1株广西鸡H_9亚型禽流感病毒的分离鉴定和HA基因分析

从广西某鸡场的发病鸡群中采样病料,接种10日龄SPF鸡胚后分离得到1株病毒,并命名为GL株,经微量血凝和微量血凝抑制检验为H9亚型禽流感病毒。测序结果分析显示,HA蛋白裂解位点的氨基酸序列为RSSR↓GLF,与低致病性禽流感病毒的基序一致。HA基因分型结果表明,GL株属于4.2.5分支。BLAST结果显示,HA基因序列与BJ0309株相似性最高,达99%。相似性比较结果表明,HA基因、蛋白与近年来国内流行的GX55等4.2.5分支H9亚型禽流感病毒相似性较高,分别为94.1%~98.8%和96.4%~99.3%,而与国内常用疫苗株SS、F、SD696等4.2.3分支H9亚型禽流感病毒相似性较低,分别为88.8%~89.8%和91.2%~92%。由此可见,分离的GL株属于4.2.5分支,与近年来国内流行株类似,并与常用疫苗株存在了一定的差异。     

灭球液与复方SM_2防治鸡球虫病的疗效比较

实验室及几年来大量生产实际应用均证明，由华南农业大学实验兽药厂生产的灭球液，对防治鸡球虫病疗效显著。由于该药的主要成分是复方SM2，为了验证经过研制配成的灭球液溶液剂与复方SM2粉剂在给予相同剂量的条件下，其对鸡球虫病的治疗效果是否存在差异，特进行了本试验。一、材料与方法1．供试鸡：艾维茵商品代鸡苗，由广东正大种鸡场提供。饲养在严格消毒的环境中，保证不从环境中感染球虫。2．饲料；广东省农科院畜牧科学研究所特别生产的小鸡粉料，不含任何药物添加剂。3．试验药物：灭球液，由华南农业大学实验兽药厂生产，批号为9…     

广东省猪繁殖与呼吸综合征病毒和限制性片段长度多态性分析

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)属动脉炎病毒科动脉炎病属成员,包含7个开放阅读框(ORFs),目前有两个血清型,即欧州型和美州型,而美洲型毒株又可分为多个亚型.     

用套式PCR方法对几种猪用冻干疫苗的PCV2检测

参照Genbank已发表的猪圆环病毒2型的基因序列,取其比较保守的基因片段ORF2,利用引物设计软件Oli-go5.0设计两对PCV2型特异的引物,其中第一对引物扩增跨度为ORF2全基因片段,长度为702 bp,第二对引物扩增ORF2中间的一个小片段,跨度大小为494 bp.首先用第一对引物扩增阳性DNA,阳性DNA的浓度从10-1稀释到10-11,然后以第一次PCR产物为模板,用第二对引物进行PCR,发现这种套式PCR的方法比用普通PCR灵敏度提高102倍.同这种套式PCR方法对广东省市场上出售的几种猪用弱毒疫苗进行猪圆环病毒2型检测,结果发现这几种疫苗全部为阴性,本实验说明目前广东市场上出售的弱毒疫苗在制作过程中没有受到PCV2的污染,解除了广大猪场主的顾虑.     

斑点杂交法检测猪传染性胸膜肺炎

将位于猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP) apx A毒素基因 3′端的长为 442 bp的DNA片段作为模板制备出地高辛标记的 APP核酸探针。敏感性检测结果表明 ,该探针对 APPDNA的最低检出量为 1 .8ng。特异性检测结果表明 ,该探针能与 APP1～ 1 0血清型标准菌株 DNA抽提物发生特异性杂交反应 ,而与多杀性巴氏杆菌A型和 B型、链球菌、支气管败血波氏杆菌、肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌 DNA进行的杂交反应均为阴性。应用该探针对临床 6份阳性病料 ,1 1份纤维渗出性病料进行检测 ,结果阳性病料全部检出 ;而对于 1 1份纤维渗出性病料 ,斑点杂交检出 4份是阳性 ,比 PCR方法 6/ 1 1的检出率要低 ,但仍表明所制备的探针用于 APP的检测是一种比较敏感、特异的诊断方法。     

