沙田柚黄龙病病原16S rDNA片段的克隆与序列分析

采集田间表现斑驳症状的沙田柚叶脉,用CTAB法提取总DNA。根据柑橘黄龙病病原16S rDNA的核苷酸序列设计引物P1/P2,进行PCR扩增,获得1条大小为1 167 bp的片段。酶切分析显示,该片段可被切成大小分别约为640 bp和520 bp的2个片段。扩增产物经纯化,与pM D 18-T V ector连接,转化大肠杆菌(E scherich ia coli)DH 5α,筛选克隆重组子。对PCR产物进行测序及序列分析,结果表明,与柑橘黄龙病病原亚洲种16S rDNA的同源性为99%,与非洲种的同源性为97%,与美洲种的同源性为96%。认为,沙田柚的斑驳症状是由黄龙病病原引致的,称之为沙田柚黄龙病。该沙田柚黄龙病病原属于柑橘黄龙病病原亚洲种(L iberobacter as iaticus)中的一个成员。系统进化树分析显示,沙田柚黄龙病病原与中国柑橘黄龙病病原亲缘关系最近,推测是直接来自中国柑橘黄龙病病原。     

4 种观赏百合的组培快繁技术研究

以观赏百合莫娜、黄天霸、巴巴拉、索邦等4个品种的鳞片为材料进行组培快繁技术研究。结果表明:用75%酒精消毒10 s,0.1%升汞消毒10 min,再用无菌水清洗5次的灭菌效果最好,污染率最低;MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L为最佳诱导培养基;MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L为最佳增殖培养基;MS+IBA 0.5 mg/L为最佳生根培养基;蛭石∶黄心土=1∶1为最佳移栽基质。整套组培快繁技术在莫娜、黄天霸、巴巴拉、索邦等4个观赏百合品种中均适用。     

进口原木木种鉴定技术综述

原木在我国木材产业发展过程中具有基础性作用，随着木材加工业的发展，原木进口量逐年上升。目前进口原木存在着进口木种种类多、进口国家多、木种价格差异大、木种鉴定难度大等特点，导致进口商为了追求利益虚报木种、逃避关税等现象越来越严重。文章概述了进口原木的现状与存在问题，重点总结分析了当前木种鉴定方法的优点和缺点，并对今后木种鉴定方向提出了建议。     

南方5省区柑橘黄龙病病原16S rDNA片段的克隆与序列分析

采集了广东、广西、贵州、福建、云南5省区的8个柑橘黄龙病样品,利用黄龙病病原的特异引物对其16S rD-NA片段进行PCR扩增,将其扩增产物纯化、回收,并与 pMD18-T Vector 连接,转化大肠杆菌(Esherichia coli)DH5α,筛选含有黄龙病病原16S rDNA片段的阳性克隆,进行序列测定.利用生物信息学软件对所克隆的序列进行同源性分析和聚类分析.结果表明:来自我国南方5省区的柑橘黄龙病病原16S rDNA的序列与亚洲种(L22532)的同源性为96.9%～98.6%,与非洲种(L22533)的同源性为94.5%～97.1%,与美洲种(AY742824)的同源性为92.5%～94.2%.表明我国南方5省区柑橘黄龙病均属于亚洲种,但在亚洲种内部不同地区的黄龙病病原也发生了微小的变异,其中福建厦门和云南个旧的2个菌株变异较大.     

香蕉细菌性枯萎病菌荧光 LAMP 检测体系的建立

【目的】基于香蕉细菌性枯萎病病原(Ralstonia solanacearum)2号生理小种的特异保守引物和LAMP技术建立一种实时荧光定性检测方法,解决常规PCR定性检测特异性低、灵敏度低、耗时长等问题,实现在1 h内能进行准确高效的定性检测,为加强该病害防控检测和检疫工作提供技术支持。【方法】确定被测基因靶序列,利用Primer软件设计两对内外引物。由两对引物、具有链置换特性的DNA聚合酶、模板DNA、甜菜碱、Mg_2SO_4、反应缓冲液、荧光染料等组成LAMP反应体系,采用不必在反应完开管盖检测的实时荧光LAMP方法,针对该方法对于样品DNA定性检测的灵敏度、特异性及可重复性进行试验。【结果】设计的引物能顺利扩增目标基因,实时荧光LAMP检测体系对于香蕉细菌性枯萎病病原生理2号小种有良好的灵敏度、特异性,该方法可重复性强,灵敏度比普通PCR高10倍以上。【结论】香蕉细菌性枯萎病菌荧光LAMP检测体系检测特异性强、灵敏度高、耗时短、不易污染,效果较好。     

南方5省区柑橘黄龙病病原16αSrDNA片段的克隆与序列分析

采集了广东、广西、贵州、福建、云南5省区的8个柑橘黄龙病样品，利用黄龙病病原的特异引物对其16SrD—NA片段进行PCR扩增，将其扩增产物纯化、回收，并与pMD18-TVector连接，转化大肠杆菌（Esherichia coli）DH5α，筛选含有黄龙病病原16SrDNA片段的阳性克隆，进行序列测定。利用生物信息学软件对所克隆的序列进行同源性分析和聚类分析．结果表明：来自我国南方5省区的柑橘黄龙病病原16SrDNA的序列与亚洲种（L22532）的同源性为96．9％～98．6％，与非洲种（L22533）的同源性为94．5％～97．1％，与美洲种（AY742824）的同源性为92．5％-94．2％．表明我国南方5省区柑橘黄龙病均属于亚洲种，但在亚洲种内部不同地区的黄龙病病原也发生了微小的变异，其中福建厦门和云南个旧的2个菌株变异较大．     

欢迎订阅2008年《华南农业大学学报》

采集了广东、广西、贵州、福建、云南5省区的8个柑橘黄龙病样品，利用黄龙病病原的特异引物对其16SrD—NA片段进行PCR扩增，将其扩增产物纯化、回收，并与pMD18-TVector连接，转化大肠杆菌（Esherichia coli）DH5α，筛选含有黄龙病病原16SrDNA片段的阳性克隆，进行序列测定。利用生物信息学软件对所克隆的序列进行同源性分析和聚类分析．结果表明：来自我国南方5省区的柑橘黄龙病病原16SrDNA的序列与亚洲种（L22532）的同源性为96．9％～98．6％，与非洲种（L22533）的同源性为94．5％～97．1％，与美洲种（AY742824）的同源性为92．5％-94．2％．表明我国南方5省区柑橘黄龙病均属于亚洲种，但在亚洲种内部不同地区的黄龙病病原也发生了微小的变异，其中福建厦门和云南个旧的2个菌株变异较大．     

沙田柚黄龙病病原β-操纵子DNA片段的克隆与序列分析

采集表现斑驳症状的沙田柚叶片,根据柑桔黄龙病特异保守区域β-操纵子序列设计引物,通过对其病叶脉总DNA进行PCR扩增、扩增产物纯化、与pMD18-T Vector连接、转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH 5a菌株、筛选阳性克隆重组子、重组子测序,并将测序结果与柑桔黄龙病病原β-操纵子部分DNA相应序列进行比较.结果表明,引起沙田柚斑驳症状的病原与亚洲柑桔黄龙病原(Liberobacter asiaticum)相应序列的同源率为99%,而与非洲柑桔黄龙病病原的同源率仅为79.9%.因此,从分子水平上证明沙田柚斑驳症状是由黄龙病病原侵染所致,该病原属于亚洲种中的一个成员.