黑曲霉和里氏木霉原生质体形成与再生条件选择──Ⅱ．菌龄、酶配比及酶解温度和时间的选择

用正交试验比较了菌龄、酶种类及浓度配比、酶解温度和酶解时间４个主要因素，对黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ）ＡＭＳ１１和里氏木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉ）ＱＭ９４１４两菌株原生质体形成与再生的影响。结果表明，ＡＭＳ１１和ＱＭ９４１４两菌株原生质体形成与再生的４个因素的合理参数分别是：菌龄１４～１６小时和１８～２０小时；三种酶配比（纤维素酶：蜗牛酶：溶菌酶）（ｍｇ／ｍｌ）为（８：４：２）和（５：２．５：２．５）；酶解温度均为３２℃；酶解时间均为２～３小时。     

实时荧光定量PCR检测血液标本中光滑念珠菌方法的建立

目的 探索快速可靠检测血液标本中光滑念珠菌的新方法.方法 采用真菌26S rDNA D1/D2区序列作为引物,单独和同时扩增光滑念珠菌及白色念珠菌与光滑念珠菌混合物,对血液标本进行荧光定量检测.结果 本方法不仅能够稳定的扩增出光滑念珠菌26S rDNA序列,并且能准确区分出混合物中的白色念珠菌与光滑念珠菌.结论 应用26SrDNA D1/D2区序列的荧光定量PCR是快速、敏感和特异的检测光滑念珠菌方法.     

转基因植物中Bt Cry2Ab蛋白的抗原表位特征预测(英文)

[目的]通过生物信息学方法了解转基因作物中BtCry2Ab蛋白的二级结构、三级结构、B细胞抗原表位及T细胞抗原表位等结构特征,为今后的抗体设计奠定基础。[方法]以在NCBI数据库中获得Cry2Ab蛋白序列为材料,应用DNAStar中多种方法预测其B细胞表位,并通过在线预测软件NetMHCII2.2分析Cry2Ab蛋白与MHC-II类分子的结合能力从而预测其T细胞抗原表位。[结果]对Cry2Ab蛋白的B细胞抗原表位的预测表明,Cry2Ab蛋白的第208～215区域是潜在的B细胞抗原表位。对Cry2Ab蛋白与MHC-II类分子结合能力的分析表明,Cry2Ab蛋白的第177～185区域、299～307区域和255～263区域是潜在的T细胞抗原表位,暗示含有HLA-DRB10101和HLA-DRB10701等位基因的人群对Cry2Ab蛋白更敏感。[结论]该研究有助于深入了解Cry2Ab蛋白的生物学特征,为完善转基因食品过敏原性的评估方法提供新线索。     

大片段DNA提取和纯化的优化方案

[目的]研究大片段DNA提取和纯化的优化方案研究。[方法]在传统SDS提取法的基础上,对大片段DNA的提取和纯化过程进行了改进。[结果]建立了一种优化的DNA提取和纯化的方案,通过该方案能够得到片段大、纯度高的DNA。[结论]为今后大片段DNA的提取和纯化提供了参考。     

黑曲霉和里氏木霉原生质体形成与再生条件选择 Ⅱ.菌龄,酶…

用正交试验比较了菌龄、酶种类及浓度配比、酶解温度和酶解时间４个主要因素，对黑曲霉ＡＭＳ１１和里氏木霉ＱＭ９４１４两菌株原生质体形成与再生的影响。结果表明，ＡＭＳ１１和ＱＭ９４１４两菌株原生质体形成与再生的４个因素的合理参数分别是：菌龄１４～１６小时和１８～２０小时；三种酶配比（纤维素酶：蜗牛酶：溶菌酶）（ｍｇ／ｍｌ）为（８：４：２）和（５：２．５：２．５）；酶解温度均为３２℃；酶解时间均为２～３小     

苏云金芽孢杆菌Cry2Aa蛋白的体外表达及纯化

根据大肠杆菌密码子偏好性对苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)cry2Aa基因进行优化,并合成全长基因,将cry2Aa基因克隆到表达载体pET-44a上,转化到大肠杆菌Rosetta中进行诱导表达,优化表达条件,采用亲和层析和SDS-PAGE胶回收纯化,Western blot鉴定回收产物.结果表明,IPTG浓度为0.50 mmol/L、27℃诱导4h时Cry2Aa蛋白表达量最高,SDS-PAGE胶回收Cry2Aa纯化蛋白所得的产量高于亲和层析法.     

花生根瘤形态发生及其超微结构研究

以花生根瘤菌009和栽培花生(红花1号)为材料,利用石腊切片、超薄切片、免疫荧光抗体技术,研究花生根瘤形态发生、发育及其功能体(含菌细胞、类菌体)的超微结构特征。结果表明:在水培条件下,花生根瘤菌从侧生根处出现裂隙侵染。根瘤原基起源于次生根内皮层,次生根维管束与根瘤维管束起源于原生根中柱鞘上同一位点。成熟根瘤由根瘤皮层、根瘤维管束、含菌细胞区组成。根瘤为有限生长型。接种60天时乙炔还原活性达7750n mol。C_2H_4/hr/g(鲜)。菌体形态具有阶段性变化,营养体为杆状(0.5×1.3μm),随瘤龄增加逐渐变为球状体,至成熟根瘤全部为球状类菌体     

黑曲霉与里氏木霉原生质体形成和再生条件选择 Ⅰ.缓冲稳定剂系统及酶配比

黑曲霉(Aspergillus niger)AMS11和里氏木霉(Trichoderma reesei)QM9414两菌株原生质体形成的缓冲系统均以0.05 mol/L(pH5.8)柠檬酸缓冲溶液为好,渗透压稳定剂则分别以0.4 mol/L MgCl_2和0.6 mol/L NaCl为最佳。产量可达3.1×10~7个/ml。再生稳定荆均以0.6 mol/L蔗糖为最好,再生率可达40%以上。对两菌株形成和再生的3种酶较合适的配比组合(纤维素酶:蜗牛酶:溶茵酶)(mg/ml)分别是(5～10:2.5～5:2.0～2.5)和(3～8:1.5～4:1.5～2)。两者原生质体大小相当,约为5～10μm。其释放方式有顶端鱼贯而出和原位释放两种,再生方式则均以酵母出芽链状为主。     

鉴别苏云金芽孢杆菌生产菌株MZ1的溶原性噬菌体

苏云金芽孢杆菌（Bacillus thurillgicnsis，Bt）作为不污染环境而又高效的生物杀虫剂已广泛地应用。可是，在83％的Bt菌株中都能分离到相应的溶原性噬菌体，在发酵生产中由其引起的发酵倒罐率轻者为15％-30％，重者达到50％-80％，甚至会导致工业的破产，因此溶原性噬菌体已成为发酵工业的一大危害。本研究采用溶原性噬菌体的指示菌、直接电镜观察法和噬菌体DNA等综合进行检测，证明了该菌株属于溶原菌。此研究既能为生产上防治溶原性噬菌体提供理论依据，又能为后续阶段研究其溶原性爆发规律及其分子生物学准备了生物实验材料。