抗凋亡融合蛋白PTD-Bcl-xL原核表达载体的构建及表达纯化

人工抗凋亡蛋白PTD-Bcl-x L能保护多种因素引起的细胞异常凋亡,为了获得高纯度Bcl-x L与PTD(Protein transduction domains)的融合蛋白,首先采用TRIzol法提取SD大鼠肝脏总RNA,将RNA反转录为c DNA,设计引物以c DNA为模板,PCR扩增Bcl-x L基因,构建p UM19-T-Bcl-x L质粒,并对质粒双酶切鉴定和测序鉴定;其次设计包含PTD序列的Bcl-x L引物,以测序正确的p UM19-T-Bcl-x L质粒为模板,PCR扩增PTD-Bcl-x L序列,将扩增序列克隆入p ET28a载体,构建PTD-Bcl-x L蛋白的原核表达质粒p ET28a-PTD-Bcl-x L,并对p ET28a-PTD-Bcl-x L载体双酶切鉴定和测序鉴定;将p ET28a-PTD-Bcl-x L重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,并对IPTG诱导融合蛋白表达的浓度和诱导时间进行了优化;SDS-PAGE分析表达蛋白的可溶性情况,在变性条件下用Ni-NTA琼脂纯化融合蛋白;最后用SDS-PAGE、Western Blot及质谱对融合蛋白进行鉴定。结果表明:双酶切p UM19-T-Bcl-x L质粒出现约774 bp大小条带,p UM19-T-Bcl-x L质粒测序结果与NCBI数据库比对序列一致,表明成功构建p UM19-T-Bcl-x L质粒;双酶切p ET28a-PTD-Bcl-x L质粒出现约744 bp大小条带,p ET28a-PTD-Bcl-x L质粒测序结果与预期序列一致,表明成功构建了p ET28a-PTD-Bcl-x L原核表达载体;在IPTG诱导下p ET28a-Bcl-x L重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出36 k Da大小蛋白,最优IPTG诱导浓度为0.1 mmol/L,最佳IPTG诱导时间为6 h;SDS-PAGE电泳显示融合蛋白主要出现在菌液超声后的沉淀里,以包涵体形式表达,经Ni-NTA琼脂纯化获得了高纯度的融合蛋白;Western Blot和质谱鉴定证明IPTG诱导表达蛋白和纯化的融合蛋白为PTD-Bcl-x L蛋白。纯化得到了PTD-Bc L-x L融合蛋白,推进了PTD-Bcl-x L蛋白在猪、牛等家畜精液冷冻保存的应用进程。     

毒死蜱对桔小实蝇体内代谢酶的影响

为了解毒死蜱对桔小实蝇体内代谢酶的影响，采用不同浓度的毒死蜱对桔小实蝇敏感种群进行连续处理，测定其体内的羧酸酯酶（CarE）、谷胱甘肽S-转移酶（GSTs）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）的活性。结果表明：随着毒死蜱浓度的增加，桔小实蝇的敏感性出现逐渐下降的趋势，体内的CarE活性得到显著提升（F=43.21，p=0.024），抗性倍数为1.74，GSTs活性也显著上升（F=47.73，p=0.018），抗性倍数为1.98，但对CAT、POD的提升作用较小，表明毒死蜱对桔小实蝇体内的CarE、GSTs活力具有一定的诱导作用。     

