昆虫抗真菌肽Thanatin-CAD双价基因的合成、克隆及其表达

为促进昆虫抗菌肽基因在转基因抗病育种和生物工程制药的应用,通过设计嵌合引物结合分段PCR的方法将抗真菌肽Thanatin基因与Cecropin AD基因(CAD基因)融合拼接为Thanatin-CAD双价基因,采用T-A克隆法将其克隆至pGEM-T Easy载体,进行测序,结果证实与预期设计的完全一致;然后再将其亚克隆至表达载体pET-21d中,用IPTG诱导含重组表达质粒的菌株,对表达产物进行生物活性测定,初步结果显示Thanatin-CAD双价基因的融合表达产物对受试细菌无抑菌活性,但对部分病原真菌有较强的抑菌作用。     

三种幼虫外寄生蜂蛋白酶含量与离体培养饲料的关系

在离体培养幼虫外寄生蜂过程中，发现不同的蜂对饲料中的蛋白质及游离氨基酸的含量有不同的要求，本文对麦蛾茧蜂（Ｂ．ｈｅｂｅｔｏｒ），矛茧蜂（Ｏ．Ｐｌａｌｉａｔｕｓ），管氏肿腿蜂（Ｓ．ｇｕａｎｉ）的蛋白酶活性，饲料中蛋白质及游离氨基酸含量进行了测定．实验表明：蛋白酶含量低的蜂，饲料中含高游离氨基酸及低蛋白；蛋白酶含量高的蜂，饲料中含低游离氨基酸及高蛋白。     

寄主因素对白虫小茧蜂产卵的影响

在实验室观察了白虫小茧蜂的产卵行为,从化学及物理的角度探讨了寄主因素对白虫小茧蜂产卵的影响。这些寄主因素包括寻主利它素、寄主表皮的化学物质,显微结构和柔软性。实验表明:寄主表皮的柔软性是影响该小茧蜂产卵的关键因素。寻主利它素、寄主表皮的化学物质和结构均对产卵没有影响。     

黑腹果蝇抗真菌肽Drs及其同系物基因的原核表达与蛋白纯化研究

【目的】Drosomycin（Drs）是从黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)中鉴定发现的对丝状真菌有广谱抗性的抗真菌肽因子,此外，在黑腹果蝇基因组中，还存在另外6条Drs同系物的基因序列，对它们推导的氨基酸序列具有与Drs相同的保守位点和CSαβ模体结构。为鉴定Drs及其6个同系物的抗性功能差异，研究其分子结构与功能的关系，需要对这些同系物基因进行克隆表达，获得有生物学活性的纯化样品。【方法】本文采用PCR分段互补合成的方法准确地获得了Drs同系物基因，并克隆至pET-3C载体上，转化到宿主菌E.coli Origami（DE3）中进行诱导表达，表达产物经阳离子CM SepharoseTM Fast Flow层析、凝胶过滤Sephacryl S-100 High Resolution层析和包涵体的复性及Sephadex G-25脱盐等纯化处理后，进行抑菌活性检测。【结果】经纯化的7个Drs同系物的短肽样品，除Drs-lI外，其它的Drs同系物样品对供试真菌水稻立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)均有较强的抑制作用。【结论】表明本研究中使用的纯化及复性方法对具有多个二硫键的小分子多肽是比较有效的。     

黑腹果蝇抗真菌肽基因Drs和Drs-lC在原核中的表达及抗菌活性的初步测定

对黑腹果蝇(Drosophila m elanogaster)抗真菌肽基因Drs和它的同系物基因Drs-lC在pET-21d载体中与T7.Tag标签序列进行了融合表达,并对融合表达产物进行Xa因子切割前后的抗菌活性测定。首先通过长引物PCR获得5′端带有Xa因子识别切割序列的Drs和Drs-lC,分别克隆至pET-21d表达载体上,然后转化E.coliO rigam i(DE3),筛选得到阳性克隆。以IPTG诱导目的基因与载体上的T7.Tag标签序列融合表达,将表达产物进行初步纯化后,以Xa因子进行切割处理,然后测定处理前后样品的抗菌活性。结果显示与T7.Tag标签序列融合表达的D rs、D rs-lC样品和经Xa因子切割后的样品对供试真菌黄色镰刀菌(Fusarium culm orum)、尖孢镰孢菌(Fusarium oxs-porum)和粗糙脉孢菌(Neuropora crassa)均有明显的抑制作用。     

昆虫抗真菌肽Thanatin基因的合成及原核表达

斑腹刺益蝽 (Podisusmaculiventris)抗真菌肽Thanatin是目前发现的 6种昆虫抗真菌肽之一 ,对真菌具有广谱的免疫诱导杀菌活性 ,由 2 1个氨基酸残基组成 ,对革兰氏阳性和阴性细菌也有一定的杀菌作用。根据已报道的抗真菌肽Thanatin基因的氨基酸序列 ,推导出cDNA序列 ,采用基因片段合成结合PCR扩增的策略 ,获得大量完整的Thanatin基因片段 ,通过T A克隆法克隆至pGEM TEasy载体 ,进行测序 ,结果证实合成的Thanatin基因与预期设计的完全一致。然后将其亚克隆至表达载体pET 2 1d中。经IPTG诱导表达后 ,采用RNA DNA点杂交和RT PCR检测具Thanatin基因插段的RNA转录表达活性 ,初步结果显示该融合表达产物对烟曲霉菌 (Aspergillusfumigatus)和绿色木霉菌 (Trichodermariricle) 2种病原真菌均有一定的抑菌效果     

白虫茧蜂寻主利它素的分离纯化

本研究对白虫茧蜂的寻主利它素粗提物进行了薄层层析、纸层层析的初步分离,结果纸层层析的分离效果较好,得到一个活性斑点,Rf 为0.85,进一步对活性斑进行 HPLC 的分离及馏分收集,得到若干馏分,通过实验室生物测定,证明其中有活性的馏分只有一个。     

果蝇Drosomycin基因(drs)的克隆鉴定

为了克隆Drosomycin基因用于今后定点诱变修饰和生物技术开发研究 ,根据果蝇Drosomycin基因 (drs)的cDNA序列 ,分别设计Drosomycin基因含和不含信号肽序列的两对特异引物Drs1/Drs2、Dro3/Dro4 ,由黑腹果蝇(DrosophilamelanogasterMeigen)基因组PCR扩增获得目的片段drs和dro ,克隆到表达载体pET 2 1d(+)和pHIL S1之中。经测序表明 ,克隆的drs与文献报道的drs序列仅在 +116位点有 1个碱基的差异 (A/T) ,而克隆的dro序列则与文献报道的dro序列完全相同。     

粗鞘双条杉天牛交配行为生物学及雌性识别信息素研究

本研究从交配行为生物学观察入手,探讨粗鞘双条杉天牛(Semanotus bifasciatus sinoau-sfer Gressitt)性信息联系的方式。通过嗅觉仪和诱纸的测定,证实了粗鞘双条杉天牛在性信息联系上只存在着接触性的雌性识别信息素,其遍布雌体体壁;雄虫感受这种物质时下颚须起着重要作用,雄虫下颚须末端陷沟内存在着特殊感受器。雌体及雄体正己烷粗提物的高压液相色谱分离结果表明,雌体粗提物除了具有与雄体粗提物相同的四个组分外,还比雄体粗提物多出两个组分,这可能就是雌性识别信息素的成分。