因此可作为戴瑞奶绵羊超排性能的检测指标。     

奶绵羊与奶牛乳成分与泌乳期血清代谢组比较分析

通过对绵羊奶与牛奶乳成分及泌乳期奶绵羊和奶牛血清代谢组进行分析，旨在探究两个物种乳成分差异及潜在调控机制。在分娩后第90天分别采集6只奶绵羊与奶牛奶样与血液样本，通过乳成分分析仪对两个物种进行乳常规成分分析，并通过非靶向代谢组学对血清代谢物进行比较分析。结果发现，绵羊奶中乳脂、蛋白质、酪蛋白、固形物和非乳脂固形物均显著高于牛奶（P＜0.05），乳糖无明显差异（P＞0.05）。对血清进行代谢谱分析，共检测到1 615种代谢物，对其中486种进行了注释，根据条件筛选鉴定出412种差异代谢物。对差异代谢物进行通路（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）富集分析，共富集到28条功能通路，正离子模式下18条，负离子模式下10条。在奶绵羊血清中存在许多代谢物与抗微生物、抗病毒或抗癌有关，例如芬那酸、瑞德南特和水杨酸。研究结果为揭示乳畜产奶性状和乳成分差异调控机制提供了一定的理论依据，为改良乳畜泌乳性能提供了参考。