GnIH对雄性SD大鼠肝脏脂代谢的影响及机制研究

为探讨促性腺激素抑制激素(GnIH)对雄性SD大鼠肝脏脂代谢的影响,以不同浓度的GnIH(0、1和10μg/100μL,总体积200μL,溶解于生理盐水中)早晚2次定点给SD大鼠腹腔注射。持续注射6周后,观察记录GnIH对雄性SD大鼠的表观影响,并进一步检测血液生化指标、肝脏脂代谢相关蛋白表达以及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路的影响。结果表明：与对照组相比,腹腔注射不同浓度的GnIH均可导致雄性SD大鼠采食量显著增多(P<0.05),平均日增重显著加快(P<0.05),Lee指数显著增加(P<0.05),血液中甘油三酯浓度显著升高(P<0.05),而高密度脂蛋白极显著下降(P<0.01)。进一步研究发现,腹腔注射不同浓度的GnIH均可使肝脏中脂肪酸合成酶(FASN)蛋白表达显著升高(P<0.05),而激素敏感脂肪酶(HSL)蛋白表达显著降低(P<0.05),脂联素(ADPN)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)蛋白表达均极显著降低(P<0.01),CAAT区/增强子结合蛋白(C/EBP)表达极显著升高(P<0.01)...     

水稻新品种辽河5号选育技术报告

辽河5号是从以生态不育系AB005为母本的杂种群体高代系(盐丰47的前身)分离的变异株中选出的水稻新品种。历经9 a完成全部育种程序,2007年通过辽宁省农作物品种审定委员会审定。该品种生育期158 d,在辽宁属中晚熟品种。糙米率82.6%,整精米率67.2%,垩白度3.4%,胶稠度86 mm,达到国标二等食用米标准。省区域2 a平均产量645.97 kg/667 m2,比对照辽粳294增产12.61%。该品种有很大的丰产潜力,适宜在沈阳以南稻区推广种植。     

河蟹幼蟹高产养殖技术研究初报

<正> 为了探索“中华绒螯蟹”池塘高产养殖技术,促进河蟹人工养殖业的快速发展,我所于1990年6月21日至9月20日开展了幼蟹高产养殖技术试验,在1.0亩池塘取得了总产68kg幼蟹的初步成效。试验采取小区不同放养密度单因子三次重复试验和生产性试验,以水草、水葫芦为附着物,新鲜鱼肉糜和豆饼为主要饲料。着重     

多变量预测控制在水培营养液控制系统中的应用

针对水培系统的特点,分析了水培营养液控制过程中的各种影响因素,利用多变量系统能处理变量之间强耦合作用以及预测控制对模型要求不高的特点,将多变量预测控制应用于水培营养液控制系统中,有效地解决了营养液的控制问题,并且在工厂化的水培种植系统中得以应用。     

球孢白僵菌对榕母管蓟马成虫和若虫的毒力

为探索球孢白僵菌Beauveria bassiana Bb 080717菌株对榕母管蓟马Gynaikothrips ficorum的毒力效果,进行了该菌对榕母管蓟马成虫和若虫的室内毒力测定.结果表明:接种后8d,该菌株4.5×108孢子/mL浓度对榕母管蓟马成虫的累计死亡率是86.77％,致死中浓度(LC50)是2.268 6×105孢子/mL,最短致死中时间是4.37 d;对若虫的累计死亡率是84.35％,致死中浓度(LC50)是2.468 4×105孢子/mL,致死中时间是4.53 d.说明球孢白僵菌Bb 080717菌株对榕母管蓟马具有很高的毒性,有良好的应用前景.     

球孢白僵菌对瓜实蝇的毒力研究

应用球孢白僵菌‘MZ041016’菌株对瓜实蝇幼虫、蛹和幼虫进行毒力测定.结果表明:幼虫、蛹和成虫的最高死亡率分别为(92.68士4.55)％、(82.97士2.75)％和(94.16士1.52)％;幼虫、蛹和成虫的致死中浓度(LC50)分别为(2.178士0.375)×105、(2.884±0.527)×105和(2.269±0.352)×105个/mL;致死中时间(LT50)分别为(4.238±0.259)、(4.518±0.365)和(3.853±0.263)d.     

农药污染及其修复技术研究进展

农药污染日益严峻,而农药污染修复技术的研究发展是解决其污染问题的重要手段,本文综述了物理修复、化学修复及生物修复的研究进展,阐述各方法存在的优缺点,对将来农药污染的生物修复和联合修复进行了展望.