基因工程实验教学中PCR反应条件的正交优化

采用碱裂解法提取大肠杆菌的质粒DNA,检测提取到的DNA浓度和纯度,并以提取的DNA作为PCR反应体系中的模板,采用搜索性正交设计试验法探求PCR反应体系中4个因素(dNTPs、DNA模板、引物和Taq酶)在5个水平上的最适用量,在此基础上,进一步设计细调性正交试验筛选PCR反应的最适条件。结果表明,在20μl PCR反应体系中,DNA模板5 ng/μl,dNTPs 0.25 mmol/L,引物0.6μmol/L,Taq酶1.5 U/μl,Mg2+浓度1.5 mmol/L时,PCR的效果最好。     

外源腐胺对糯米糍荔枝座果的影响

试验研究了腐胺（Put）在不同时期、不同浓度和不同次数喷施对糯米糍荔枝座果的影响。结果表明，以盛花期喷施30－40mg/L的座腐胺1次，对提高糯米糍荔枝的座果率效果最好，而对果实体积和单果重没有明显影响。     

1-甲基环丙烯对高温下香蕉果实后熟的影响

以香蕉果实为试材,研究了1-甲基环丙烯(1-MCP)对高温逆境下香蕉果实后熟生理的影响。结果表明:35℃高温下贮藏的香蕉果实出现了明显的青皮熟现象,而0.5μL/L的1-MCP处理24h后可显著抑制高温下贮藏果实硬度的降低,延缓果皮细胞膜透性的升高,同时有效地延迟了果肉中淀粉酶活性升高、淀粉含量下降及可溶性糖含量上升。1-MCP处理果实于35℃下贮藏9d后移入20℃环境,进一步延缓了这些后熟生理变化。1-MCP和高温均抑制了果皮叶绿素含量下降,因此1-MCP处理减轻了香蕉热害的程度,延长了果实在高温下的贮藏寿命。     

烯效唑促进龙眼砧木实生苗根系发育的研究

本试验研究了烯效唑对龙眼砧木实生苗根系生长发育的促进作用。１－１０ｐｍＳ３３０７浸种，浸根均能促进幼苗根系生长，显著提高根冠比；尤其是幼苗移栽时，Ｓ３３０７能明显促进主根断口处萌发多条侧根，很快恢复生长势；高浓度的Ｓ３３０７则抑制幼苗的生长。     

八氢番茄红素合成酶(PSY2)基因果实特异表达载体的构建

八氢番茄红素合成酶是番茄红素合成的关键酶,通过PCR法获取PSY2基因和E8启动子序列,将目的基因和E8启动子序列构建到植物表达载体pBI101.2中,构建了果实特异表达启动子的八氢番茄红素合成酶基因植物表达载体。并采用PCR、限制性内切酶酶切和序列测定分析法,对重组质粒进行鉴定。结果表明,番茄果实特异性表达PSY2蛋白的重组质粒构建成功;通过农杆菌直接转化技术将其成功转入转化农杆菌LBA4404、EHA105,为下一步PSY2蛋白在番茄果实中特异表达奠定了基础。     

“Julie”芒果采后用氯化钙浸果对后熟的效应

测定果皮颜色和果肉软化的结果表明用氯化钙处理绿熟期的“Julie”芒果可以延缓果实成熟。处理后6天对照的鲜耗率高于处理。处理果的口感评价比对照更能使消费者满意。氯化钙处理延长了果实的货架寿命,对照果货架寿命仅5天,而8%氯化钙处理果则达14天。     

冷害对荔枝果皮膜脂过氧化和保护酶活性的影响

以广东省优良品种‘糯米糍’为试材，研究了荔枝Litchi chinensis果实在冷害温度贮藏过程中果皮膜脂过氧化与保护酶变化规律，结果表明，糯米糍在0℃下21d时果面已经出现水渍状褐斑，褐变指数2．45，果皮细胞相对电导率达到56．4％，货架期仅6h，表明果实已经遭受不可逆的冷害，0℃下14d后果皮超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)和过氧化氢酶(CAT)活性下降，协调紊乱，导致果皮的MDA含量迅速增加，3℃冷藏7-14d的果实SOD、CAT活性维持较高的水平，不表现冷害，28d时出现衰老。     

水稻OsWRKY78与GFP融合基因的拟南芥转化及亚细胞定位(英文)

[目的]确定OsWRKY78蛋白在植物中的定位。[方法]根据GenBank数据库中OsWRKY78全序列设计引物,进行OsWRKY78的RT-PCR扩增,克隆了OsWRKY78基因,将该片段与带绿色荧光蛋白(GFP) 基因的质粒载体pBinGFP重组,并对重组载体进行菌液PCR和酶切验证,最后利用农杆菌介导的花蕾浸泡法将重组载体转化到拟南芥中,对其亚细胞定为进行研究。[结果]试验克隆得到了pBinGFP-OsWRKY78重组载体,经菌落PCR与酶切检测表明构建的表达载体正确,其转化到拟南芥中后得到了转基因植株,荧光显微镜检测结果表明,OsWRKY78基因表达产物主要定位在细胞核中。[结论]该研究结果为深入研究OsWRKY78基因的功能及其在相关信号传导中的作用奠定了基础,也为进一步研究OsWRKY78基因与褐飞虱之间的关系提供了理论依据。     

响应曲面法优化超声波提取红肉蜜柚红色素工艺

[目的]寻找红肉蜜柚果实红色素的最佳提取方案。[方法]以红肉蜜柚果实为材料,在单因素试验的基础上,利用响应曲面法对果肉红色素超声提取工艺参数进行优化研究。选择超声浸提时间、浸提温度、料液比为自变量,以红色素提取液在471 nm处吸光度为响应值,采用Box-Behnken设计方法,模拟得出了红肉蜜柚红色素提取的回归方程。[结果]石油醚为提取剂时,超声辅助提取使红肉蜜柚果肉红色素吸光度增加106.1%;提取的最佳工艺条件为以石油醚为浸提溶剂,浸提温度22℃,浸提时间32 min,料液比1∶4.3 g/ml,此时红肉蜜柚果实红色素提取液的吸光度为1.312。[结论]研究可为红肉蜜柚红色素的开发利用提供参考依据。     

红肉火龙果气生根染色体制片优化及核型分析

以红肉火龙果的气生根为试材,研究气生根长度、采样时间、预处理方法、解离时间和染色方法等对红肉火龙果气生根根尖细胞染色体制片效果的影响,以优化的制片技术制片并进行核型分析。结果表明:10:30时段取长度5mm以下的幼嫩气生根,用0.1%秋水仙素常温预处理2h,应用双低渗法使染色体分散,常温下1mol/L HCl解离50min或60℃下解离20min,20%改良苯酚-品红染色液染色20min,可以得到最佳的制片效果,用中性树脂制成永久装片。染色体核型分析表明,红肉火龙果的染色体数目为11对,最长染色体/最短染色体为1.63,核型公式为2n=2x=22=22m,核型不对称系数为54.29%,核型属1A类型。