漆酶对酚类化合物生物催化氧化动力学研究——以儿茶酚和表儿茶素为模式底物

以白腐菌漆酶为试材,儿茶酚和表儿茶素为模式底物进行了酶促氧化反应动力学参数的测定。结果表明,以儿茶酚和表儿茶素为底物,漆酶催化氧化的产物最大吸收波长分别为388和408nm,作用最适pH值分别为5.5和5.75;最适反应温度均为55℃。漆酶对2种底物的催化氧化反应均符合米氏方程规律。在25℃反应条件下测得儿茶酚和表儿茶素2种底物的Km值分别为0.279和0.145mol/L;Vmax分别为0.114和1.139A/(U.min)。漆酶对表儿茶素的催化活性大大高于对儿茶酚的,作用于其混合物时需以儿茶酚的酶用量为准,即底物浓度0.5mol/L时加酶0.04U/mL。     

漆酶对苹果酚类物质的催化特性

【目的】研究白腐菌漆酶对苹果多酚类物质的催化特征,为开发新型具有生物活性的色素物质提供理论依据。【方法】采用单因素和正交组合试验确定白腐菌漆酶对苹果多酚酶促氧化的最佳条件,并对氧化产物的稳定性进行分析;然后对酚类氧化产物进行HPLC分析,初步确定产物组分,最后分析了苹果多酚及其氧化产物对.OH和DPPH.的清除作用。【结果】①漆酶对苹果多酚的最佳酶促氧化条件为:反应温度55℃,pH 5.5,苹果多酚质量浓度2.5 mg/mL,漆酶浓度3.5 U/mL。②氧化产物在363 nm处有最大吸收峰,对温度和光照不敏感,随着pH增大颜色加深。③HPLC分析表明,模式底物儿茶酚、表儿茶素、儿茶素分别能产生2,2,4种氧化产物。④抗氧化活性研究表明,质量浓度较高时,苹果多酚氧化产物对.OH和DPPH.的清除作用强于苹果多酚,且在一定质量浓度范围内呈现量效关系。在氧化产物质量浓度为500μg/mL时,对.OH的清除率最高,达85.42%;在氧化产物1 000μg/mL、反应时间为60 min时,对DPPH.的清除率最高,达94.32%。【结论】优化了漆酶催化苹果多酚氧化的工艺条件,苹果酚类物质经漆酶催化氧化后形成了新的可溶性、光热稳定性的有色产物,高质量浓度下产物的抗氧化活性较原提取物增强。