甜樱桃花芽不同发育时期内参基因的筛选与验证

为了筛选甜樱桃花芽不同发育时期均稳定表达的内参基因,以甜樱桃桑提娜和黔樱一号不同发育时期花芽为材料,通过qRT-PCR技术检测28S rRNA、EF1-a1、EF1-a2、UBC、RPL13、18S rRNA、RSP3、CYP40、ACT2和α-TUB3等10个常用看家基因的表达水平,并利用GeNorm、NormFinder和BestKeeper综合评价其表达稳定性。结果表明,EF-1a2和RSP3在所有样品中稳定性最好。分别以EF-1a2、RSP3及EF-1a2+RSP3作为内参基因检测不同发育时期花芽生长素运输载体AUX1基因及生长素响应因子ARF基因的表达模式,该2个基因在不同内参基因标定下表达模式相同。表明EF-1a2、RSP3及EF-1a2+RSP3可作为甜樱桃花芽不同发育时期的内参基因。     

红枫湖樱桃花粉超低温保存探究

探讨了红枫湖樱桃花粉的长期保存条件。结果显示,室温下干燥3 h的花粉-196℃保存萌芽率最高(85.71%),随后急剧下降,12 h时仅54.65%。而-196、-80、-20℃下保存时,4℃下干燥时间延长并未导致萌发率急剧下降,均在85%左右。-80℃及-20℃保存过程中将花粉取出进行干燥会引起萌发率急剧下降,-20℃下每周干燥6 h,4周后萌发率仅52.06%。活力检测采用离体萌发法和授粉法,-80℃及-20℃保存1年后的花粉授粉坐果率与新鲜花粉无显著差异。     

冷驯化草莓组培苗DNA甲基化水平及模式的变化

DNA甲基化是植物表观遗传的重要方式之一,非生物胁迫会引起植物DNA甲基化水平及模式的改变。为探讨草莓的低温响应与DNA甲基化的关系,本文以章姬组培苗为材料,利用甲基化敏感多态性技术(MSAP)检测冷驯化(4℃)不同时间及恢复后的植株DNA甲基化水平及模式变化。结果表明,14对选择性引物在冷驯化过程中共检测出2499个基因位点;冷驯化过程中,DNA总甲基化水平整体呈下降趋势,0 d、1 d、3 d、5 d、7 d和10 d,基因组MSAP比率分别为27.17%、20.73%、25.77%、22.69%、22.69%和22.41%,恢复5 d后MSAP比率上升为26.05%;在DNA甲基化模式变化方面,有甲基化和去甲基化现象发生,且以去甲基化现象为主。回收、克隆并测序某些草莓基因组的甲基化修饰位点,分离得到5条存在甲基化修饰的基因组DNA序列。BLAST比对分析表明,在这些序列中都存在明显的"CCGG"二核苷酸成簇富集现象,与MSAP结果一致。     

‘玛瑙红’樱桃胚败育观察及胚抢救技术体系的建立

【目的】建立高效稳定的‘玛瑙红’樱桃胚抢救成苗技术。【方法】以‘玛瑙红’樱桃幼胚为材料,对不同发育时期的种胚进行解剖学观察和萌发实验,确定种胚败育时期和最佳胚抢救时间,设置不同植物生长调节剂配比研究其对种胚萌发及幼苗增殖的影响,确定最佳培养基配方。【结果】幼胚大规模败育发生在盛花期后30 d,最佳胚抢救时间为盛花期后25 d。胚萌发最佳培养基为MS+0.5 mg·L~(-1)TDZ+0.5 mg·L~(-1)6-BA+1.0 mg·L~(-1)IBA,萌发率达70%。幼苗增殖最佳培养基为MS+0.5 mg·L~(-1)TDZ+0.1 mg·L~(-1)6-BA+1.5 mg·L~(-1)IBA+0.5 mg·L~(-1)GA_3,增殖系数为5.45。幼苗经诱导生根后移栽至营养土中,成活率达90%。【结论】建立了‘玛瑙红’樱桃胚抢救技术体系,为‘玛瑙红’樱桃及其他核果类果树有效利用胚抢救技术解决杂交育种问题提供参考。     

贵州樱桃种质资源遗传多样性的分子评价

为贵州樱桃种质资源的进一步开发利用提供参考,采用RAPD标记,对35份贵州地方樱桃(Prunus pseudocerasuL.)种质资源的遗传多样性进行了分子评价.结果表明,从94条RAPD引物中筛选出30条稳定性强、谱带清晰及多态性丰富的引物进行PCR扩增,共获得298个标记,其中多态性标记为255个,多态性比例为8...     

中国樱桃体细胞胚的诱导

探讨了基因型、发育期和植物生长调节剂对中国樱桃(Prunus pseudocerasu L.)体细胞胚诱导的影响.结果表明,长5mm左右的未成熟种子胚性愈伤组织诱导率较高；细胞分裂素/GA接近1,甚至无细胞分裂素时易于诱导胚性愈伤组织;生长素中NAA更适合胚性愈伤组织诱导.     

11种兰属植物DNA的提取及RAPD-PCR实验体系的建立与优化

采用改进的CTAB-DNA提取方法，从11种兰属植物的嫩叶中提取总DNA。所得的DNA样品的A260／A280值在1．7～1．9之间，琼脂糖凝胶上主带清晰，较少降解，样品纯度高，DNA量大。另外，对影响RAPD-PCR的Mg^2＋、dNTPs、Taq酶、引物浓度等因素进行了优化。确定优化的反应体系为：75ng模板DNA，1×Buffer，2．5mmol／LMg^2＋，0．15mmol／LdNTPs，0．75UTaq酶，引物浓度0．4μmol／L，反应总体积为25山。该体系在20个供试兰属实验材料中获得较好的扩增结果。     

不同基因型刺梨及其近缘种亲缘关系的RAPD分析*

采用RAPD标记，对刺梨(Rosa roxburghii Tratt)7个基因型及8个近缘种(类型)进行鉴定和亲缘关系分析。结果表明，筛选出的16个随机引物可扩增出137条480bp到3.3kb大小的清晰。DNA片段，其中95条为多态性片段，为总数的69．3％；每个引物平均产生8．6条。由OPB-11、OPAF-16和OPW-02扩增的14条特异DNA片段，可有效地将普通刺梨7个基因型和无籽刺梨区分开来。基于遗传距离矩阵，采用IJPGMA法对15个供试样品的亲缘关系进行了聚类分析，文中还就无籽刺梨及重瓣刺梨的可能来源进行了探讨。     

利用SSR标记分析柑橘雄性不育及低育资源的遗传多样性

采用SSR标记分析了43份柑橘(Citrus)不育、低育、含不育胞质及13份可育材料的遗传多样性。结果表明,8对SSR引物扩增得到35个等位基因,平均每个位点有4.4个等位基因。利用NTSYSpc2.10统计分析软件,UPGMA法聚类分析表明,56份柑橘资源可分为3组。宽皮柑橘类品种为第一组,甜橙、葡萄柚、椪柑及杂柑类品种为第二组,包含不育胞质的澳洲指橘为第三组。SSR聚类分析还表明本地广橘与温州蜜柑有着紧密的亲缘关系,而与早橘、槾橘、本地早等的亲缘关系较远?涕?不育与低育资源的遗传多样性分析将为此类资源的收集保存及应用提供依据。