中国5个牛种leptin基因外显子3的多态性分析

利用改进的DNA提取方法和PCR-RFLP技术,对南阳牛、秦川牛、西镇牛、鲁西牛(地方黄牛品种)和荷斯坦奶牛等5个牛品种的263头个体lep tin基因外显子3多态性进行了分析。结果表明,牛lep tin基因外显子3长度为330 bp,存在H aeⅢ和Ap aⅠ限制性内切酶的酶切位点,但在这2个酶切位点上无多态性,2种酶酶切片段长度均为70 bp和260 bp。说明牛lep tin基因外显子3在H aeⅢ和Ap aⅠ2个酶切位点上具有保守性。     

安徽省驷马山引江灌溉工程水价制度研究

结合该工程的实际情况 ,在全面分析工程现行水价制度存在的主要问题的基础上 ,扼要讨论了工程的理论水价计算 ,对驷马山引江工程水价征收办法进行了较深入的研究。     

南阳牛HCRTR1基因编码区单核苷酸多态性分析

 【目的】研究南阳牛HCRTR1基因编码区单核苷酸多态性，为利用遗传标记进行肉牛选育奠定基础。【方法】以122头南阳牛为试验动物，利用PCR-SSCP及测序方法研究了HCRTR1基因全部编码区序列的多态性，并对发现的SNP位点进行了遗传特性及单倍型分析。【结果】在该基因的编码区首次发现11个SNP位点，分别为G322A、G384C、T420C、C423T、T481A、C510A、T627C、C631T、G690A、G714A和C736T，其中在322、481、631和736bp处的突变都导致了氨基酸的改变，而其余7处均为同义突变。在322、510和736 bp处的SNP表现为中度多态，PIC分别为0.3731、0.3190和0.2851，其余8处的SNP位点均呈现低度多态。对多态位点进行单倍型分析，发现在南阳牛122个个体中共检测到29种单倍型, 其中有2种单倍型的频率超过了10%；7种单倍型的频率小于1%；其余20种单倍型的频率均在1%～10%。【结论】本研究测定了南阳牛122个个体的HCRTR1基因的多态性，在全部编码区检测到11个多态性单核酸变异，构成了29种单倍型。     

中国4个牛品种LHX4基因的多态性及遗传效应研究

利用PCR-SSCP和DNA测序技术,对秦川牛、南阳牛、郏县红牛和中国荷斯坦牛（共计817个个体）的LHX4基因外显子5及其两侧部分内含子序列进行多态性分析,并结合南阳牛的生长指标,分析不同基因型的遗传效应。新发现3处单核苷酸突变位点,分别是NW₀01493443:g.42757G>A、NW₀01493443:g.42768A>G和NW₀01493443:g.42917T>C,并因此形成AA、AB和BB 3种基因型。4个牛群体中,AA基因型的频率分别为0.766 2、0.771 70、.723 4和0.891 3。群体间的χ2检验结果揭示,不同牛品种的基因型频率差异不显著（P>0.05）。南阳牛群体中不同基因型个体与生长指标间的相关性分析结果显示,AA基因型个体的6月龄体质量显著大于其他基因型个体（P<0.05）,暗示该位点有可能作为南阳牛生长性状辅助选择的标记之一。     

鸟枪法筛选枯草芽孢杆菌基因强启动子及对黄牛GHRL基因的表达

利用鸟枪法通过大肠埃希菌-枯草芽孢杆菌启动子探针载体分离到枯草芽孢杆菌168菌株的103个基因启动子片段,发现1个672 bp的启动子片段P3.4.23,能够在大肠埃希菌和枯草芽孢杆菌高效启动报告基因β-半乳糖苷酶的表达,其酶活性分别达到3 418、2 877 U/mL.相似性分析表明P3.4.23启动子片段具有枯草芽...     

Overlap-PCR克隆秦川牛HCRTR1基因及其在大肠杆菌中的表达

通过Overlap-PCR方法克隆了秦川牛(Bos tarus)的增食欲素受体1(HCRTR1)基因编码区全长,获得1 278 bp编码区全长序列(GenBank登录号:DQ874350),将其克隆至pMD-18T载体上,经测序表明获得的cDNA序列与GenBank公布的序列同源性均为98%.阳性质粒经BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后,将目的片段定向克隆到pET32a( )表达载体上,转化B121(DE3)感受态大肠杆菌(Escherichia coli),经鉴定正确后,用IPTG诱导目的蛋白的表达.SDS-PAGE表明,秦川牛HCRTR1基因在大肠杆菌中没有表达,进一步生物信息学分析表明,HCRTR1基因的表达产物为具有7个跨膜螺旋的G蛋白偶联受体,复杂的蛋白质结构使得其不能在原核表达系统中获得表达.     

Overlap-PCR克隆秦川牛HCRTR1基因及其在大肠杆菌中的表达分析

通过Overlap-PCR方法克隆了秦川牛的HCRTR1基因编码区全长，获得1278 bp编码区全长序列，将其克隆至pMD-18T载体上，经测序表明获得的cDNA序列与GenBank公布的序列同源性均为98%。提取阳性克隆的质粒经BamHI和HindⅢ双酶切后，回收到1278 bp的目的片段，定向克隆到pET32a（+）表达载体上，连接产物转化Bl21(DE3)感受态大肠杆菌，对长出的菌落进行菌落PCR和质粒酶切鉴定正确后，用IPTG诱导目的蛋白的表达。SDS-PAGE表明秦川牛HCRTR1基因在大肠杆菌中不表达，生物信息学分析表明，HCRTR1基因的表达产物为具有7个跨膜螺旋的G蛋白偶联受体，可能是此类蛋白在原核系统的表达将会影响细菌本身存活，因此原核表达系统也成为研究此类蛋白的瓶颈。     

生长抑素基因在动物育种中的应用

生长抑素基因或生长分化因子8(GDF-8),已被公认为是导致出现双肌表现型的因素,基因失活导致肌肉中一系列的突变,使其没有能力调节肌肉纤维的沉淀。这种表型在一些品种如比利时兰牛、皮埃蒙特牛中有很高的发生率。系统发育分析显示,在生长抑素基因家族中存在着对同义突变的正选择压力,在牛、绵羊、山羊上生长抑素基因发生分歧的时间和这些品种中正面选择压力出现的时间都是在近代。迄今为止,据报道,在生长抑素的编码区有9个突变引起了非同义改变,其中3个引起了错义突变,2个在外显子1上,1个在外显子2上。剩余的6个突变位于外显子2和3上,它们使终止密码过早地出现,正是这些突变导致出现双肌表型。而双肌牛品种的管理上存在着像分娩困难等问题,这些问题可以通过遗传控制、基因工程来克服。     

牛BoLA-DRB3基因的多态性与乳房炎相关性初探

利用PCR—RFLP技术对易感乳房炎的奶牛血样24份，不易感染乳房炎的2个黄牛品种南阳牛、秦川牛血样66份共计90个个体进行牛BoL A—DRB3基因第2外显子多态性分析。结果表明：扩增大小为252bp的片段经限制性内切酶BstUI酶切后表现多态，且奶牛AA型个体显著高于黄牛品种，提示BoLA等位基因A作为母牛乳房炎易感性的候选标记具有潜在的有效性。