3D模型在线虫学教学中的应用

线虫标本观察是帮助学生掌握线虫形态的一个重要教学环节,但标本的保存和观察方法存在着一定的局限性。为解决该问题,在线虫学教学中引入线虫3D模型,3D模型可由学生在电脑上自由操作,通过鼠标拉动3D图像可从任意视角全方位浏览线虫,而且3D模型还可打印出来,真实感强,可长期保存。利用3D模型进行线虫学教学增强了线虫形态学教学的趣味性与直观性,是一种新的教学方法。     

爪哇根结线虫Mj-1-1基因的克隆、鉴定及RNAi表型分析

根据爪哇根结线虫食道腺内表达的EST序列,结合反式剪接序列SL1,从爪哇根结线虫中克隆了一个假定寄生基因Mj-1-1(KU358725),该基因的c DNA全长为573 bp,包含450 bp的开放阅读框(ORF),编码149个氨基酸。DNA全长为740 bp,包含2个内含子,长度分别为20 bp和111 bp。NCBI BLASTn比对表明,Mj-1-1与南方根结线虫的M.incognita zk1236.5(JQ284068)基因相似性最高,为97%。原位杂交表明Mj-1-1基因在爪哇根结线虫的背食道腺中表达,qRT-PCR结果表明Mj-1-1基因在爪哇根结线虫寄生性3龄幼虫阶段表达量最高。对爪哇根结线虫侵染前2龄幼虫的Mj-1-1基因进行沉默,调查发现,沉默Mj-1-1后,爪哇根结线虫对番茄的侵染力显著下降,表明Mj-1-1对爪哇根结线虫侵染和寄生具有重要的调控作用。     

番茄品种Mi基因对根结线虫抗性的检测

采用酶切扩增多态性序列(Cleaved amplified polymorphic sequences,CAPS)方法对国内市场上的26个番茄Solanum lycopersicum品种进行Mi基因检测.结果表明,特璐丝、红丽、TRS-401、仙客1号和仙客5号5个品种含有纯合体Mi基因,其余品种均不含Mi基因.进一步用南方根结线虫Meloidogyne incognita和象耳豆根结线虫M.enterolobii对这26个品种进行接种试验,计算根结率和根结指数.结果发现,南方根结线虫和象耳豆根结线虫侵染不含Mi基因的21个番茄品种的根结率为100%,根结指数为100;而含Mi基因的5个番茄品种对南方根结线虫的根结率为1%~5%,根结指数为0~4,而对象耳豆根结线虫的根结率为26.7%~45.6%,根结指数为56~64.表明含Mi基因的番茄高抗南方根结线虫,但对象耳豆根结线虫感病或比较感病.     

温度和初始种群密度对象耳豆根结线虫侵染番茄的影响

通过室内接种方法,研究了不同温度和接种密度对象耳豆根结线虫侵染番茄能力的影响。研究结果表明,28~30 ℃是象耳豆根结线虫侵染番茄的最适温度。随着温度的下降,其侵染能力明显降低。当象耳豆根结线虫2龄幼虫接种密度大于10条/100 cm3土壤时,番茄的生长会受到显著的抑制,随着线虫接种密度的增加,根结指数显著增加、线虫对番茄的危害也逐渐加重。研究结果将为广东省蔬菜产区制定象耳豆根结线虫防治指标提供理论依据。     

环介导等温扩增法（LAMP）检测最短尾短体线虫

为了快速、简便、准确地检测重要植物病原线虫—最短尾短体线虫（ Pratylenchus brachyurus ），依据GenBank中短体线虫的线粒体DNA细胞色素氧化酶I（mtDNA COI）序列，设计了扩增最短尾短体线虫的环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）引物，并对LAMP反应条件进行优化，成功建立了一种可特异、快速检测最短尾短体线虫的LAMP体系。该体系在64℃下反应60 min，扩增效率最高。用琼脂糖凝胶电泳、酶切分析和SYBR Green I染色均能特异检测到最短尾短体线虫的扩增产物。所建立的LAMP体系能从供试的9种短体线虫和另外10种植物线虫中特异检测出最短尾短体线虫，其灵敏度可检测到1/200条线虫DNA，是常规PCR的10倍。表明本研究建立的最短尾短体线虫的LAMP检测体系，可用于最短尾短体线虫的快速检测。