口蹄疫病毒3ABC基因的克隆与测序

参考 Gen Bank中发表的猪源 O型口蹄疫病毒 3 ABC的基因序列 ,设计一对特异引物 ,以猪源 FMDV/ O/ CC株基因组 RNA为模板 ,RT-PCR扩增 3 ABC基因 ,并克隆到 p MD1 8-T载体中。测序结果显示 ,FMDV/ O/ CC株 3 ABC基因 c DNA长 1 2 81 bp,编码为 42 7个氨基酸残基组成的多肽。核苷酸序列和推导氨基酸序列同源性比较发现 ,FMDV/ O/ CC株和 FMDV/O/ TW/ 99株 3 ABC基因亲缘关系密切。核苷酸同源性为 97% ,推导氨基酸序列同源性为96.3 %。     

1株广东鸡源新城疫病毒的分离鉴定和毒力基因分析

从广东粤东地区某商品蛋鸡场的发病鸡群中分离到1株病毒（YS株）,经血凝和血凝抑制试验确定为新城疫病毒（NDV）.对该分离株的F蛋白氨基酸序列的分析结果表明,其F0裂解位点的氨基酸序列为1nR-R-Q-K-R-F117,且含有101K和121V,符合典型NDV强毒株的分子特点.遗传分析结果显示分离株属于基因Ⅶd亚型.F和HN基因的氨基酸相似性分析表明,分离株与基因Ⅶ型NDV Chicken/China/Shandong/02/2010株的相似性最高,均达到99％,而与常用疫苗株B1、V4、Clone30、Mukteswar和La Sota的相似性则较低,分别在86.8％～ 90.4％和87.2％～88.3％之间,说明分离株与经典的NDV毒株存在一定的差异.     

伪狂犬病毒PK/gG/GFP重组转移载体的构建和表达

在构建了含伪狂犬病毒(pseudorabies virus，PRV)湖北株部分PK基因和gG基因转移载体的基础上，利用平端连接的方法将绿色荧光蛋白(GFP)的基因表达盒插入到缺失的部分，并在下游引入了1个多克隆位点，构建了重组转移载体KGDF。用限制性内切酶鉴定重组转移载体KGDF。根据质粒EGFP-C1中的GFP基因序列设计1对引物鉴定GFP表达盒插入的正确性。用脂质体转染试剂盒将KGDF和PRVFIB的基因组或病毒共转染BHK-21细胞，在荧光显微镜下将出现病变的荧光斑挑出得到重组病毒。将重组病毒扩大培养后提取基因组鉴定重组病毒中的GFP基因，并通过挑取病变的荧光斑的方法纯化重组病毒。     

猪伪狂犬病诊断要点及方法

嘉宾:崔尚金(中国农科院哈尔滨兽医研究所研究员)根据临床症状及流行病学特点分析可对本病作出初步诊断,但要确诊必须进行实验室检查。伪狂犬病的实验室诊断方法发展很快,正向快速、灵敏、准确的方向迈进,现已建立了多种实验诊断方法,特别是近年来在鉴别诊断上也取得了长足的进     

猪伪狂犬病的临床症状与病理变化

●妊娠母猪: 1.　发生流产、死胎或木乃伊胎,产弱仔,2～3d死亡; 2.　流产率可达50%; 3.　母猪可带毒。 ●4 月龄左右的猪:1.　 轻度发热,有呼吸道症状,有的出现腹泻,可恢复;2.　 有部分病猪可出现神经症状而死亡。 ●新生仔猪与4 周龄以内的仔猪: 1.　突然发病,体温升高; 2.　 病猪精神萎顿、厌食、有呕吐或腹泻,出现神经症状; 3.　病程1～2d,死亡率很高。 ●成年猪: ;一般呈隐性感染,有时可见呼吸道症状。 嘉宾:崔尚金(中国农科院哈尔滨兽医研究所研究员) 猪伪狂犬病的潜伏期一般为3 ～11d。临床症状…