应用Gibson Assembly方法构建植物表达载体

【目的】构建方便快捷的植物表达载体.【方法】应用Isothermal in vitro recombination system or"Gibson Assembly"方法设计包含片段间20~25 bp互补重叠序列的引物,通过PCR扩增出带有首尾重叠的目的 DNA片段,可将1个或多个片段和线性化的载体一步组装成表达载体.【结果和结论】利用该方法快速构建了多个水稻基因的全长以及部分缺失编码区表达载体.此外,还通过对Gibson Assembly连接产物进行PCR扩增后再连接到载体,提高多DNA片段组装的效率.本方法不受目的片段内部限制性酶切位点的限制,可广泛应用于各种载体的构建.     

一种全长cDNA抑制缩减杂交方法及其水稻诱导表达基因分离的应用

以缩减杂交的原理和SMART cDNA合成方法为基础,开发了一种全长cDNA缩减杂交方法.该方法从微量的2个RNA样品合成全长cDNA,经PCR扩增和在两端连接不同的接头,通过2次缩减杂交获得含有高度浓缩的差异表达的全长或较大的基因片段,克隆后筛选出差异表达的基因.以噻菌灵(Probenazole,PBZ)为诱导剂处理水稻,获得了2个上调表达和1个下调表达基因的较长的cDNA片段.     

RFLP缩减杂交技术的改良与水稻雄性不育细胞质基因组差异片段的克隆

对基因组RFLP缩减杂交技术进行了改良，即用连接成大分子的Driver DNA与Tester DNA杂交、再利用PCR纯化试剂盒对大片段DNA回收率低的原理去除大部分Driver DNA以及与之杂交的非特异性Tester DNA片段.经过PCR扩增和克隆，获得多态性片段，可快速获得在亲本间有差异的分子标记．用该技术对水稻野败型雄性不育细胞质和正常细胞质DNA进行RFLP缩减杂交，获得了2个在不育系细胞质DNA与保持系细胞质DNA间的差异片段。     

水稻组蛋白H2B.7基因的分离和表达模式研究

选取水稻组蛋白H2B的H2B.7基因进行了表达模式分析,发现其在水稻根、茎、叶和穗等组织中为组成型表达,但在激素和胁迫处理时表达模式发生变化,如在2,4-D、α-萘乙酸(NAA)、乙烯以及热激处理时表达水平上调,在激动素(KT)和多效唑处理时表达水平下调,说明水稻组蛋白H2B.7基因的表达在植物内外环境变化时也会相应发...