几种玉米叶片总RNA提取方法的比较研究

本研究以玉米(B73)叶片为实验材料,比较了Trizol法、CTAB法和改进的SDS酚法提取后RNA的质量。琼脂糖凝胶电泳结果表明,CTAB法和Trizol法提取物中含有大量多糖,RNA质量不足以进行后续的研究工作,而通过加入适量的乙醇等实验步骤改进的SDS酚法,提取的RNA纯度高,电泳效果好。通过特异引物扩增试验发现,利用改进的SDS酚法能扩增出预期的目的基因片段,可很好的应用于基因克隆等后续分子生物学实验。     

混合盐碱胁迫对五种类型烟草苗期叶片丙二醛含量的影响

以五种不同类型的烟草品种：白肋TN90。烤烟NC89，延晒三号，河南香料，黄花烟为材料，设置三种混和盐碱梯度，3个处理时间24h，48h，72h，分别对五类烟草进行盐碱胁迫处理。测定其苗期叶片内丙二醛（MOA）含量。结果表明：随着不同处理时间的延长和混合盐碱浓度的增加，五类烟草品种的丙二醛含量均呈现上升的趋势，在相同的...     

不同盐碱草地羊草叶片渗透调节物质含量和抗氧化酶活性的比较

对松嫩平原不同盐碱化草地的羊草种群叶片游离脯氨酸、甜菜碱含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、过氧化物酶(POD)活性的季节变化进行测定。结果表明:土壤电导率是影响叶片内甜菜碱含量、CAT活性变化的主要因子;土壤pH是影响叶片内脯氨酸含量和SOD、POD活性变化的主要因子。在同一取样时期,随着样地盐碱化程度增加,叶片内渗透调节物质含量和抗氧化酶活性均与各自主要因子呈正相关。小分子渗透调节物质的大量积累及抗氧化酶系统的调节,是羊草种群对盐碱化适应的重要生理响应。     

羊草 CDPK 基因全长 cDNA 的克隆及原核表达

【目的】通过对羊草 Leymus chinensis CDPK 基因进行克隆及原核表达,为进一步研究CDPK基因的功能,探讨羊草适应生境分子机制提供理论基础.【方法】用RT-PCR结合RACE技术克隆了羊草钙依赖蛋白激酶（CDPK）基因,命名为Lc-CDPK;构建了羊草CDPK基因的原核表达载体,转化到大肠埃希菌Escherichia coli BL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,经SDS-PAGE分析CDPK蛋白的表达情况.【结果和结论】羊草CDPK基因全长cDNA序列为1 704 bp,包括1个1 647 bp的开放阅读框,编码548个氨基酸,从第81~339个氨基酸构成了具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化活性的S-TKc结构域,有4个保守的EF手型结构域;编码区核苷酸序列与其他禾本科作物比对后发现,与小麦CDPK基因的相似性最高,相似度为96%;IPTG诱导表达出相对分子质量为61 350的融合蛋白,表达产物大小与预计理论值相符.诱导7 h蛋白表达量最高,表达量占菌体总蛋白的49.1%.     

玉米淀粉分支酶SBEIIb基因片段酵母双杂交诱饵载体

为探寻玉米淀粉分支酶(starch branching enzyme,SBEⅡb)与其互作蛋白的作用位点,构建了酵母双杂交诱饵载体。根据CDD和NCBI对SBEⅡb蛋白氨基酸序列的分析,确定玉米SBEⅡb的功能域及非功能域,PCR扩增功能域及非功能域基因的目的片段,经回收纯化,用相同的限制性内切酶将其与载体pGBKT7进行双酶切后,分别将目的基因片段与载体pGBKT7进行连接。构建了酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-SBEⅡb-X(X=1,2,3,4,5,6),转化酵母菌AH109的菌液,OD600值在0.8以上,证明诱饵载体pGBKT7-SBEⅡb-X对酵母菌AH109没有毒性作用;转化诱饵载体后的酵母菌AH109,在SD/-Trp/X-α-Gal平板上长出白色菌落,在SD/-His/-Trp/X-α-Gal、SD/-Ade/-Trp/X-α-Gal平板上不能生长,排除了pGBKT7-SBEⅡb-X具有自激活宿主菌AH109的作用。构建的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-SBEⅡb-X(X=1,2,3,4,5,6),其表达对酵母细胞无毒性及对报告基因无自激活作用,可为下一步分析SBEⅡb与其互作蛋白的作用位点奠定基础。     

RNAi机制及在植物中应用的研究概述

RNA干扰即RNAi,通过外源或者是内源的dsRNA在细胞内诱导同源序列基因表达受到抑制的现象.自从RNAi现象在20世纪90年代中期被发现以来,很快就成为生物化学与分子生物学研究的焦点.文中简要介绍了RNAi在不同水平上的主要作用机制、特点和关键因子的结构与作用,以及在植物抗逆、功能基因、植物育种、植物抗病、植物营养、果实保鲜等方面的应用研究,以期为RNAi在植物中的深入研究提供参考.