新疆紫草遗传转化中的抗生素敏感性研究

以新疆紫草为材料,采用不同浓度梯度抗生素处理未转化和转化子叶的方法,研究了不同浓度的卡那霉素和头孢噻肟钠对新疆紫草子叶出愈和发根的影响.结果表明,卡那霉素对新疆紫草子叶的筛选适宜浓度为60 mg/L,头孢噻肟钠对新疆紫草子叶除菌适宜浓度为600～1 000 mg/L.抑菌继代周期为12 d.     

发根农杆菌转化新疆紫草的PCR检测及序列分析

以发根农杆菌MSU440菌株转化的新疆紫草毛状根为材料,设计了rolC基因的特异性引物,应用PCR技术,扩增得到了600 bp左右的特异性核苷酸片段。进行双向测序分析,扩增的基因序列全长626 bp,含rolC基因的编码区540 bp,编码180个氨基酸组成的蛋白。正向测序rolC基因与GENEBENK已发表的序列相比较,核苷酸序列的同源性达到100%,氨基酸同源性高达100%;反向测序中,同源性达到97%。证实并确认了新疆紫草毛状根的真实性,为进一步利用新疆紫草毛状根生产次生代谢产物研究奠定了物质基础。     

新疆紫草快繁技术研究

[目的]建立新疆紫草组培快繁技术体系.[方法]以新疆紫草无菌苗的茎尖为外植体,筛选适合茎尖萌发、增殖、生根的激素组合.[结果]茎尖最佳萌发培养基为MS+TDZ 1.0 mg/L,其萌发率为100;.芽增殖培养基为MS+TDZ 1.0 mg/L,芽增殖倍数为13.50倍,继代壮苗培养基为MS+NAA 0.3 mg/L +6-BA 0.5 mg/L,生根培养基为MS+NAA 0.1 mg/L,生根率为84;.降低6-BA浓度到0.05 mg/L可大幅降低玻璃化发生率.经过此培养基继代后,再在原生根配方中生根,生根率提高到95.32;.[结论]茎尖是新疆紫草快繁的最佳外植体.     

不同培养因子对新疆紫草种子根生长的影响

将新疆紫草无菌苗根分别接种在含不同培养因子的培养基中进行液体培养,观察培养基、pH值、有机物、L-苯丙氨酸对根的生长量、培养液颜色及OD值的影响.结果表明:①在SH培养基中,且pH为4.5时根相对生长率较M9大.②M9培养基附加30 g/L蔗糖有利于紫草根生长,蔗糖浓度为30～60 g/L促进紫草素合成.③在M9培养基上添加低浓度的CuCl2有利于根的生长.④在M9培养基上添加White有机成份及肌醇(200 mg/L)均对根的生长无促进作用.⑤M9添加L-苯丙氨酸对种子根的生长无明显促进作用.⑥根的生长周期为9～12 d.适宜根生长条件的摸索为新疆紫草毛状根及紫草素的生产条件的确定提供了依据.     

理化条件对新疆紫草毛状根培养及紫草素含量的影响

以发根农杆菌诱导的新疆紫草毛状根为试验材料,采用二阶段培养法,分别考察了NH4NO3、培养基、转速、温度、蔗糖对毛状根生长的影响及培养方式、酸水解酪蛋白对毛状根生产的影响。结果表明:毛状根在MS无铵液体培养基中生长速度较MS快了近1倍,第15天时毛状根的生长量达峰值,增殖8倍;在SH无铵培养基、转速为(120±5)r/min、温度为(25±1)℃时毛状根增殖倍数最大,为9.34倍。蔗糖质量浓度对毛状根的生长增殖影响不大;液体培养方式的紫草素及其衍生物含量(1.05%)远远高于固体培养(0.33%),是后者的3倍;添加0.5g/L的酸水解酪蛋白的其紫草素及衍生物含量为1.29%,较对照(1.17%)增加了10.3%。本研究为今后利用新疆紫草毛状根规模化生产提供了理论依据。