呋喃它酮代谢物人工抗原的合成及抗体的制备

【目的】建立高灵敏度的呋喃它酮酶联免疫检测方法.【方法】以戊二醛法将呋喃它酮代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ)与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联,再由NaBH4还原西佛碱得到结构稳定的免疫原AMOZ-BSA和AMOZ-OVA;用对醛基苯甲酸(CPA)对AMOZ进行衍生化,得到衍生物CPAMOZ,由质谱鉴定,经N-羟基琥珀酰亚胺活化酯法将CPAMOZ与BSA和OVA偶联得到免疫原CPAMOZ-BSA和包被原CPAMOZ-OVA.经紫外扫描鉴定表明人工抗原合成成功.免疫Balb/c小鼠,ic-ELISA方法测定鼠血清多克隆抗体对AMOZ和NPAMOZ的特异性.【结果和结论】结果显示CPAMOZ-BSA免疫制备的抗体对NPAMOZ有良好的特异性.抗体效价为1∶32×104,对NPAMOZ的半抑制质量浓度为4.53 ng·mL-1;抗血清与CPAMOZ、AMOZ及呋喃它酮的交叉反应率为78.6%、1.5%及4.6%;与其他3种硝基呋喃类原药及其代谢物对硝基苯甲醛、对醛基苯甲酸等结构相似物的交叉反应均小于0.01%.     

牛奶和牛血浆中头孢喹肟HPLC-MS/MS检测方法的建立

建立了头孢喹肟在牛奶和牛血浆中的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测方法。牛奶样品用10%三氯乙酸沉淀蛋白,两次提取后过Strata-X-C固相萃取柱,30%乙腈洗脱后供HPLC-MS/MS检测。血浆样品用乙腈沉淀蛋白,高速离心后吸取0.2 mL上清液,与0.8 mL水混合后直接检测。以0.1%甲酸水-乙腈为流动相梯度洗脱,流速0.25 mL/min,进样量5!L。头孢喹肟在牛奶中的回收率在76.70%～87.02%之间,定量限为5 ng/mL。牛血浆中的回收率在89.41%～98.25%之间,定量限为2 ng/mL。结果表明,该方法简单快速、灵敏度高,适用于头孢喹肟在奶牛乳和血浆中的残留检测。