广东省猪圆环病毒2型感染的血清学调查

为了解广东省猪群中猪圆环病毒2型(PCV-2)的感染情况,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对广东部分地区的764份不同年龄段的猪血清进行PCV-2抗体检测,对PCV-2与猪猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)混合感染情况做了进一步调查.结果表明,PCV-2抗体检测平均阳性率为61.91％(47...     

猪圆环病毒2型CC株ORF3基因序列分析及真核表达

根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV2)的核酸序列,设计了1对引物,采用PCR方法从疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的死亡仔猪病料中扩增出了ORF3基因,将其克隆到高效真核表达载体pEGFP- N2中,筛选出含有ORF3基因的重组质粒,命名为pEGFP-N2-ORF3.对此重组质粒进行测序分析,结果表明,克隆的ORF3基因与其他PCV2的ORF3核苷酸序列相似性为96.2％-99.0％,氨基酸序列同源性为90.5 ％～98.1％.将重组质粒纯化后转染COS-7细胞,用PCR方法扩增出了特征性的基因片段,并采用特异性单抗进行间接免疫荧光,结果转染pEGFP- N2-ORF3重组蛋白在细胞核和细胞浆中均有表达,尤其在细胞核中表达量较高,且对细胞有一定的毒性.本研究为进一步探讨ORF3的结构和功能提供理论依据.     

广东省猪圆环病毒2型全基因组序列的比较和分析

参考GenBank发表的猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)全基因组序列,设计引物,通过PCR技术,从广东地区疑似"高热病"病猪的组织中,扩增17株PCV2流行株的全基因,并进行了序列测定分析.结果表明,17个PCV2分离株基因组全长为l 767或l 768bp.相似性比较发现...     

2株鸭甲肝病毒的分离及其全基因组序列分析

为深入研究鸭甲肝病(DHAV),本研究通过RT-PCR方法和血清中和法分离鉴定得到两株DHAV(命名为A株和H株).采用RT-PCR方法分段克隆这两个分离株的全基因组序列.分析结果显示,A株的基因组全长为7 647nt(不合polyA序列),5＇和3＇非编码区长度分别为583nt和314nt,单一ORF为6 759 nt,编码2 253个氨基酸;H株的基因组全长为7 648 nt(不含polyA序列),5＇和3＇非编码区长度分别为482 nt和314 nt,单一开ORF为6 852 nt,编码2 284个氨基酸.A和H分离株与DHAV-1参考株比较,其核苷酸同源性分别为93.4％～97％和92.7％～95.8％.遗传进化分析表明,DHAV-1型主要分为两个亚群,这两个病毒分离株分别属于不同的亚群.     

猪圆环病毒2型CC株ORF3基因的克隆与原核表达

为原核表达猪圆环病毒2型(PCV2)的ORF3编码蛋白,本研究采用PCR方法以PCV2的CC株的基因组DNA为模板扩增ORF3基因,将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠杆菌BL21 (DE3),经IPTG诱导表达.SDS-PAGE结果显示,表达的重组蛋白约为31ku,并且以包涵体形式存在;western blot分析表明,ORF3重组蛋白能够与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性反应,表明原核表达的ORF3重组蛋白具有良好的反应原性.     

猪源戊型肝炎病毒ORF2部分基因的原核表达及其鉴定

本试验旨在表达猪源戊型肝炎病毒(sHEV)ORF2部分基因片段,纯化表达产物并进行抗原性分析。以sHEV的cDNA为模板,PCR扩增ORF2基因片段,构建重组质粒pET32a-dORF2,转化表达菌BL21,IPTG诱导,SDS-PAGE凝胶电泳和Western blotting进行检测。试验结果表明,获得60 ku的目的蛋白,该蛋白具有良好的抗原性,主要以可溶性形式存在。